不同采收期范文

不同采收期范文（精选10篇）

不同采收期 第1篇

五味子中含有木脂素、挥发油、多糖及有机酸等成分[2], 我们拟对不同产地、不同采收期的五味子进行全成分研究, 以期从化学成分角度为五味子的适宜采收期、适宜种植区域的确定提供依据。本文是对不同产地、不同采收期五味子中有机酸含量的比较研究。

1仪器与试药

Waters型E2695高效液相色谱仪;KQ-250DB型数控超声波清洗器;电热恒温水浴锅;瑞士METTLER十万分之一分析天平;FA1004B电子天平。

原儿茶酸 (批号:110809-201205) , 柠檬酸 (批号:111679-200401) 均购自中国食品药品检定研究院;甲醇、乙腈为色谱纯, 娃哈哈纯净水, 其他试剂为分析纯。不同产地及采收期五味子, 经由辽宁中医药大学药学院王冰教授鉴定为五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.的干燥成熟果实。

2方法与结果

2.1原儿茶酸含量测定

2.1.1对照品溶液制备精密称取对照品适量, 配制成浓度为0.029 28mg/mL的原儿茶酸对照品溶液, 备用。

2.1.2供试品溶液制备取五味子粉末 (过60目筛) 约0.5g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇25mL, 密塞, 称定质量, 加热回流2h, 放冷, 密塞, 再次称定质量, 用甲醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 经0.45μm微孔滤膜滤过, 即得。

2.1.3色谱条件Ecosil C18色谱柱 (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:甲醇-0.5%冰醋酸 (15∶85) ;检测波长260nm;流速0.8mL/min;进样量10μL;柱温30℃, 见图1。

2.1.4线性关系考察分别进样5、10、15、20、30μL, 按色谱条件进行测定, 以进样量 (μg) 为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线, 得回归方程为Y=4 100 451.374X-4 754.946, r=0.999 9。结果表明, 原儿茶酸对照品在0.146 4~0.878 4μg与峰面积有良好的线性关系。

2.1.5精密度试验精密吸取原儿茶酸对照品溶液, 按“2.1.3”项下色谱条件连续进样6次, 测得原儿茶酸的峰面积RSD小于3%, 表明仪器性能良好。

2.1.6稳定性试验精密吸取同一供试品溶液, 分别在0、2、4、8、12、24h, 按“2.1.3”项下色谱条件进样分析, 结果原儿茶酸峰面积的RSD小于3%, 表明样品在24h之内稳定。

2.1.7重复性试验取同一五味子 (辽宁营口) 粉末6份, 各0.5g, 精密称定, 按“2.1.2”项下制备供试品溶液, 按“2.1.3”项下色谱条件进样分析并计算含量, 结果原儿茶酸含量的RSD=2.33%, 表明方法重复性良好。

2.1.8加样回收率试验取已知含量 (0.011 6%) 的五味子粉末0.25g, 共6份, 加入0.029 28mg/mL的原儿茶酸对照品溶液1mL, 按“2.1.2”项下方法操作, 并按“2.1.3”项下色谱条件测定, 结果见表1。

(n=6)

2.1.9样品测定取不同产地及不同采收期五味子饮片, 按照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液, 按“2.1.3”项下色谱条件测定, 记录峰面积并计算样品中原儿茶酸的含量, 结果见表3、表4。

2.2柠檬酸含量测定

2.2.1对照品溶液制备精密称取柠檬酸对照品35.2mg, 加0.05mol/LNaOH溶液溶解, 定容于5mL容量瓶中, 备用。

2.2.2供试品溶液制备[3]精密称取五味子药材粉末0.25g, 置锥形瓶中, 精密加入25mL 0.05mol/L NaOH溶液, 室温放置15min后, 超声30min, 滤过, 备用。

2.2.3色谱条件Ecosil C18-AQ色谱柱 (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:乙腈-15mmol/L磷酸二氢钾缓冲盐溶液3∶97 (磷酸调pH=3) ;检测波长210nm;流速1mL/min;进样量5μL;柱温35℃, 见图2。

2.2.4线性关系考察分别进样1、3、5、7、9μL柠檬酸对照品溶液, 依上述色谱条件进行测定, 以进样量为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线, 回归方程为Y=72 411X-16 223, r=0.999 9。结果表明柠檬酸在7.04~63.36μg与峰面积有良好的线性关系。

2.2.5精密度试验精密吸取柠檬酸对照品溶液, 按“2.2.3”项下色谱条件连续进样6次, 测得柠檬酸的峰面积RSD小于3%, 表明仪器性能良好。

2.2.6稳定性试验精密吸取同一供试品溶液, 分别在0、2、4、8、12、24h, 按“2.2.3”项下色谱条件进样分析, 结果柠檬酸峰面积的RSD小于3%, 表明样品在24h之内稳定。

2.2.7重复性试验取同一五味子 (辽宁营口) 粉末6份, 各0.5g, 精密称定, 按“2.2.2”项下制备供试品溶液, 按“2.2.3”项下色谱条件进样分析并计算含量, 结果柠檬酸含量的RSD=2.12%。表明方法重复性良好。

2.2.8加样回收率试验取已知含量 (16.79%) 的五味子粉末0.1g, 精密称定, 共6份, 分别加入7.04mg/mL柠檬酸对照品2.5mL, 按“2.2.2”项下方法操作, 并按“2.2.3”项下色谱条件测定, 结果见表2。

2.2.9样品测定取不同产地及不同采收期五味子饮片, 按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液, 按“2.2.3”项下色谱条件测定, 记录峰面积并计算样品中柠檬酸的含量, 结果见表3、表4。

由表3可知, 不同产地的五味子原儿茶酸和柠檬酸含量存在差异, 原儿茶酸含量在0.0085%~0.0176%, 柠檬酸在14.53%~18.54%, 其中原儿茶酸和柠檬酸含量均以辽宁东部 (丹东、本溪) 一带产五味子较高。

由表4可知, 本溪产地不同采收期的五味子中原儿茶酸和柠檬酸含量差异不大, 原儿茶酸含量均在0.01%左右, 柠檬酸含量在18.0%左右。

3讨论

以甲醇-0.5%冰醋酸为流动相, 选用不同比例 (25∶75、20∶80、15∶85) 、不同流速 (0.6、0.8、1.0mL/min) 进行多次试验, 结果表明甲醇-0.5%冰醋酸比例为15∶85, 流速为0.8mL/min时, 原儿茶酸与其他组分分离良好。选用乙腈-15mmol/L磷酸二氢钾缓冲盐溶液为流动相测定柠檬酸含量, 改变流动相比例 (3∶97、2∶98、1∶99) 及柱温进行比较研究, 结果表明乙腈-15mmol/L磷酸二氢钾缓冲盐溶液比例为3∶97、柱温35℃时, 柠檬酸色谱峰峰形较好。

实验比较了不同产地、不同采收期五味子中有机酸含量的差异, 结果表明五味子中有机酸含量较高, 是五味子“味酸”的物质基础。中药中有机酸具有一定的药理作用, 如原儿茶酸和柠檬酸均具有抑制血小板聚集的作用[4], 原儿茶酸还有抗氧化的作用[5]。研究表明产于辽宁丹东、本溪等辽宁东部山区的五味子有机酸含量较高, 适合五味子栽培, 9月份是五味子的适宜采收期。

摘要：目的:通过测定不同产地及不同采收期五味子中有机酸的含量, 为明确五味子的适宜产地及适宜采收时间提供依据。方法:Ecosil C18-AQ色谱柱 (250mm×4.6mm, 5μm) ;以甲醇-0.5%冰醋酸 (15∶85) 为流动相, 体积流量为0.8mL/min, 检测波长260nm, 测定原儿茶酸的含量;以乙腈-15mmol/L磷酸二氢钾缓冲盐溶液3∶97 (磷酸调pH=3) 为流动相, 体积流量为1mL/min, 检测波长210nm, 测定柠檬酸的含量。结果:不同产地五味子中原儿茶酸和柠檬酸含量差异明显, 原儿茶酸含量为0.008 5%0.017 6%, 柠檬酸含量为14.53%18.54%;不同采收期五味子中原儿茶酸和柠檬酸含量差异不大。结论:辽宁丹东、本溪等辽宁东部山区的五味子有机酸含量较高, 9月份是五味子的适宜采收期。

关键词：五味子,HPLC,有机酸,不同产地,不同采收期

参考文献

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不同采收期 第2篇

目的 比较同一产地不同采收时期白术挥发油及含量的动态变化，确定白术的最佳采收时期，为中药材白术的质量控制提供科学依据。方法 采用超临界CO2萃取白术中挥发油成分，并利用气相色谱质谱联用技术对其进行研究。结果 10月底、11月初时期白术的挥发油总含量和苍术酮含量最高。结论 湖南产白术的最佳采收时期为10月底、11月初。

〔Abstract〕 Objective To compare the dynamic changes of the content and constituents of volatice oil from Atractylodes macrocephala koidz in different gathering times, determine the best gathering time limit, and provide a basis for quality control of Atractylodes macrocephalakoidz. Methods Volatice oil was extracted from Atractylodes macrocephala koidz with the supercritical-CO2 fluid extraction (SFE-CO2) analyzed it#39;s chemical constituents. Results The content of volatice oil from Atractylodes macrocephala koidz gathered in the last ten days of October and first ten days of November was the highest. Conclusion The best gathering periods of Atractylodes macrocephala koidz are the last ten days of October and first ten days of November.

〔Key words〕 Atractylodes macrocephala koidz; gathering period; volatile oil; SFE-CO2;    extraction; GC-MS    白术为菊科植物白术Atractylodes macrocephala koidz 的干燥根茎，性温，味苦[1]，具有健脾益气，燥湿和中的功效。主治脾胃气弱，泄泻，汗出，胎动不安等。主要产于浙江、安徽、湖南、湖北、江西、四川等地，多为栽培[2]。其主要有效成分为挥发油，油中成分复杂，以苍术酮(atractylon)的含量最高。产地不同挥发油成分和含量存在差异已有报道[3]，而同一产地不同采收时间白术挥发油成分和含量的动态变化尚很少研究。本文采用超临界CO2萃取白术中挥发油成分，结合气相色谱质谱联用技术分析了湖南平江所产6个白术样品的干燥根茎（从10月11日至12月1日隔10 d采收1次）中挥发油成分。为确定白术的最佳采收时期，保持药材的质量稳定，科学地指导白术药材生产基地的建设提供依据和参考。

1 实验材料

1.1  白术来源

样品编号1-6号分别为10月11日，10月21日，11月1日，11月11日，11月21日，12月1日采自湖南平江同一种植地块，见表1。

1.2  仪器

HA121-50-01型超临界萃取装置(江苏南通华安超临界萃取有限公司)；气相色谱-质谱联用仪HP6890/5973型（美国）；ISO9001型分析天平（南京庚辰科学仪器有限公司）；DHG-9030A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。

2 方法与结果

2.1  方法

2.1.1  挥发油的提取  采用超临界CO2萃取白术挥发油成分。设定分离器Ⅰ的压力为7～8 MPa，温度为35 ℃。分离器Ⅱ的压力为6～7 MPa，温度为30 ℃。运用正交试验所得的最佳工艺即萃取压力30 MPa，温度40 ℃，流量25～30 L/h下萃取90 min。称取各样品干燥白术粉末（过20～30目筛）200 g，装入1 L萃取罐内，按“CO2气瓶→冷却系统→高压泵→萃取罐→分离器Ⅰ→分离器Ⅱ→循环”的流程进行超临界CO2萃取。从分离器Ⅰ和分离器Ⅱ收集并合并提取物，用适量正己烷充分溶解，离心过滤，以挥发油体积计算得率。

不同采收期 第3篇

关键词：条斑紫菜；游离氨基酸；采收期；栽培品系

中图分类号： S917.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）07-0334-04

紫菜属（Pyropi）是一类原始大型红藻，生长分布范围广泛，其经济种类条斑紫菜和坛紫菜是我国重要的栽培海藻。条斑紫菜是属于原红藻纲、红毛菜科的一类海洋大型藻类，其生活史由宏观的叶状体（配子体）阶段和微观的丝状体（孢子体）阶段循环完成[1-2]。1953年，Kurogi开始在实验室内培养丝状体获得壳孢子，并由壳孢子得到幼叶状体[3-4]。20世纪50年代末，国外学者陆续提出紫菜的“种”与栽培性状的概念，由此建立了紫菜人工栽培技术，条斑紫菜选育研究也得到广泛发展。1969年，Miura经过多年选育，获得具有稳定遗传性状的栽培品种——奈良轮条斑紫菜（P. yezoensis f. narawaensis）。其后，通过单倍体育种方法成功培育出色泽优、产量高的条斑紫菜新种质晓光，成为20世纪90年代日本盛行的条斑紫菜栽培品种[5]。我国藻类学者在20世纪80年代初，基本延袭这一方法选育成1个长型条斑紫菜品种[2]。目前，单倍体育种技术有了长足发展，并通过种内、种间杂交、定向培育、诱变育种等技术手段，开展了大量的条斑紫菜种质改良、新品系研发等。

条斑紫菜属于一类风味食品，除对产量与形态等基本特征进行必要描述[6]、对其叶绿素荧光特征、脂肪酸与挥发物的组成含量等开展研究外[7-11]，评价一个栽培品系的风味特征是工作重点之一，可以反映其食用品质与商业价值。风味物包括游离氨基酸、5′-核苷酸、还原糖与有机酸等一系列物质[12]。条斑紫菜游离氨基酸以Glu、Ala、Asp、Arg、Tau等呈味氨基酸含量最高，以体现其醇厚的风味[13]。游离氨基酸成分与含量不仅与条斑紫菜的种质有关[13]，而且与其栽培环境及采收时间也有一定的联系[13-16]。本研究以包括杂交品系、高光强胁迫筛选品系、诱变选育品系、自然选育品系与栽培品系在内的7个条斑紫菜品系为材料，测定其在采收期前期、中期与后期的游离氨基酸含量，分析各品系游离氨基酸组成与含量变化特征，为条斑紫菜各栽培品系的评价研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试材料

在江苏南通紫菜栽培区，分别于2013年1月1日（前期）、2月28日（中期）、3月28日（后期）采集各条斑紫菜品系（表1）；使用海水清洗藻体，并剔除杂藻和藻体基部，快速过纯水去除盐分；藻体低温快速风干，-20 ℃保存。

1.2 游离氨基酸含量的测定

样品研磨，过100目筛；精确称取藻粉0.30 g，加入体积分数75%的乙醇50 mL，100 ℃水浴15 min，40 ℃真空旋转蒸干， 重复上述步骤1次；用适量pH值为2.2的柠檬酸缓冲液

对照条斑紫菜主产区良种栽培品系江苏省海洋水产研究所

溶解，3 000 r/min 离心5 min；取上清，定容至50 mL，过滤备用；采用Agilent HPLC 1200型自动进样器对氨基酸标准品和样品进行OPA-FMOC自动在线衍生，样品经OPA一级衍生与FMOC二级衍生后上氨基酸专用HPLC色谱柱，根据 Agilent 氨基酸测定手册进行测定，面积归一法进行定量。标准品采用9、90、900 pmol 3个浓度。

1.3 数据分析

采用Excel与SPSS 19.0软件对相关数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 条斑紫菜游离氨基酸的组成

检测7个条斑紫菜品系采收期前、中、后期共21个试样，均检出16种游离氨基酸，包括Thr、Tyr、Val、Met、Phe、Ile和Leu 7种必需氨基酸，His和Arg 2种半必需氨基酸和Ala、Asp、Glu、Ser、Gly、Cy2、Pro 7种非必需氨基酸（图1）。

由表2可见，21个试样中，游离氨基酸总含量在48.71～62.05 mg/g之间；前期的总游离氨基酸以Y-H002最高，含量为56.87 mg/g，以Y-008最低，含量为50.83 mg/g；中期以苏连最高，含量为62.05 mg/g，以对照最低，含量为 53.69 mg/g；后期以Y-H002最高，含量为58.86 mg/g，以对照最低，含量为48.71 mg/g。采收前、中、后期游离氨基酸总含量的平均值，苏通最高，Y-H002次之，对照最低。

16种游离氨基酸中，以Ala、Arg、Glu与Asp 4种呈味氨基酸含量较高，总含量在36.05～53.96 mg/g之间，占总游离氨基酸的69.11%～86.47%，其中，Ala占总游离氨基酸含量的23.4%～32.79%，Arg占23.51%～32.65%，Glu占951%～18.94%，Asp占6.68%～10.05%。7个品系4种呈味氨基酸总含量中，前期以对照最高，总含量为45.51 mg/g，其次为苏通，总含量为45.05 mg/g，Y-H002最低，总含量为41.70 mg/g；中期以苏通最高，总含量為53.96 mg/g，其次为Y-H002，总含量为51.81 mg/g，对照最低，总含量为42.97 mg/g；后期以苏通最高，总含量43.60 mg/g，其次为Y-2011，总含量为43.84 mg/g，对照最低，总含量为36.05 mg/g。

由表3可见，16种游离氨基酸中必需氨基酸含量丰富，包括7种必需氨基酸和2种半必需氨基酸，含量在21.3～

表3 呈味氨基酸、必需氨基酸和半必需氨基酸的含量与占比

品系前期中期后期

ABABABABABAB

含量（mg/g）占比（%）含量（mg/g）占比（%）含量（mg/g）占比（%）含量（mg/g）占比（%）含量（mg/g）占比（%）含量（mg/g）占比（%）

Y-H00241.7073.3225.9645.6551.8185.5926.2543.3642.7572.6231.3653.27

苏通45.0480.5523.0741.2653.9686.4725.3140.5543.6074.8229.2050.10

苏连44.0279.3223.3942.1449.2479.3527.4044.1642.7472.8131.0252.83

Y-201142.6882.3221.3041.0849.8981.2626.9243.8543.8475.0629.5850.65

苏研44.3378.2825.4844.9948.0477.6725.6641.4942.0773.4629.5751.63

Y-00841.9482.5121.3441.9848.6679.6827.7245.3838.2569.1129.3152.95

对照45.5183.6722.5841.5242.9780.0322.8142.4936.0574.0024.4450.18

注：A代表呈味氨基酸；B代表必需氨基酸和半必需氨基酸；占比表示此类氨基酸占总游离氨基酸的质量分数。

31.36 mg/g之间，占总游离氨基酸的40.55%～53.27%；后期的必需氨基酸含量均超过50%，且明显高于前期与中期。

2.2 条斑紫菜采收期呈味氨基酸含量的变化

由图2可见，除对照品系外，其他供试品系游离氨基酸总含量均在条斑紫菜的采收中期最高，其次为采收后期，采收前期最低。由图3可见，4种主要呈味氨基酸Ala、Arg、Glu与Asp的含量组成随采收期的变化各不相同，7个条斑紫菜品系中，Ala含量均在采收中期达到最高，采收后期最低；Arg含量未表现出明显变化规律；除对照外，Glu与Asp含量均在采收中期达到最高；但采收前期与后期的含量有差异，除Y-2011外，其余品系在采收前期的Glu含量比后期高，而除苏连外，其余品系采收后期样品的Asp含量比前期高。

3 结论与讨论

3.1 条斑紫菜游离氨基酸含量与组成特征

海区间水温、营养盐水平的差异会对条斑紫菜的生长产生不同的影响[14-15]，再加上种质与采收期各不相同，条斑紫菜游离氨基酸总量差异较大，如日本报道紫菜中游离氨基酸总量在25～50 mg/g之间[15]，而国内有报道在20～50 mg/g之间[17-18]。本试验7个品系的条斑紫菜试样均采自海门辐射沙洲同一个海区，避免了因海区不同造成的游离氨基酸含量差异，测得的游离氨基酸总量在48.71～62.05 mg/g之间，与李瑞霞等的试验结论[17]差别较大，可能与样品的处理方法有关。

Glu、Asp、Arg、Ala是条斑紫菜重要的呈味氨基酸[17]，其中，Ala与Glu是影响紫菜风味的重要氨基酸[12，19]。试验结果表明，这4种氨基酸在条斑紫菜中含量最高，总含量在3605～53.96 mg/g之间，占总游离氨基酸的69.11%～8647%，符合条斑紫菜强烈的口感特征。Yoshie等對8种日本产条斑紫菜干制品中的游离氨基酸含量进行分析，结果表明，Ala、Glu、Asp含量分别在3.08～16.02、3.22～18.44、066～2.82 mg/g之间[20]。纪明侯等对青岛产条斑紫菜中游离氨基酸进行检测，结果显示，高肥区Ala、Glu、Asp含量分别在7.3～30.2、2.9～9.3、0.5～2.7 mg/g[14]。本试验结果表明，7个品系中，Ala、Glu、Asp含量分别在11.40～19.42、4.63～1163、3.59～5.28 mg/g之间，Asp含量明显高于Yoshie等和纪明侯等的测定结果，Ala与Glu含量与Yoshie等和纪明侯等的测定结果相当，最低值均高于Yoshie等和纪明侯等的测定结果最低水平。

游离氨基酸总含量在采收前期以Y-H002与苏研最高，中期以苏通与苏连最高，后期以Y-H002与苏连最高；每个品系氨基酸总含量的平均值以苏通与Y-H002最高，对照品系最低。4种主要呈味氨基酸含量，前期为对照品系与苏通最高，中期以苏通与Y-H002最高，后期以Y-2011与苏通最高。7个条斑紫菜品系中，苏通在呈味氨基酸与总游离氨基酸含量组成水平上最高，其次为Y-H002、苏研与苏连，对照品系最低。

3.2 游离氨基酸随采收期的变化特征

条斑紫菜的壳孢子采苗、单孢子放散和营养生长都与海区气温及水温有着密切关系，其采收期也随海区水温的差异有着明显的不同，不同条斑紫菜品系中的游离氨基酸含量组成变化也不一致。纪明侯等分析从1—4月采收的条斑紫菜认为，虽然部分游离氨基酸在采收期中段出现1个高峰后下降，但是游离氨基酸总体随采收期延迟呈下降趋势[14]。Sakai等调查11月至翌年1月日本北海道产条斑紫菜中游离氨基酸含量认为，游离氨基酸随采收期延迟呈增长趋势，特别是Asp、Ser、Glu与Ala[19]。Niwa等分析2个条斑紫菜品系HG-4与HG-5采收次数对游离氨基酸的影响发现，Ala、Asp、Glu、Tau 4种游离氨基酸中，只有Glu的含量随采收期延迟而降低[13]，本试验对照品系出现同样结论；其他3种氨基酸含量在HG-4纯系的第3次采收时达到最大，后出现下降，本试验从壳孢子采苗至采收前期，条斑紫菜在海中生长70多天，除对照外，其他6个品系中的Ala、Asp、Glu、Arg 4种主要呈味氨基酸含量从前期的41.70～45.51 mg/g上升到中期的42.97～53.96 mg/g，后期下降到36.05～43.84 mg/g，同样出现1个高峰后下降。

与呈味氨基酸含量相反，7个条斑紫菜品系中必需氨基酸含量均随采收时间延迟呈现增长趋势，而必需氨基酸含量的多寡决定其营养的平衡程度与利用价值，呈味氨基酸与必需氨基酸含量的变化为条斑紫菜游离氨基酸评价提供了一个平衡点。

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不同采收期 第4篇

1 仪器与材料

FW80型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);CP225D型电子分析天平(德国赛多利斯集团);KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);1750型紫外可见分光光度计(日本SHIMADZU公司)。

甲醇、无水乙醇、95%乙醇均为分析纯(天津市科密欧化学试剂有限公司),水为超纯水;芦丁(批号:Y225653719)(上海源叶生物科技有限公司),质量分数>98%。实验用鸡冠花药材为市售或自采(采自辽宁省阜蒙县大固本镇,晒干后粉碎),均经辽宁中医药大学康廷国教授鉴定为正品药材,过60目筛备用。

2 方法

2.1 测定波长的选择

鸡冠花提取物与芦丁对照品均在510nm处有最大吸收,故选择波长在510nm处测定[3]。

2.2 对照品的制备

称取芦丁对照品10mg于50mL容量瓶中,加甲醇定容并摇匀得对照品溶液。

2.3 标准曲线的制作

精密吸取对照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL于10mL容量瓶中,用甲醇定容置5mL,精密加入5%的亚硝酸钠溶液0.3mL,摇匀,放置6min,加10%的硝酸铝溶液0.3mL,摇匀,放置6min,加4%的氢氧化钠溶液4mL,再加甲醇至刻度,摇匀,放置15min,以相应试剂为空白,采用紫外分光光度法,于510nm波长处测定吸光度,结果见表1。

其线性回归方程为:Y=11.283X+0.007 2,相关系数r=0.999 5;结果表明质量浓度在20~70mg/mL范围内,吸光度与质量浓度之间线性关系良好。

2.4 供试品提取及含量检测工艺流程

其流程为:鸡冠花→烘干→粉碎(60目)→加入溶剂→静置12h→超声提取→振摇3min→超声提取→过滤得澄清透明溶液→定容(50mL容量瓶)→取5mL显色→测定→计算。

2.5 提取条件的选择[3,4,5,6,7,8,9]

研究提取溶剂、提取温度、振荡时间和溶剂用量对鸡冠花总黄酮提取的影响,首先采用单因素试验考察以上条件对提取率的影响,以正交试验法优化最佳工艺条件,用分光光度计于波长510nm处测定吸光度并计算黄酮含量,作为鸡冠花总黄酮提取指标。

2.5.1 提取溶剂的选择

精密称取5份鸡冠花样品(阜新10月中旬采,以下实验同)约1g置于50mL锥形瓶中分别加入甲醇、95%乙醇、乙酸乙酯50mL,在40℃下超声30min,振摇3min,再超声30min,滤过,将滤液定容并按“2.3”项步骤测定,于510nm处测定吸光度,计算总黄酮含量作为提取指标。

2.5.2 溶剂量的选择

精密称取5份鸡冠花样品约1g置于10mL锥形瓶中,分别加入甲醇30、40、50、60、70mL作为提取溶剂,超声温度为40℃下超声30min,振摇3min,再超声30min,滤过,将滤液定容并按“2.3”项步骤测定,于510nm处测定吸光度,计算总黄酮含量作为提取指标。

2.5.3 提取温度的选择

精密称取5份鸡冠花样品约1g置于50mL锥形瓶中,加入甲醇50mL,分别于0、10、20、30、40℃下超声30min,振摇3min,再超声30min,滤过,将滤液定容并按“2.3”项步骤测定,于510nm处测定吸光度,计算总黄酮含量作为提取指标。

2.5.4 超声时间的选择

精密称取5份鸡冠花样品约1g置于50mL锥形瓶中,加入50mL甲醇,在40℃下分别超声10、20、30、40、50min,振摇3min,再分别超声10、20、30、40、50min,滤过,将滤液定容并按“2.3”项步骤测定,于510nm处测定吸光度,计算总黄酮含量作为提取指标。

2.5.5 最佳工艺条件的选择

在单因素试验的基础上,采用正交试验法优化最佳工艺条件,以提取溶剂、提取温度、超声时间、溶剂用量作为4个考察因素,分别选取3个水平进行试验。按L9(34)正交表进行正交试验设计,确定超声提取的最佳工艺条件。

2.5.6 鸡冠花总黄酮含量的计算

测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的质量浓度c(mg/mL)。

公式为:总黄酮的质量比(mg/g)=c×V1×V/(V2×m)

式中,m为样品质量(g),V为样品液总体积,V1为测定样品总体积,V2为测定时取样体积。

3 结果

3.1 提取条件的选择

3.1.1 提取溶剂的选择

当选择甲醇作为提取溶剂时,总黄酮提取率略高于95%乙醇,乙酸乙酯提取率远小于二者。见图1。

3.1.2 溶剂量的选择

随着甲醇加入量的增加,总黄酮的提取率先升高后降低,甲醇体积为40mL、50mL时,提取率接近,再增加甲醇量,提取率反而下降。见图2。

3.1.3 提取温度的选择

超声温度为40℃时,对总黄酮的提取效果最好,若再增加提取温度,总黄酮提取率降低。见图3。

3.1.4 超声时间的选择

超声时间为60min时,提取效果最佳。由于超声提取包括扩散、渗透、溶解等过程,提取时间越长,提取越完全。当溶解达到平衡时,即使再延长超声时间,提取率也不再增大,甚至下降;另外,提取时间过长可能致使有效成分破坏。见图4。

3.1.5 正交试验结果

根据以上单因素实验结果,选取影响总黄酮提取效果的各因素水平进行正交试验,以确定最佳提取工艺。以提取溶剂、溶剂量、提取温度、超声总时间为考察指标,选取3个水平进行正交试验,正交水平表见表2。

按正交因素水平设计L9(34)正交试验,结果见表3。

由表3极差分析结果可看出,4个因素对鸡冠花总黄酮提取率的影响大小依次为:A溶剂种类>D超声总时间>B溶剂量>C提取温度。在试验设计范围内,优化得到超声提取鸡冠花总黄酮的最佳条件为A1B2C2D1,即为甲醇用量50mL,提取温度为40℃,超声总时间为60min。

3.1.6 验证实验

按A1B2C2D1条件进行3次平行实验,鸡冠花黄酮含量平均值为3.52mg/g,高于表2中各项试验结果,故A1B2C2D1为最佳提取工艺条件。

3.2 不同产地、采收期鸡冠花总黄酮含量测定

3.2.1 线性关系试验

在标准曲线的制作中,得线性回归方程为:Y=11.283X+0.007 2,相关系数r=0.999 5,结果表明:质量浓度在20~70(mg/mL)范围内,线性关系良好。

3.2.2 精密度试验

取芦丁对照品溶液,按“2.3”项操作,重复测量5次,记录吸光度。结果表明:芦丁吸光度值的RSD为0.66%,表明精密度良好。

3.2.3 重复性试验

按实验优化所得条件,平行制备5份样品溶液,测定吸光度,总黄酮提取率平均值为3.49%,RSD为1.02%,表明该方法重复性良好。

3.2.4 稳定性实验

实验测得的吸光度值与各显色剂、总黄酮的反应时间有关,因此要保证各组反应时间的一致性。按实验优化所得条件,平行制备5份样品溶液,测定吸光度,总黄酮提取率平均值为3.50%,RSD为0.92%,表明样品溶液在规定时间内稳定性良好。

3.2.5 加样回收率

精密称取已知含量的3号样品共5份,精密加入芦丁对照品,按实验优化所得条件,平行制备5份样品溶液,测定吸光度,计算,总黄酮提取率平均回收率为99.76%,RSD为1.39%,表明方法回收率符合规定。

3.2.6 不同产地、采收期总黄酮含量测定[10,11,12]

按实验优化所得最优提取工艺,对不同产地、采收期鸡冠花总黄酮进行提取,平行测定吸光度3次,取平均值,计算,结果见表4。

4 讨论

本文通过单因素试验和正交试验筛选出影响超声提取鸡冠花总黄酮提取效果的主要因素及最佳工艺条件,有效提高了鸡冠花总黄酮提取率,为该成分后期相关研究提供参考。

超声提取具有高效、节能、简单等优点,是一种理想的提取方法,但由于鸡冠花中总黄酮含量较少,实验所得鸡冠花总黄酮含量略低,采用其他方法提取还有待于进一步研究。

实验优选出提取工艺测定了鸡冠花不同产地、采收时期总黄酮含量,结果显示安徽产地鸡冠花较其他产地总黄酮含量略高,原因可能是该产地较其他省份产地,更能够满足鸡冠花喜阳光、湿热及不耐霜冻、不耐瘠薄等生长条件。通过比较8-12月中旬不同采收期鸡冠花总黄酮含量,结果表明11月份总黄酮含量高于其他月份,与传统经验上鸡冠花的采收期为8-10月相悖,该结果为鸡冠花的合理利用提供了实验依据。

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荔枝转色至采收期防病措施 第5篇

1 技术操作

目前荔枝主要工作是恢复树势、培养秋梢。

1.1 早熟品种 ①对已放出的秋梢，不能短截修剪，以免影响秋梢质量，但可以适当除去过密枝。②要及时喷药保护新梢。③要充分利用近期多雨，特别是山地缺水的果园，抓紧施肥，多放1次秋梢。④还没有施有机肥的果园，要准备肥料，争取在7月下旬或8月上旬施。⑤为了加速枝梢的老熟，在叶片开始转绿时，喷1次多元核苷酸。

1.2 中熟品种 第二或第三次秋梢已抽出或开始老熟，但有些果园只抽出1次秋梢。①没有结果的果园，已抽出第二或第三次梢，土壤施肥或叶面喷多元核苷酸，促枝梢生长。②对于只放出1次秋梢的果园，应抓紧时间放梢。③不论目前放出第几次秋梢，都要注意喷药护梢，争取在9月下旬、10月上旬抽出末次秋梢。④还没有施基肥的果园，最迟在8月下旬施上，适当增施磷钾肥。

1.3 迟熟品种 抓紧时间施肥、修剪。①为了恢复树势，采果后施第一次肥，以氮肥为主，促新梢时抽发。②施肥5～7天后，芽已开始萌动，可进行修剪，特别结果较多的树。③果园病虫害较严重时，可在采果后土壤施1次石灰，并翻土晒白，改良土壤的理化性质，增加土壤肥力，减少病虫害发生。

2 套餐防治

套餐一：势如破竹（13%高氯·三唑磷）1 500倍+海利尔绿微（2.5%功夫）1 000～1 500倍+阿迪打（0.5甲维盐）1 500倍+露克（50%烯酰吗啉）1 500倍。套餐二：黑光灯（25%丙溴·灭多威）1 500倍+金鸣（3.2%甲维盐·高氯）1 500倍+露克（50%烯酰吗啉）1 500倍。

3 注意事项

（1）接近收果时绝对禁用高毒、高残留产品。（2）如遇阴雨连绵天气，应缩短喷药间隔期，并注意抢晴天喷药。（3）对吸果夜蛾可于晚上悬挂沾湿香茅油的纸条趋避，对蝙蝠可拉网捕杀。（4）此期间以防治蒂蛀虫和霜霉疫病为主。根据荔枝霜霉疫病菌致病性极强，潜育期短及再侵染频繁的特点，应以药剂防治为主。结合田间防病，采取采果后低温及药防腐等综合防治措施。

不同采收期 第6篇

蕨菜 (Pteridium aquilinum var.latiusculum) 又名龙头菜、火蕨菜、拳菜、拳头菜、鹿角菜等[1], 为凤尾蕨科属多年生草本植物, 野生蕨菜的适应性和抗逆性强, 宿根可在-30℃的条件下越冬, 30℃的高温下能正常发育。春季地温在7~8℃时, 根状茎上的不定芽开始萌动, 叶由地下茎节上长出。喜欢在土壤有机物质丰富, 土壤深厚, 排水良好, 中性或微酸性的条件下生长[2]。以叶芽生长出来未展开的羽状叶和幼嫩叶柄供食。在中国分布于西北、华北、东北、西南各省[3]。蕨菜可作为蔬菜食用, 清脆鲜嫩, 润滑适口, 淡香味美, 既可炒食, 又可做汤或与其他配菜烩制, 是一种色、香、味俱全的山野菜。蕨菜味甘性寒, 含有多种药理成分, 具有清热利湿、消肿、安神等功效, 可用于治疗发热、痢痰、湿热黄疽、风湿性关节炎、高血压、脱肛等症[3,4]。

地跨黄河、长江两大流域, 被秦岭环抱的商洛市, 位于北亚热带与暖温带交界地带, 北方的南缘, 南方的北界。该地区雨水充足, 气候温和, 物产丰富, 四季分明。特殊的地形地貌和气候变化使得该市拥有良好的生态环境和丰富的物种资源。商芝即蕨, 分布于陕西商洛各地, 年产量数百万公斤, 因丹风县商山而得名。商芝是一种淡紫色的含有异香、营养极为丰富的野生名菜, 其幼芽远观如鸡爪, 近看像拳头, 因此俗称“鸡爪”、“拳芽”。商芝的根部富含大量淀粉, 是口味独特的冲服剂, 具有去热利水之功能。商芝和“商山四皓”有着奇缘, 商洛自古就有食蕨菜的饮食文化传统。商州素以野山野味驰名省内外。商州厨师用商芝可烹调出十几种菜肴。如商芝蒸肉, 商芝小炒, 商芝拼盘, 商芝滚汤[6,7]。

商洛虽然具有食蕨菜的传统, 但是长期以来不合理的采收和采收后的保鲜问题一直制约着商洛地区蕨菜产品的产量和质量。有关野生蕨菜的研究有所报道[8,9,10,11,12,13,14,15,16], 但对商洛野生蕨菜营养成分及生理生化方面的研究还未涉及。本文采用凯氏定氮法, 通过对商洛野生蕨菜拳缩期和展开期在不同采收部位中蛋白质含量的测定和比较分析, 为商洛野生蕨菜的合理采收及进一步开发与利用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

本次实验用的蕨菜采于商洛市商州区刘湾街道红升村, 分别在四月初的拳缩期和四月底的展开期两个时间段进行采摘, 采摘后立即用保鲜膜包裹放入密封冰盒迅速运回实验室进行试验处理备用。

1.2 方法

1.2.1 样品处理

将采摘的新鲜野生蕨菜立即清洗, 并将茎、叶柄、叶片分开, 分别放在温度设置在70℃的电热恒温干燥箱烘干, 然后分别用粉碎机粉碎成粉末状, 过40目筛。在每个称量瓶中分别称入约10g粉碎的样品, 然后置于105℃的烘箱中干燥4小时, 用坩埚钳将称量瓶放入干燥器内, 待降至室温后称量, 按照上述操作继续烘干样品。每烘干一小时称量一次, 直到两次称量数值不变, 即达到恒温。样品分别按茎、叶柄、叶片贴上标签保存, 备用[8,9,10,11,12,13]。

1.2.2 消化

取4个1000m L消化瓶并标号。各加1颗玻璃珠, 在1、2、3号瓶中各加入准确称取的0.5g干燥野生蕨菜茎样品、硫酸铜0.2g, 硫酸钾3g, 浓硫酸20ml (注意:加样品时应直接送入瓶底, 不要粘在瓶口和瓶颈上) 。在4号瓶中各加入与1、2、3号瓶相同的催化剂和浓硫酸, 作为对照, 用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质。每个瓶口放一漏斗, 在通风橱内的电炉上消化。消化完毕后, 取下烧瓶, 冷却, 加蒸馏水20m L, 待冷却至室温后, 分别移人100m L容量瓶中, 用少量蒸馏水洗涤烧瓶数次, 洗液合并于容量瓶中。用水稀释至刻度, 摇匀备用。

刚在消化开始时应控制火力, 不要使液体冲到瓶颈。待瓶内水蒸完, 硫酸开始分解并放出SO2白烟后, 适当加强火力, 继续消化, 直至消化液呈透明淡绿色为止。消化完毕, 等烧瓶中容物冷却后, 加蒸馏水10ml (注意慢加, 随加随摇) 。冷却后将瓶中容物倾入50ml的容量瓶中, 并以蒸馏水洗烧瓶数次, 将洗液并入量瓶。用水稀释到刻度, 混匀备用。

1.2.3 蒸馏

(1) 蒸馏的洗涤:蒸馏发生器中盛有用几滴硫酸酸化的蒸馏水。关闭皮管夹, 将蒸汽发生器中的水烧开, 让蒸汽通过整个仪器。约15min后, 在冷凝器下端放一个盛有10m L 20g/L硼酸溶液和3~4滴指示剂混合液的锥形瓶。冷凝器下端应完全浸没在液体中, 继续蒸汽洗涤1~2min, 观察锥形瓶内的液体是否变色, 如果不变色则证明蒸馏装置内部已洗涤干净。

(2) 蒸馏:取100m L锥形瓶4个, 对应标号1、2、3、4, 各加入10m L硼酸溶液 (20g/L) 和3~4滴混合指示剂, 溶液呈紫色, 用表面皿覆盖备用。

用吸管取10m L消化液, 细心地由整流器小玻璃杯注入棒状玻璃塞。将一个含有硼酸和指示剂的锥形瓶放在冷凝器下, 使冷凝器下端浸没在液体内。

用量筒取400g/L的氢氧化钠溶液10m L放入小玻璃瓶杯, 轻提棒状玻璃塞使之流入反应室。尚未完全流入时, 将玻璃塞盖紧, 向玻璃杯中加入蒸馏水约5m L。再轻提玻璃塞, 使一半蒸馏水慢慢流入反应室, 一半留在玻璃杯中作水封。开始蒸馏, 蒸馏完毕后, 应立即清洗反应室, 再继续下一个蒸馏操作 (蒸馏时, 整齐发生要均匀充足, 蒸馏中途不得停火断气, 否则发生倒吸, 加碱要足量, 并且碱液不能污染冷凝管及接受瓶) 。

待样品和空白消化液均蒸馏完毕后, 同时进行滴定。

1.2.4 滴定

全部蒸馏完毕后, 用标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量, 硼酸指示剂溶液由绿变变淡紫色为终点。

按照上述方法依次对拳缩期和展开期两个时期野生蕨菜的叶柄、叶片中蛋白质含量进行滴定和测定。滴定数据记录如表1。

1.2.5 计算

式中:c为标准盐酸溶液摩尔浓度;

V1为滴定样品用去的标准盐酸溶液体积;

V2为滴定空白消化液 (4号瓶) 用去的标准盐酸溶液体积;

W为样品质量 (g) ;0.014为氮的相对分子质量。

2 结果与分析

2.1 拳缩期采收蕨菜不同部位蛋白质含量

从图1中可以看出, 在拳缩期采收的商洛野生蕨菜, 因采收部位不同蛋白质的含量存在明显差异, 拳缩期采收商洛野生蕨菜茎、叶柄、叶片中的蛋白质含量分别为8.93%、25.64%、32.20%。其中商洛野生蕨菜叶片部位的蛋白质含量最高, 含量高达32.20%, 与叶柄和茎相比, 蛋白质含量增加幅度分别达到25.58%和260.58%。

2.2 展开期采收蕨菜不同部位蛋白质含量

从图2中可以看出, 在展开期采收的商洛野生蕨菜, 因采收部位不同蛋白质的含量存在明显差异, 展开期采收商洛野生蕨菜茎、叶柄、叶片中的蛋白质含量分别为3.33%、13.84%、21.70%。其中商洛野生蕨菜叶片部位的蛋白质含量为最高, 含量为21.70%, 与叶柄和茎相比, 蛋白质含量增加幅度分别达到56.79%和551.65%。

2.3 不同采收时间采收蕨菜蛋白质含量对比分析

从表2可以看出, 拳缩期商洛野生蕨菜叶片、叶柄、茎的蛋白质含量分别高于展开期蕨菜叶片、叶柄、茎的蛋白含量, 增幅分别为48.39%、85.26%、168.17%。通过对商洛野生蕨菜在拳缩期和展开期不同部位的蛋白质含量的对比, 不仅可以看出拳缩期商洛野生蕨菜各部位的蛋白质含量相对展开期商洛野生蕨菜的蛋白质含量较高;还可以看出不管是拳缩期还是展开期, 相同时期商洛野生蕨菜叶片部位的蛋白质含量最高, 叶柄部位的蛋白质含量次之, 茎部位的蛋白质含量相对最低。研究结果表明, 商洛野生蕨菜不同采收部位蛋白质含量表现为叶片叶柄茎, 且拳缩期叶片的蛋白质含量最高。

3 讨论

由拳缩期和展开期的蕨菜不同采收部位蛋白质含量测定的结果可知, 拳缩期商洛野生蕨菜不同部位的蛋白质含量比展开期商洛野生蕨菜不同部位的蛋白质含量较高;且不同采收时期采收商洛野生蕨菜的蛋白质含量因采收部位不同均表现为叶片叶柄茎的相同规律, 其中拳缩期野生蕨菜叶片的蛋白质含量较展开期野生蕨菜叶片的蛋白质含量高。该研究成果与卢文芸等[22,23,24,25]的研究结果有所差异, 可能是由于不同区域特殊的气候环境和地理环境所致。野生蕨菜在拳缩期和展开期蛋白质含量有所不同, 这可能是因为蕨菜生长初期, 土壤有机质、全氮和全磷含量丰富, 养分多, 蕨菜的蛋白质含量高, 而在蕨菜生长后期, 土壤中的养分含量下降, 离体组织会发生老化, 表现为萎蔫变软、失绿、脆性下降并纤维化, 导致蕨菜蛋白质含量下降。

本试验主要是通过在拳缩期和展开期对商洛野生蕨菜不同采收部位蛋白质含量进行了测定分析。对于蕨菜加工后蛋白质含量水平的变化规律以及其它营养成分指标的变化趋势还有待进一步研究。根据蕨菜加工目的不同, 蕨菜具体采收时间存在差别, 而且还要从测糖类、总黄酮、氨基酸、灰分、脂肪、淀粉等多个蕨菜应用特性指标去综合判断才能确定合适采收期。本研究以采收后新鲜野生蕨菜为试材, 测定蕨菜不同采收部位蛋白质含量, 仅为今后商洛野生蕨菜的开发与利用提供一定的参考依据。

摘要：采用凯氏定氮法对商洛野生蕨菜在拳缩期和展开期不同采收部位蛋白质含量测定, 试验结果表明, 在拳缩期商洛野生蕨菜茎、叶柄、叶片的蛋白质含量分别为8.93%、25.64%、32.20%, 在展开期商洛野生蕨菜茎、叶柄、叶片的蛋白质含量分别为3.33%、13.84%、21.70%, 通过比较可以得出结论, 拳缩期蕨菜采收效果较好;蕨菜叶片部位的蛋白质含量最高。

不同采收期 第7篇

关键词：南丰蜜桔,结果部位,采收期,果实品质

南丰蜜桔是中国的特色柑桔品种,原产江西省南丰县。以其皮薄核少、汁多化渣、色泽金黄、酸甜适口、营养丰富享誉古今中外[1]。南丰蜜桔不仅是南丰县经济的重要支柱,也是农民增收的主要来源。近年来,为了抢占市场,果农往往提早将南丰蜜桔一次性从树上采完,最终导致市场上南丰蜜桔的品质参差不齐。随着生活水平的提高,消费者对柑桔果实的品质也在提高。因此分析不同部位和不同时期南丰蜜桔的品质差异变得极为重要。在猕猴桃[2]、苹果[3]等果树上的研究表明,果实品质均因树体结果部位不同而有所差异。在柑桔上,也有研究分别对南丰蜜桔和瓯柑等柑桔的不同结果部位或不同采收期的果实品质进行了研究,但综合结果部位和采收期对南丰蜜桔果实品质进行的研究未见报道[4,5,6]。本研究以南丰蜜桔‘杨小26’为材料,对不同结果部位和不同采收期的果实色泽、质地、风味以及维生素C的含量进行了比较,以期为南丰蜜桔果实采收期的确定提供参考依据。

1材料与方法

1.1材料采集

南丰蜜桔‘杨小26’(Citrus reticulata Blanco‘Kinokuni’)采自江西省南丰县柑桔研究所种质圃。选3株长势一致的树,每株分为4个部位:外围上部、外围中部、外围下部和内膛,每个部位5个采收期:采收期Ⅰ(花后194d,正常采收)、采收期Ⅱ(花后204d,延后采收10d)、采收期Ⅲ(花后214d,延后采收20d)、采收期Ⅳ(花后224 d,延后采收30d)和采收期V(花后234d,延后采收40d)。从每个部位的东西南北随机采摘5个果实,当天运至实验室保存。单株小区,3次重复。

1.2试验方法

1.2.1果实色泽的测定。取不同结果部位果实擦拭干净后,用色差仪Chroma Meter CR-400测定每个果实的中间部位的东西南北4个方向的色差值。

1.2.2果实质地测定。将每个果肉的1/4混合,随机取出一瓣测定。运用SMSTA.XT Plus质构分析仪(英国Stable Micro Systems公司)测定囊瓣的剪切力和硬度。同一测试条件下,每个样品随机选取10个柑桔囊瓣,所有试验中的触发值均为0g。

1.2.3果实风味品质的测定。可溶性糖含量采用蒽酮比色法测定[7];定酸采用酸碱中和法测定[8];可溶性固形物用手持式测糖仪测定;糖酸比为可溶性糖/可滴定酸;固酸比为可溶性固形物/可滴定酸。

1.2.4果实Vc的测定。Vc含量的测定采用2,6-二氯靛酚滴定法[8]。

1.3数据处理方法

数据利用DPS(Data Protection System)软件进行方差分析(P<0.05)。

2结果与分析

2.1南丰蜜桔色泽的变化

在相同结果部位,不同采收期南丰蜜桔果实的亮度和色饱和度不存在显著差异,而果实的红色度呈上升的趋势,其值在采收期I和采收期II往往显著低于后3个采收期。黄色度在外围中部和下部果实没有明显的变化,但在外围上部和内膛果实中则随着果实采收期的延长呈下降的趋势。南丰蜜桔果实的色调角值随着果实采收期的延长呈下降的趋势,在采收期I和采收期II往往高于后3个采收期(表1)。

2.2南丰蜜桔质地的变化

随着采收期的延长,南丰蜜桔不同结果部位果实的剪切力呈现先下降后上升的趋势:采收期IV和采收期V的剪切力往往高于前3个采收期(表2)。除外围上部外,其他相同结果部位的不同采收期的果实剪切力不存在显著差异。此外,外围下部南丰蜜桔果实剪切力在不同的采收期均低于其他3个结果部位。随着采收期的延长,不同结果部位果实的硬度均呈先上升后下降的趋势,并且在采收期III达到最高,随后下降。外围下部在采收期V最低外,其他部位均在采收期IV为最低,但是相同部位果实的硬度在2个采收期之间并没有显著差异。

2.3南丰蜜桔主要风味品质的变化

如表3所示,可溶性糖的含量随着南丰蜜桔采收期的延长呈下降趋势,且外围中部果实的含量往往高于其他3个部位。可滴定酸的含量在外围上部果实中的变化幅度较小,不同采收期不存在差异,外围中部和下部果实在采收期IV显著低于其他4个采收期;与外围果相比,内膛果实中可滴定酸的含量较高并且变化幅度较大,在采收期III和IV显著高于其他3个采收期。可溶性固形物的含量随着南丰蜜桔采收期的延长呈上升趋势。一般而言,相同的采收期内外围上部果实的含量最高,其次是外围中部和下部,内膛果实最低。南丰蜜桔糖酸比随着采收期的延长呈下降趋势。相同的采收期内,外围中部果实的糖酸比最高,其次是外围上部和下部,而内膛果的糖酸比明显低于外围果。与糖酸比相反,南丰蜜桔的固酸比随着采收期的延长呈上升趋势。相同的采收期内,内膛果的固酸比明显低于外围果,但是外围3个部位之间的果实固酸比无明显差异。

2.4南丰蜜桔维生素C含量的变化

如表4所示,各个部位南丰蜜桔果实中维生素C的含量随着采收期的延长呈上升趋势,并且在采收期IV和采收期V的含量往往显著高于前3个采收期。相同采收期内,外围上部和中部果实的维生素C含量往往高于外围下部和内膛果实。

3讨论

南丰蜜桔是中国优良的柑桔品种,但是目前市场上销售的果实品质往往差异较大,这可能与果实采摘期的不同有关。此外,由于树体不同的光照强度和湿度等小气候不同,蒸腾作用以及营养元素、激素等的分布不同,花和果实有不同的发育规律,最终也会影响果实的品质[9,10,11]。色泽是影响果实外观品质的重要指标之一。随着果实的成熟,果皮中的呈色物质会发生变化,叶绿素随果实成熟不断降解,果皮的色泽就相应的会发生变化[12]。本研究发现,不同结果部位和采收期的南丰蜜桔果实色泽没有很明显的变化。因此,仅从外观色泽上来判断,采收期I达到了南丰蜜桔的成熟标准,延后采摘并没有提高果实的色泽品质。这也是大部分果农选择这个时期采摘南丰蜜桔的重要原因。此外,柑桔的化渣性是衡量果实质地品质的重要指标,南丰蜜桔的化渣性更是成为影响其品质的主要原因[13]。汪妙秋[4]利用质构仪对南丰蜜桔的化渣性进行评价,表明果实的剪切力和硬度与果实化渣性密切相关。本研究表明,结果部位和采收期对南丰蜜桔果实剪切力的影响较小,但是对果实硬度的影响较大:不同结果部位南丰蜜桔均随采收期的延长而降低。因此,尽管采收期I南丰蜜桔在外观上已经达到采收标准,但对于果实化渣品质而言,采收期IV或采收期V是适宜采摘期。延后采摘有利于果实的完熟和软化,提高果实化渣性。

南丰蜜桔果实的化渣性与常规品质之间没有明显相关性,化渣性好的果实其风味品质不一定好[14]。因此,我们进一步对果实的常规品质进行了分析。

不同采收期 第8篇

1 材料

1.1 动物

昆明种小鼠 (合格证号为SCXK (沪) 2007-0005) , 雄性, 体重18~20 g, 由上海斯莱克实验动物责任有限公司提供。

1.2 药物

受试药物:一年生10月上旬盛花期采收的紫锥菊原药材, 批号为1201001;二年生6月上旬采收的紫锥菊原药材, 批号为1201002;二年生10月下旬采收的紫锥菊原药材, 批号为1201003。以上原药材均产自安徽省桐城市, 由青岛蔚蓝生物股份有限公司提供。

阳性对照药物:盐酸左旋咪唑-黄芪多糖可溶性粉 (商品名为高免多糖, 批号为20120112, 每瓶100 g, 含盐酸左旋咪唑5 g、黄芪多糖8 g) , 广州市和生堂动物药业有限公司产品。

3H-TdR (氚标记胸腺嘧啶核苷) , 上海原子核研究所提供, 放射性浓度为20 muci/m L。

1.3 仪器

722S分光光度计, 上海精密科学仪器有限公司产品;LEICADM2000显微镜, 德国Leica.公司产品;SN-6930型液体闪烁计数仪, 上海核所日环光电仪器有限公司产品。

2 方法

2.1 紫锥菊对小鼠溶血素的影响

2.1.1 绵羊红细胞悬液的制备

取绵羊抗凝血30 m L放入离心管中, 用生理盐水洗涤3次, 取沉淀, 2 000 r/min离心5 min (2次) , 2 000 r/min离心10 min (1次) ;弃去上清液, 即得绵羊红细胞。取绵羊红细胞3 m L (2份) , 用生理盐水分别配制成20%、10%的绵羊红细胞混悬液。

2.1.2 补体的制备

取用豚鼠心脏血液制得的血清, 按血清︰20%羊红细胞=1︰0.2混合, 于4℃冰箱中放置30 min;2 000 r/min离心10 min, 吸取上清液, 备用。

2.1.3 试验动物的分组及处理

取昆明种小鼠共165只, 随机分为11组, 每组15只, 分别为不同采收期的紫锥菊原药材高、中、低3个剂量组 (紫锥菊-A1、紫锥菊-A2、紫锥菊-A3分别代表一年生10月份上旬盛花期采收的紫锥菊原药材高、中、低剂量组;紫锥菊-B1、紫锥菊-B2、紫锥菊-B3分别代表二年生10月下旬采收的紫锥菊原药材高、中、低剂量组;紫锥菊-C1、紫锥菊-C2、紫锥菊-C3分别代表二年生6月上旬采收的紫锥菊原药材高、中、低剂量组) 及空白组、阳性对照组。分组后第2天开始给药, 不同采收期的紫锥菊高、中、低剂量组分别以2.25 g/kg、0.75 g/kg、0.25 g/kg的剂量灌胃给药, 灌胃容量为每20 g体重0.5 m L。空白组给予0.5 m L生理盐水;阳性药物对照组给药剂量为0.1 g/kg (将盐酸左旋咪唑-黄芪多糖可溶性粉4 g溶于1 000 m L生理盐水, 按小鼠体重换算出灌胃给药体积) , 每日给药1次。所有试验动物均连续给药2周。

2.1.4血清的制备及溶血素抗体的测定

于小鼠给药结束前4天, 将浓度为20%的绵羊红细胞悬液以0.2 m L/只的剂量给所有小鼠进行腹腔注射。4 d后摘取眼球取血, 离心分离血清。将所得血清按500倍稀释, 在1 m L稀释血清中加入10%绵羊红细胞0.5 m L, 再加入经预处理的1︰10豚鼠血清1 m L, 37℃水浴10 min后置入冰水终止反应, 2 000 r/min离心10 min;取上清液1 m L加都氏试剂3 m L, 放置10 min后在722S分光光度计540 nm波长处测定OD值。

绵羊红细胞半数溶血OD值的测定:取10%绵羊红细胞0.25 m L加都氏试剂3 m L, 放置10 min后测定OD值。按下列公式计算每个样品的溶血素值 (HC50) :HC50= (样品OD值/羊红细胞半数溶血时OD值) 稀释倍数。

2.2 紫锥菊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

另取昆明种小鼠共165只, 处理方法同2.1.3, 最后一次给药后1小时给小鼠腹腔内注射2%鸡红细胞 (自制, 已经去除纤维蛋白, 用生理盐水多次洗涤) , 0.2 m L/只, 4 h后处死小鼠, 用生理盐水冲洗腹腔, 收集冲洗液, 离心, 弃去上清液, 收集细胞涂片, 晾干后用瑞氏染色液染色, 油镜下观察, 计数100个巨噬细胞吞噬鸡红细胞数, 按如下公式计算:吞噬百分率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100100%;吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数/100。

2.3 紫锥菊对小鼠NK细胞活性及淋巴细胞转化的影响

再取昆明种小鼠共165只, 处理方法同2.1.3, 最后一次给药后1小时断颈处死小鼠, 无菌取脾脏, 用手术剪刀将脾脏剪碎, 分离细胞, 制成细胞悬液, 进行NK细胞活性测定及淋巴细胞转化试验。

2.3.1 NK细胞活性的测定

在96孔培养板中加入1106/m L小鼠脾细胞100μL作为效应细胞, 另取已培养24 h的处于旺盛生长期的YAC-1 (小鼠淋巴瘤细胞) 、浓度1104/m L小鼠脾细胞 (即1104/m L小鼠脾细胞悬液) 100μL作为靶细胞加入培养板中, 同时加3H-TdR 0.4 muci/孔在37℃、CO2培养箱中培养24 h, 收集细胞在液闪仪上测定计数率 (CPM值) , 各组10复孔。NK细胞活性计算公式:NK细胞活性 (PI) = (对照组CPM值-试验组CPM值) /对照组CPM值100%。

2.3.2 淋巴细胞转化的测定

在96孔培养板中加入1107/m L小鼠脾细胞100μL、Con A (50μg/m L) 50μL, 在5%CO2、37℃培养箱中培养48 h, 加入20μL3H-TdR培养24 h, 各组10复孔, 对照管用培养基代替, 培养结束后在多孔细胞收集器上收集细胞, 5%三氯乙酸固定, 无水乙醇脱水, 在液闪仪上测定CPM值, 计算淋巴细胞转化指数:淋巴细胞转化指数 (SI) =试验组CPM值/对照组CPM值。

3 结果

3.1 紫锥菊对小鼠溶血素的影响结果 (见表1)

注:与空白对照组比较, 数据肩标*表示差异显著 (P<0.05) ;**表示差异极显著 (P<0.01) , 无肩标表示差异不显著 (P>0.05) 。

结果表明:不同采收期的紫锥菊3个剂量组均能剂量依赖性地提高小鼠的溶血素值。与空白对照组相比, 不同采收期紫锥菊中、高剂量组具有提高小鼠的溶血素值的效果, 具有显著或极显著差异。说明中、高剂量紫锥菊对小鼠溶血素抗体生成具有明显促进作用, 提示该药可增强体液免疫, 此研究结果与国外报道[3,4,5]吻合。综合比较, 一年生10月上旬盛花期采收的紫锥菊原药材提高小鼠溶血素值的效果要优于二年生6月上旬以及二年生10月下旬采收的紫锥菊原药材。说明一年生10月上旬盛花期采收的紫锥菊原药材增强体液免疫的效果要优于二年生6月上旬以及二年生10月下旬采收的紫锥菊原药材。

3.2 紫锥菊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 (见表2)

注:与空白对照组比较, 数据肩标*表示差异显著 (P<0.05) , **表示差异极显著 (P<0.01) , 无肩标表示差异不显著 (P>0.05) 。

结果表明:不同采收期紫锥菊3个剂量组均能提高对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率。与空白对照组相比, 不同采收期的紫锥菊中、高剂量组具有显著或极显著的提高效果, 表明不同采收期的紫锥菊中、高剂量组具有促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬的作用, 与参考文献报道的一致, 而且存在一定的剂量相关性。阳性对照药物也具有促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬的作用。综合比较, 一年生10月上旬盛花期采收的紫锥菊原药材提高小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬百分率效果要优于二年生6月上旬采收的紫锥菊原药材以及二年生10月下旬采收的紫锥菊原药材。

3.3 紫锥菊对小鼠NK细胞活性及淋巴细胞转化的影响 (见表3、表4)

注:与空白对照组比较, 数据肩标*表示差异显著 (P<0.05) , **表示差异极显著 (P<0.01) , 无肩标表示差异不显著 (P>0.05) 。表中-代表数值为负值, 结果判定为阴性。

由表3可知:紫锥菊高剂量组能够显著性地增强小鼠NK细胞的活性, 与参考文献[1, 6]报道的相符, 中、低剂量及阳性药物对照在本试验中作用不明显。

注:与空白对照组比较, 数据肩标*表示差异显著 (P<0.05) , **表示差异极显著 (P<0.01) , 无肩标表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表4可知:紫锥菊中、高剂量组对淋巴细胞转化具有显著促进作用 (SI>1为促进) , 与参考文献[1, 7-9]报道的相符, 并呈现出剂量相关性。阳性对照药物也表现出一定的促进作用。其中一年生10月上旬盛花期采收的紫锥菊原药材增强小鼠NK细胞活性的效果以及促进淋巴细胞转化的作用要优于二年生6月上旬以及二年生10月下旬采收的紫锥菊原药材。

4 讨论

试验对不同采收期紫锥菊原药材的主要药效学作用进行研究, 观察不同采收期紫锥菊对昆明种小鼠溶血素的影响, 对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响以及对小鼠NK细胞活性及淋巴细胞转化的影响, 通过3个试验模型评价紫锥菊对机体免疫功能的改善效果。结果表明, 紫锥菊中、高剂量组可明显促进小鼠溶血素抗体的生成, 说明其具有增强体液免疫的作用, 其中一年生10月上旬盛花期采收的紫锥菊原药材的增强体液免疫的效果要优于二年生6月上旬以及10月下旬采收的紫锥菊原药材。中、高剂量紫锥菊具有促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬的作用, 并且呈现出良好的剂量相关性;一年生10月上旬盛花期采收的紫锥菊原药材促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的效果要优于二年生6月上旬以及10月下旬采收的紫锥菊原药材。高剂量紫锥菊能够显著性地增强小鼠NK细胞的活性, 而中、高剂量组可显著地促进淋巴细胞的转化并呈现出剂量相关性, 其中一年生10月上旬盛花期采收的紫锥菊原药材促进淋巴细胞转化的效果要优于二年生6月上旬以及10月下旬采收的紫锥菊原药材。

以上试验结果表明:紫锥菊对动物的非特异免疫、体液免疫及细胞免疫三个方面都具有一定的免疫增强作用, 可较显著地提高、促进机体免疫功能。说明其可作为一种良好的免疫调节药物, 具有广泛的研发价值和较好的应用前景, 其中一年生紫锥菊10月上旬 (即秋季) 盛花期采收的药材对动物机体的免疫增强作用要优于其他采收期的药材。

参考文献

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不同采收期 第9篇

查阅相关文献[3,4,5], 枸杞叶富含天然抗氧化成分类黄酮化合物, 枸杞是中国特有树种, 主要在中国西北地区种植, 国内外对枸杞叶本身研究较少。超声波技术是利用超声波在液体中的空化作用来加速植物有效成分的浸出提取, 具有时间短、适应性广等特点。本研究采用超声波法提取宁夏枸杞叶片中抗氧化活性成分的类黄酮, 确定提取类黄酮的工艺参数并测定不同采收期枸杞叶片中的类黄酮含量, 比较不同采收期枸杞叶片中类黄酮含量的变化规律, 确定枸杞叶最佳的采收时期。

1 材料与方法

1.1 试验材料

研究材料:采收不同时期的宁夏枸杞鲜叶 (采摘时间定在5月、6月、7月、8月、9月中旬进行) , 采自宁夏银川南梁农场枸杞种植基地。

供试仪器与设备:U410超低温冰柜 (英国NEW BRUN-SWICK SCI-ENTIFIC) 、索氏脂肪提取器 (上海洪纪仪器设备有限公司) 、电子天平 (郑州长城工贸有限公司) 、722E型可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限公司) 、RE-52A型旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂) 、JY92-Ⅱ超声波细胞粉碎机、DHG-9140A电热鼓风干燥箱 (上海佳胜实验设备有限公司) 、DK-S28型电热恒温水浴锅 (上海精密实验设备有限公司) 、FDV DVTOUT-2HD超微粉碎机 (专利第115669号佑崎有限公司) 、真空泵布氏漏斗以及安全实验室常用仪器。

供试试剂:芦丁标准品;乙醇、石油醚、Al Cl3、甲醇, 均为分析纯, 国药集团化学试剂有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 枸杞叶片中总黄酮的提取[6,7,8]。

将枸杞鲜叶放置在自然光下晾晒5 d, 然后置于烘箱中干燥2 h (保持105℃) 后再粉碎至1 mm成枸杞叶粉末, 待用。精确称量10 g枸杞粉末, 将其置于索氏脂肪提取器内, 加入200 m L石油醚90℃回流浸提脱脂约2 h至无色, 取出包有样品的滤纸置于烘箱中烘干。按固液比1∶50 (g/m L) 加入70%乙醇, 在420 W、55℃的条件下于超声波细胞粉碎机中处理60 min。再用真空抽滤, 上清液用95%乙醇定容至100 m L备用[9]。

1.2.2 标准曲线的绘制。

将芦丁充分干燥至恒重, 再用电子天平准确称量10.000 mg (120℃干燥至恒重) 的芦丁标准品, 加入甲醇溶解并定容于100 m L的容量瓶中, 得到质量浓度为0.1 mg/m L的芦丁对照标准液。准确吸取上述芦丁对照标准液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 m L于10 m L容量瓶中, 分别加入1%Al Cl3显色剂1 m L, 加入95%乙醇至刻度, 摇匀, 放置15 min, 配制成系列标准溶液, 以第一管溶液作空白, 在500 nm处分别测定吸光度[10], 以吸光度为横坐标, 样品浓度为纵坐标, 绘制出标准曲线[11], 得到线性回归方程, 得吸光度A-质量浓度C的标准曲线 (表1、图1) , 求得回归方程C=22.039A+0.002 4 (R2=0.999 6) 。

由标准曲线求出试样中类黄酮提取液的浓度, 再计算样品中类黄酮的含量, 计算公式如下:

式中:C为根据回归方程计算出类黄酮提取液的质量浓度 (mg/m L) ;10为提取液定容时的体积 (m L) ;10为显色反应时稀释的倍数;W为样品的质量 (g) 。

2 结果与分析

将不同采收时期枸杞叶片的吸光度, 浓度值及类黄酮含量整理成表2。

为了对比方便, 再将5—9月不同采收时期枸杞叶片中类黄酮含量的平均值绘制成柱形图来进行比较, 结果见图2。

由图2可以看出, 在5—9月采摘的枸杞叶片中类黄酮含量以5月最高, 6月、7月开始降低, 到8月、9月又显著增加的一个趋势, 其中5月采摘的枸杞叶片中类黄酮含量高达61.32 mg/g, 而到6月则降低到35.12 mg/g。

3 结论与讨论

该试验结果表明, 5月中旬前后枸杞叶片中的类黄酮的含量最高, 6月、7月以后叶片中的类黄酮含量缓慢减少。直到8月、9月采收的枸杞叶片的黄酮含量又会显著增加, 最高点在5月采收的枸杞叶片中, 类黄酮含量达到61.32 mg/g, 因此5月是最适宜采收枸杞叶片的时间。

5月采摘的枸杞叶片中的类黄酮物质处于最高值, 即此时的枸杞叶片最嫩也最适宜采收, 而到了8月、9月虽然类黄酮的含量也较高, 但是此时叶片纤维化严重, 并不适宜加工利用。出现这种情况的原因主要有2个方面:一是气候影响。宁夏位于中国西北, 属于内陆干旱沙漠型气候, 少雨、多风、光照充足、冬季漫长, 每年的5月以后气温迅速回升、日照相对较强, 农作物依靠黄河补水较足, 枸杞植株喜热需水, 在这个阶段生长最为旺盛, 类黄酮物质也容易积累;二是5月的宁夏枸杞正处于春季萌芽期, 而8月、9月初枸杞采果基本结束, 叶片急剧老化, 因而处于组织正在快速生长的嫩叶和逐渐纤维化的老叶对类似于类黄酮物质这样的功效成分积累量也有增加。

类黄酮化合物是一类天然产物, 广泛存在于各种植物组织中, 是许多天热产物中的有效成分。多种方法均可以测定枸杞叶片中的类黄酮含量, 如热水浸提法、乙醇提取法、分光光度法、高效液相色谱法、二氧化碳超临界流体萃取法、离子交换法、大孔吸附树脂法、微波提取法等。该研究结果表明, 超声波辅助提取法时间少、提取率高、成本较低、污染最小、实现产业化也较为容易。从保健及新资源食品开发角度来看, 该结果可以指导研发人员在适宜的时间采收枸杞叶片来提取类黄酮化合物, 达到事半功倍的效果, 为枸杞叶的深度研究和产业开发起到基础性作用。

摘要：为了研究枸杞叶片中类黄酮含量的变化规律, 确定枸杞叶片的最佳采收时期, 采用超声波辅助法提取不同采收期枸杞叶片中的类黄酮, 在291.5 nm处测定其吸光度, 计算出不同采收时期枸杞叶片中类黄酮的含量。结果表明:5月中旬前后枸杞叶片中的类黄酮含量最高, 6月、7月以后叶片中的类黄酮含量缓慢减少。直到8月、9月采收的枸杞叶片的黄酮含量又会显著增加, 最高点在5月采收的枸杞叶片中, 类黄酮含量达到61.32 mg/g, 因此这段时间的叶片最适宜采收。

关键词：采收期,枸杞叶片,类黄酮,含量

参考文献

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不同采收期 第10篇

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20AT高效液相色谱仪 (日本岛津公司) ;Lichrospher C18柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm, 江苏汉邦科技有限公司) ;KQ3200 型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) ;T-214 分析天平 (北京赛多利斯仪器有限公司) 。

1.2 试药

药材分别采集于四川、云南、贵州等地产区, 具体采收与来源见表1。 黄皮树, 经鉴定均为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid. 的干燥树皮;小檗碱对照品 (批号:110713-200911, 供含量测定用) 、盐酸黄柏碱对照品 (批号:111895-201202, 供含量测定用) 均为中国药品生物制品检定所提供;水为重蒸馏水, 乙腈、磷酸等试剂均为色谱纯, 其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 小檗碱含量测定[6,7,8]

2.1.1 色谱条件采用Lichrospher C18柱色谱柱 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) , 流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液 (50∶50) (含0.1%十二烷基磺酸钠) , 检测波长为265 nm, 流速为1 m L/min, 柱温为35℃。

2.1.2 对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量, 精密称定, 置容量瓶中, 加流动相配制成每毫升含100 μg的溶液, 作为对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备各批样品粉碎过三号筛, 取约0.1 g, 精密称定, 置100 m L量瓶中, 加流动相90 m L, 超声提取 (功率250 W, 频率40 k Hz) 40 min, 放冷, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。

2.1.4 系统适用性试验分别取上述溶液各10 μL, 在上述色谱条件下进样分析, 理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算不低于4000, 小檗碱色谱峰与相邻峰之间分离度大于1.5。 见图1。

图1盐酸小檗碱及黄柏药材高效液相色谱图

2.1.5 线性关系精密吸取上述对照品溶液2.5、5、10、7.5、15、20 μL依次进样, 按上述色谱条件测定, 以进样量为横坐标, 峰面积积分值为纵坐标, 绘制标准曲线, 计算回归方程:Y=41 604X-11 549, r=0.9995。 线性范围为0.25~2.00 μg。

2.1.6 精密度试验精密吸取同一供试品溶液10 μL, 连续进样6 次, 记录峰面积积分值。 结果RSD为1.28%, 精密度< 2%。

2.1.7 稳定性试验取同一供试品溶液, 精密吸取10 μL, 分别于0、3、6、9、12、15 h进行测定, 记录峰面积, 结果供试品溶液在15 h峰面积积分值基本稳定。

2.1.8 重复性试验取同批次样品6 份, 按上述条件测定, 结果药材中小檗碱平均含量为7.15%, RSD值为1.89%, 表明本方法重复性好。

2.1.9 回收率试验采用加样回收法。 取已知小檗碱含量 (7.15%) 的黄柏药材6 份, 每份0.05 g, 分别精密加入盐酸小檗碱对照品3.5 mg, 按上述含量测定项下的方法测定, 结果平均回收率为97.46% , RSD值为2.03%。

2.2 黄柏碱含量测定

2.2.1 色谱条件色谱柱为Lichrospher C18柱 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) , 流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液 (含0.2%十二烷基磺酸钠) (36∶64) , 检测波长为284 nm, 流速为1 m L/min, 柱温为35℃。

2.2.2 对照品溶液的制备取盐酸黄柏碱对照品适量, 精密称定, 加流动相制成每毫升含0.1 mg的溶液, 作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备取各批次样品粉末 (过四号筛) 约0.5 g, 精密称定, 置具塞三角瓶中, 精密加入流动相25 m L, 称定重量, 超声提取 (功率250 W, 频率40 k Hz) 30 min, 放冷, 再精密称重, 用流动相补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。

2.2.4 系统适用性试验分别取对照品溶液和供试品溶液各10 μL, 在上述色谱条件下进样分析, 理论塔板数按盐酸黄柏碱峰计算不低于6000, 盐酸黄柏碱色谱峰与相邻峰之间分离度大于1.5。 见图2。

2.2.5 线性关系精密吸取上述对照品溶液2.5、5、107.5、15、20 μL依次进样, 按上述色谱条件测定, 以浓度为横坐标, 峰面积积分值为纵坐标, 绘制标准曲线计算回归方程:Y=119 128X+31 320, r=0.9999, 黄柏碱在0.2625~2.1000 μg范围内线性关系良好。

2.2.6 精密度试验精密吸取同一供试品溶液10 μL连续进样6 次, 测定峰面积积分值。 结果其峰面积积分值RSD为1.28%, 符合要求。

2.2.7 稳定性试验取同一供试品溶液, 精密吸取10 μL分别于0、3、6、9、12、15 h进行测定, 记录峰面积。 结果表明, 黄柏碱在15 h内测定结果稳定。

2.2.8 重复性试验取同批次样品, 精密称取6 份, 按上述条件测定, 结果药材中黄柏碱平均含量为0.64%, RSD值为1.76%, 表明本方法重复性好。

2.2.9 回收率试验采用加样回收法。 取已知黄柏碱含量 (0.64%) 的黄柏药材6 份, 每份0.25 g, 分别精密加入盐酸黄柏碱对照品1.6 mg, 按上述含量测定项下的方法测定, 结果平均回收率为96.89%, RSD值为2.25%。

2.3 样品测定

取各产地及各采收期样品, 按照上述方法依次测定其小檗碱、黄柏碱的含量, 结果见表2、3。

3 讨论

3.1 样品采集

黄皮树有雌株与雄株之分, 两者含量有一定的区别; 另有报道黄柏药材于5~13 年生黄皮树采收, 以8~10 年为最高, 并以5 月采收为最佳[9,10]。 同时, 黄柏采收有根皮、干皮、枝皮的区别, 常规采用干皮入药[11]。为减小客观条件对小檗碱与黄柏碱含量的影响, 本次样品采集均选择8 年生黄皮树雌株干皮进行试验。

3.2 产地对含量的影响

试验研究结果表明, 采收的10 个产区黄柏药材其小檗碱与黄柏碱含量均达到了《中国药典》2010 年版含量限度要求, 不同产区含量有一定的差异, 试验所收集的样品中, 以湖南保靖县与花坛县为最高, 四川荥经县与武隆县也较高, 说明其含量高低与地域、栽培条件有一定的关系。 文献报道, 黄柏中小檗碱与黄柏碱含量多以四川地区产含量较高, 也有报道贵州产含量较高[12], 此次试验研究中, 以湖南产样品含量最高, 产区保靖县夯沙乡与花坛县道二乡为新的黄柏种植基地, 可能与当地环境气候及现代种植技术提高有关。

3.3 采收期对含量的影响

从不同采收期试验结果可看出, 以小檗碱为考察指标, 武隆县与保靖县黄柏药材含量均以5~6 月上旬为最高, 6 月下旬含量开始下降, 7、8 月含量最低, 9 月份含量回升;以黄柏碱含量为考察指标, 5~6 月上旬为最高, 7、8 月含量稍低, 相对基本稳定。 说明黄柏宜在5~6 月上旬采收为宜, 此时小檗碱与黄柏碱含量均最高。 本次试验收集批次样品有限, 所测数据为各产区黄柏药材含量提供了参考, 同时也为黄柏药材资源的合理利用提供了一定依据。

摘要：目的 对不同产区与采收期黄柏药材中小檗碱与黄柏碱含量进行对比研究, 为其药材质量评价与资源合理利用提供参考。方法 采用高效液相色谱法对不同产区与采收期黄柏中小檗碱与黄柏碱进行测定。色谱柱为Lichrospher C18柱 (4.6 mm×250 mm, 5μm) , 流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液 (50∶50) , 检测波长为265 nm, 流速为1 mL/min;黄柏碱流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液 (36∶64) , 检测波长为284 nm, 流速为1 mL/min。结果 在检测的22批次样品中, 不同产区黄柏中小檗碱与黄柏碱含量有一定差异, 但均可达到《中国药典》2010年版黄柏含量限度要求, 以保靖县与花坛县产区最高;采收期对其含量有一定的影响, 56月上旬采收样品含量较高, 6月下旬8月中旬采收样品含量较其他月份低。结论 湖南保靖县与花坛县产黄柏含量较高, 宜在56月上旬间采收。