高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质（精选11篇）

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第1篇

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质

目的建立一种同时快速测定大鼠纹状体中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)5种氨基酸类神经递质的.高效液相色谱法.方法采用Kromasil C18(4.6250 mm,5 μm)为色谱柱,丹酰氯为柱前衍生试剂,以曲唑酮为内标,以0.1 mol/L醋酸钠缓冲液∶甲醇=58∶ 42、14 mmol/L庚烷磺酸钠为流动相等度洗脱.结果在1～200 mg/L范围内,各组分线性关系良好(r=0.999).各氨基酸的平均回收率为79.1%～92.9%.结论本方法简便、快速、准确, 可用于临床大样本测定和研究神经及精神疾病氨基酸类神经递质的改变.

作 者：黄晓 康学军 肖静 杨鹏 李涛 HUANG Xiao KANG Xuejun XIAO Jing YANG Peng LI Tao 作者单位：黄晓,肖静,HUANG Xiao,XIAO Jing(东南大学公共卫生学院,江苏,南京,210009)

康学军,KANG Xuejun(东南大学学习科学研究中心,江苏,南京,210009)

杨鹏,李涛,YANG Peng,LI Tao(东南大学神经生物学研究所,江苏,南京,210009)

刊 名：检验医学 ISTIC PKU英文刊名：LABORATORY MEDICINE年，卷(期)：21(3)分类号：Q517关键词：氨基酸 神经递质 高效液相色谱

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第2篇

高效液相色谱法测定粮食中氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物残留量

采用高效液相色谱柱后衍生荧光检测法测定了粮食(大米、小麦、玉米、大豆)中9种氨基甲酸酯类杀虫剂及代谢物残留量.方法的最低检测限为0.01～0.03 mg/kg,加标平均回收率为70.7%～108.0%,相对标准偏差小于18%.

作 者：刘潇威 李凌云 吕俊岗 买光熙 李红 王娴 周如意 韩玉 王璐 李卫键 LIU Xiao-wei LI Ling-yun L(U) Jun-gang MAI Guang-xi LI Hong WANG Xian ZHOU Ru-yi HAN Yu WANG Lu LI Wei-jian 作者单位：农业部环境保护科研监测所,天津,300191刊 名：分析试验室 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ANALYSIS LABORATORY年，卷(期)：200726(4)分类号：O657.7关键词：高效液相色谱 氨基甲酸酯 粮食 残留

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第3篇

关键词：反相高效液相色谱法,喹诺酮类药物,血液浓度监测

喹诺酮类药物是由人工合成的一类高效、广谱、低毒的抗菌药,具有体内分布广泛、不良反应较轻微、消除半衰期较长等优点,且与其他抗菌药物之间不存在交叉耐药性。喹诺酮类药物对G+和G-都有较强的杀灭作用,尤其是对G-菌的抗菌作用很强,临床上主要适用于治疗呼吸道、泌尿生殖道、消化道、皮肤软组织等细菌性感染疾病。不过喹诺酮类药物的杀菌效果呈明显的浓度依赖性,即浓度越高其抗菌活性越强,最大血药浓度与最低抑菌浓度之间的比值(Cmax/MIC)大于8～10时呈明显的杀菌活性且可减少耐药菌株的产生,但随着血药浓度的增加,药物不良反应明显增加,因此对于某些特殊患者进行喹诺酮类药物的血液浓度监测有显著的临床意义。现在临床常用的喹诺酮类药物共有四代数十种,而关于喹诺酮类药物血药浓度测定的方法也是五花八门各不相同[1,2,3,4,5,6],有些方法对实验设备和实验技术要求较高,基层实验室难以完成,本文介绍一种血样处理简单,试验条件易于满足,检测灵敏度高的HPLC方法,可在临床对多种喹诺酮类药物进行血药浓度监测。并用此方法对临床常用的5种喹诺酮类药物进行了方法学实验。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(日本岛津),包括:LC-6A高压输液泵、SPD-6AV紫外可调检测器、CTO-6A柱温箱、7251进样阀、分析之星色谱工作站;XK-96A液体快速混匀器,姜堰市医疗器械有限公司;BF-2000M型氮气吹干仪,北京八方世纪科技有限公司;LXJ-Ⅱ离心沉淀机,上海医用分析仪器厂;电子天平,梅特勒-托利多仪器有限公司。

甲醇(色谱纯,北京化工厂,批号:20020629)、磷酸二氢钾(分析纯,北京红星化工厂,批号:950401-8)、四丁基溴化氨(分析纯,天津市科密欧化学试剂开发中心,批号:20040531)、异丙醇(分析纯,北京化工厂生产,批号:941101)、磷酸(分析纯,天津市化学试剂六厂,批号:20010902),二氯甲烷(分析纯,北京化工厂,批号:20030319)。试验用水为自制三蒸水。盐酸左氧氟沙星对照品:中国药品生物制品检定所提供,批号:130045-200202。纯度:97.2%。司帕沙星对照品:山东罗欣药业,批号:081002,纯度:99.2%;甲磺酸帕珠沙星对照品:成都药友科技有限公司,批号:030701,纯度:99.7%;诺氟沙星对照品:中国药品生物制品检定所提供,批号:130086-200408,纯度:99.7%;盐酸莫西沙星对照品:德国拜耳医药公司,批号:DXB6C4X,纯度:99.8%。

2 方法与结果

2.1 色谱条件和系统适用性

色谱柱:Scienhome,C18不锈钢柱(250 mm×4.6 mm)。填料粒径5μm,KROMASIL。保护柱:C18可换柱芯不锈钢保护柱。流动相:0.01 mol/L磷酸二氢钾-甲醇-0.5mol/L四丁基溴化氨(78∶22∶4,V/V)。流速:1.0 mL/min。柱温:40℃。UV检测波长:司帕沙星298nm,诺氟沙星254 nm,帕珠沙星249 nm,左氧氟沙星294 nm,莫西沙星290 nm。灵敏度:0.001 AFU。在此色谱条件下,诺氟沙星、帕珠沙星、司帕沙星、左氧氟沙星、莫西沙星均能得到较好的分离,保留时间适中,分别为6.48、7.68、9.05、9.48、10.23 min,血浆中内源性物质对各个药物峰均无干扰。见图1～7。

2.2 对照品溶液制备

精密称取干燥至恒重的诺氟沙星、帕珠沙星、司帕沙星、左氧氟沙星、莫西沙星对照品各10 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀即得质量浓度为0.4 g/L的对照品储备溶液,置4℃冰箱中备用,临用时取出,以流动相稀释,制成各个浓度的对照品应用液。

2.3 血浆样品预处理

精密吸取血清0.5 mL,加二氯甲烷(含2%异丙醇)4 mL涡旋萃取2 min,离心10 min(3500 r/min),负压吸去上层水相,转移有机相2 mL于另一尖底试管中,40℃水浴中氮气吹干,100μL流动相复溶,进样20μL,按前述色谱条件测定喹诺酮类药物的峰面积,以外标法进行定量。

2.4 工作曲线

取出备用标准对照品储备液用流动相稀释,取健康人混合血清0.5 mL 6份,分别加入相应的喹诺酮类药物标准对照品溶液,得浓度为50、100、250、500、2000、4000μg/L的含药血样。以下按样品预处理操作后以上述色谱条件测定,隔日重复以上操作,共5次。以峰面积(A)对浓度(C)做回归曲线,回归方程为:诺氟沙星C=0.002 485A+3.8089(r=0.9997,n=5);司帕沙星C=0.004 419A+0.6354(r=0.9990,n=5);帕珠沙星C=0.002 832A-1.4825(r=0.9990,n=5);左氧氟沙星C=0.004 486A+0.0382(r=0.9990,n=5);莫西沙星C=0.004 709A+0.2639(r=0.9990,n=5)。

2.5 最低可定量浓度(LLOQ)

诺氟沙星、司帕沙星、帕珠沙星、左氧氟沙星和莫西沙星的最低可定量浓度均为50 ng/mL,在此浓度5种常用喹诺酮类药物均有较大紫外吸收峰,信噪比≥10。

2.6 方法回收率结果

用不同浓度的喹诺酮类药物对照品加健康人混合血清配成100、500和2000μg/L的血清样品,每个浓度各5份,按样品处理和测定项下处理测定。以血清样品中喹诺酮类药物测得量与加入量之比求算方法回收率。结果见表1～5。提示回收率符合要求。

2.7 方法精密度考察

用不同浓度喹诺酮类药物对照品加健康人混合血清配成100,500和2000μg/L的血清样品,按样品处理和测定项,于一日内平行操作处理测定5次,另按上述操作,每日处理测定1次,连续5 d,得日内和日间相对标准差。结果见表6～10。提示方法精密度符合要求。

2.8 样品稳定性试验

2.8.1 含药样品冷冻存放下的稳定性

用空白血清配制含喹诺酮类药物100、500、2000μg/L的血样,立即处理测定,并将血样-20℃存放1、2、4周时进行处理测定,结果见表11～15。提示血样-20℃存放4周后,其中的喹诺酮类药物仍稳定。

2.8.2 含药血样室温放置时的稳定性

用空白血清配制含喹诺酮类药物100、500、2000μg/L的血样,立即处理测定,并将血样室温放置(密塞、避光)4、8、12 h时进行处理测定,结果见表16～20。提示血样室温放置12 h后,其中的喹诺酮类药物仍稳定。

3 讨论

喹诺酮类药物是化学合成的含4-喹诺酮基本结构,对细菌DNA回旋酶具有选择性抑制作用的抗菌药,目前发展迅速,广泛应用于临床抗感染化疗中[7,8,9]。由于喹诺酮类药物的抗菌效果有明显的浓度依赖,只有较高的血药浓度才能得到较高杀菌效果并减少耐药菌株的产生,而药物浓度的增加又会带来毒副作用的产生,因此对某些必须使用高浓度喹诺酮类药物的患者进行血药浓度监测是非常必要的[10,11,12,13]。本实验采用的方法,血样处理简单快速,色谱系统配置简单易得,试剂都为常用廉价药品,可在基层医院对临床常用各种喹诺酮类药物进行血药浓度检测。

本实验采用高效液相-紫外检测器,一般医院均有配备,色谱柱采用普通国产Scienhome,C18不锈钢柱,价廉易得,从图1～7可以看出各种常用喹诺酮类药物均能得到较好峰形,无明显拖尾现象,理论塔板数较高。流动相采用0.01 mol/L磷酸二氢钾-甲醇-0.5 mol/L四丁基溴化氨(7822∶4,V/V),降低了磷酸盐含量,对整个高效液相管道系统影响较小,不容易产生堵塞,同时价格也较便宜,以四丁基溴化铵为扫尾剂,既改善了峰形又可提高灵敏度。以二氯甲烷(含2%异丙醇)对样品进行萃取可消除血样内源性干扰物质,提高萃取效率,得到较高的提取回收率。

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第4篇

关键词 超快速高效液相色谱法 ；荧光检测 ；氨基甲酸酯 ；农药残留

分类号 S481.8

Abstract The study aims to establish a method for simultaneous determination of 16 pesticide residues which are Aldicarb-sulfoxide， Aldicarb-sulfone， oxamyl， Methomyl， Hydroxycarbofuran， toxic metabolite， Aldicarb， Tsumacide， Propoxu， Carbofuran， Carbary， XMC， Isoprocarb， Fenobcarb， Methiocarb， Thiodicarb， Promecarb in cabbage by ultra fast high performance liquid chromatograph column derivative fluorescence detector. Meanwhile， the study also aims to the comparison of the composition of mobile phase， wavelength selection， gradient elution at different levels. Samples were ectracted by acetonitrile and purified by SPE-NH2-dispersive solid phase extraction. The colleted solution was analyzed by UFLC-FLD with post-column derivation and quantified by external standard method. The wavelengths were set at 339 nm and 445 nm. The result indicates that the calibration curves of 16 pesticides showed good linear relationship in the concentration of 0.025～1.0 mg/ L with correlation coefficients greater than 0.999. The detection limits ranged from 0.002～0.010 mg/L. The recoveries ranged from 73.0%～103.0% with the relative standard deviation （RSD） range of 1.5%～8.8% . The method is characterized as wide range of detection， rapid， sensitive， accurate， repeatable and ease of deployment.

Keywords ultra fast high performance liquid chromatography （UFLC） ； fluorescence detector （FLD） ； carbamate pesticides ； pesticide residues

自20世纪70年代以来，由于氨基甲酸酯类杀虫剂具有广谱、高效的特点，在我国使用越来越普遍[1-3]，它是一类具有-NH（CO）O-官能团有机化合物的统称，是氨基甲酸（NHaCOOH）的酯类，毒理机制是抑制昆虫乙酰胆碱酶和羧酸酯酶的活性，造成乙酰胆碱和羧酸酯的积累，影响昆虫正常的神经传导而致死，它是针对有机氯和有机农药的不足而开发的一类新型农药，被广泛地应用于粮食、蔬菜水果及经济作物的害虫防治[4-5]。氨基甲酸酯类农药除了杀虫作用之外，还有显著刺激作物生长的作用，其缺点是毒性大，易发生人、畜中毒事件，其残留对人，畜及环境可产生极大的危害。目前，氨基甲酸酯类农药的残留分析已倍受关注。

目前，氨基甲酸酯类农药残留检测方法很多，有色谱法[6-8]、生物检测法[9]、生物传感器法[10]、免疫分析法[4]、化学计量学分析法[11]等。色谱法应用最为广泛，其中以液相色谱质谱联用仪和液相色谱仪柱后衍生检测应用最为普遍。液质联用技术具有检测灵敏度高、选择性好的优点，其缺点是设备价格高昂，对检测条件要求较高，普通实验室难以达到要求，难推广。目前常用的液相色谱法可以高效、快速地测定氨基甲酸酯类农药残留量，但存在分析时间长、检测项目参数少的问题，如邵金良等[12-13]用液相色谱法完成7～10种氨基甲酸酯农药残留时间接近30 min；毛秀红等[14]用13种氨基甲酸酯测定方法时间在50 min以上；张帆等[15]的液相质谱联用法完成20种氨基甲酸酯农药残留测定时间也要22 min。本研究主要基于液相色谱柱后衍生荧光检测条件，探索同时测定16种氨基甲酸酯类农药残留的快速方法，为食品农产品相关农药残留检测提供参考。

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1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器与设备

Shimadzu 氨基甲酸酯柱后衍生系统（具体配置为：输液泵LC-30AD×2和LC-20AD×2，脱气机DGU-20A5R，自动进样器SIL-30AC，检测器RF-20Axs，柱温箱CTO-20A，化学反应箱CRB-6A，控制器CBM-20A，工作站LC-Solution）；高速匀浆机（IKA， T18 basic）；离心机（Allegra X-15R）；氮吹仪；固相萃取装置（美国Supelco公司）。

1.1.2 试剂

16种氨基甲酸酯类农药标准品中残杀威、甲硫威、灭除威、猛杀威购于德国Dr.Ehrenstorfer公司，其余农药标准品均来自于农业部环境质量监督检验测试中心（天津），纯度大于99%。

乙腈、甲醇、二氯甲烷、四氢呋喃均为色谱纯（Merk， Germany）； NaOH（特级，Wako公司），硼酸（Boric Acid）（特级，Wako公司），邻苯二甲醛（O-Phthaladehyde，OPA）（色谱级，PICKERING），β-巯基丙酸（β-Mercaptopropionic acid）（纯度：97%以上，株式会社同仁化学研究所）；SPE-NH2固相萃取小柱（500 mg/6 mL，岛津技迩公司）；水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

标准溶液：准确量取适量的上述16种标准品，用甲醇配制成质量浓度为100 mg/L的标准储备液，避光冷冻保存。用空白样品基质逐级稀释到0.025、0.050、0.10、0.500和1.00 mg/L系列的浓度，留作标准曲线用。

一级反应试剂：称取1.0 g 氢氧化钠，溶于500 mL 水中；二级衍生试剂：称取15 mg 邻苯二甲醛（OPA），溶于50 mL 甲醇中，得到A 液；称取3.34 g 硼酸和0.18 g 氢氧化钠，溶于400 mL 纯水中，得到B液；将A 液和B 液混合，过滤，脱气后加入11 μL 2-巯基丙酸，混合，使用当天配制。所有试剂和样品需用0.45 μm 以下滤膜过滤。

1.2 方法

1.2.1 提取与净化

15 g样品加入30 mL乙腈提取，高速匀浆机匀浆2 min，加入2 g氯化钠和3 g无水硫酸镁，漩涡混匀1 min，3 500 r/min离心5 min，取上清液5 mL，氮吹至近干。先用5 mL甲醇+二氯甲烷（5+95）混合液预淋洗固相萃取小柱，加入2 mL甲醇+二氯甲烷（5+95）混合液溶解残渣，上样，再用10 mL甲醇+二氯甲烷（5+95）混合液分2次洗脱，收集洗脱液，氮吹至干。加入甲醇定容至2.5 mL，过0.22 μm滤膜后供超高效液相色谱仪测定。

1.2.2 色谱条件

色谱柱：Shimadzu Shim-pack XR-ODS 75 mmL×4.6 mm I.D.，2.2 μm；流动相：A 相-水（含0.2%四氢呋喃），B 相-甲醇；流速：1.0 mL/min；柱温：50℃；进样量：2 μL；波长：Ex=339 nm，Em=445 nm ；一级反应温度100℃，流速：0.5 mL/min；二级衍生温度50℃，流速：0.5 mL/min。梯度洗脱条件见表1。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的优化

基于液相色谱要实现对16种氨基甲酸酯类农药的分离检测，不同农药种类间完全分离是本研究的重点，在综合考虑16种农药的极性特点，针对流动相组成、梯度洗脱条件、检测波长等因素进行研究，以确定适合、经济、友好、易推广的条件。

2.1.1 流动相的组成

目前使用高效液相色谱-柱后衍生法测定氨基甲酸酯类农药的流动相主要有甲醇-水体系[16]、乙腈-水体系[12]、乙腈-甲醇-水体系[17]3种。探索应用本试验所选择的色谱柱，通过不断调整梯度洗脱条件，应用甲醇-水体系作为流动相，最好的效果是实现了14种农药标准品的分离，其中残杀威与克百威无法完全分离（图1）；应用乙腈-水流动相体系时，由于乙腈极性大，分离效果更差，其中杀线威与灭多威、残杀威与克百威均不能完全分离；应用乙腈-甲醇-水流动相体系，同样无法使得残杀威与克百威完全分离。研究表明，上述3种流动相体系中以甲醇-水体系分离效果最佳。进一步以甲醇-水体系作为流动相研究，在水中添加0.2%的四氢呋喃，可实现16种农药标准品完全分离，且能够缩短出峰时间。根据分离情况，对流动相的洗脱条件稍作调整，最终采用甲醇-四氢呋喃水溶液体系作为流动相进行梯度洗脱，在25 min内实现16种目标成分完全分离（图2、3），比现行农业行业标准NY/T 761中推荐的10种氨基甲酸酯类农药测定时间短，提高了检测效率，节省试验试剂。

2.1.2 检测波长的选择

目前使用液相色谱荧光检测器测定氨基甲酸酯类农药主要有4种选择，分别是检测波长：Ex=339 nm，Em=445 nm[17-18]；Ex=330 nm，Em=465 nm[14，16，19] ；Ex=260 nm，Em=465 nm；Ex=230/330 nm，Em=425 nm。图4为16种氨基甲酸酯类农药在不同检测波长条件下的色谱图，综合比较了以上不同检测波长条件下目标分析物的响应情况，发现在Ex=339 nm，Em=445 nm和 Ex=330 nm，Em=465 nm波长下，16种农药响应值相对较高，检测灵敏度更高，更适于痕量残留的检测；在Ex=330 nm，Em=425 nm波长下，响应值较低；在Ex=260 nm，Em=465 nm和Ex=230 nm，Em=425 nm检测波长下，响应值最低。最终选择Ex=339 nm，Em=445 nm作为本实验的检测波长。

2.2 线性范围和检出限

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在上述研究设定的色谱条件下，对浓度为0.025、0.050、0.10、0. 500和1.00 mg/L的标准系列溶液进行测定，建立标准曲线，在各自线性范围内，它们的相关系数（r2）均大于0.999。根据3倍信噪比（S/N）确定16种农药的检出限（LOD），16种农药的线性关系、相关系数以及检出限等结果见表2。

2.3 准确度和精密度

以不含目标化合物的普通白菜样品为本底，分别添加3个水平（添加浓度分别为0.05、0.10及0.20 mg/L）的16种农药混合标准溶液，按照上述实验方法进添加回收试验，重复进行6次实验，得出各农药的平均回收率和相对标准偏差，见表3。结果表明，16种氨基甲酸酯类农药的回收率在73%～103%，相对标准偏差为1.5%～8.8%，满足农药残留分析的要求。

3 讨论

目前在农产品中农药残留检测常用到农业行业标准 NY/T 761-2008，推荐测定氨基甲酸酯类农药残留使用的是液相色谱柱后衍生荧光法，测定10种农药分析时间为26 min，且流动相中甲醇比例变动幅度大，对于批量样品检测需要较长的平衡时间。经典的QuEChERS法，由于前处理方法的主要优势是简单快速，还无法做到基质的完全净化，因此在与各种精密高端检测仪器联用进行痕量或超痕量分析时，容易产生基质效应，影响检测结果的准确度与可靠性，且仪器设备昂贵。本研究建立的普通白菜中16种氨基甲酸酯类农药残留量的超快速高效液相色谱检测法，实现了25 min内实现16种氨基甲酸酯类农药测定，相对于NY/T761分析时间更短，甲醇用量少，甲醇比例变动幅度不超过45%，批量样品检测需平衡时间短，节省分析时间。与此同时，具有满意的分离效果和检测灵敏度、回收率、精密度和定量限满足农药残留分析的要求，测定重现性良好，具有检测快速、检测项目多、仪器设备要求不高，易在普通实验室推广的特点，能满足日常检测需求，为基层检测机构氨基甲酸酯类农药的检测提供借鉴和参考。

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高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第5篇

用四-(对氨基苯基)-卟啉柱前衍生的高效液相色谱法测定重金属

研究了用固相萃取富集、快速分离柱高效液相色谱法测定环境水样中镍、锡、铅、镉、汞5种重金属的方法.环境水样中的镍、锡、铅、镉、汞用四-(对氨基苯基)-卟啉(T4APP)柱前衍生,然后用ZORBAX RP18固相萃取小柱萃取富集镍、锡、铅、镉、汞的T4APP络合物,经富集后的络合物用甲醇-丙酮(体积比95:5)为流动相,ZORBAX Stable Bound(4.6 mm×50mm,1.8 μm)快速分离柱为固定相分离,用二极管矩阵检测器检测.镍、锡、铅、镉、汞的检测限分别为4,5,4,3,3 ng/L,分离5种重金属元素络合物的.时间只需2.0 min,相对标准偏差为2.2%～4.1%,加标回收率为88%～104%.用该法测定环境水样中的痕量镍、锡、铅、镉、汞,结果令人满意.

作 者：李明 艾华林 柴跃东 杨艳 吴献花 胡秋芬 Li Ming Ai Hua-lin Chai Yue-dong Yang Yan Wu Xian-hua Hu Qiu-fen  作者单位：玉溪师范学院,化学与环境科学系,云南,玉溪,653100 刊 名：化工环保  ISTIC PKU英文刊名：ENVIRONMENTAL PROTECTION OF CHEMICAL INDUSTRY 年，卷(期)：2005 25(5) 分类号：X8 O665 关键词：四-(对氨基苯基)-卟啉   固相萃取   高效液相色谱法   重金属  

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第6篇

目的:建立能同时检测谷类食物中杀鼠酮、敌鼠、氯敌鼠的灵敏、准确的高效液相色谱分析法.方法:在磷酸盐缓冲溶液(pH=5.5)介质中用乙醇+乙酸乙酯(5+95)作萃取剂,通过正交试验,优化提取条件,在ZORBAX SB C18柱(250 mm4.6mm i.d,5 um)上以磷酸盐缓冲液(pH=6.3)、乙腈、甲醇组成的流动相进行梯度洗脱分离,紫外检测.结果:杀鼠酮在0.25～50.0 mg/L,敌鼠、氯敌鼠在0.50～100 mg/L均具有良好的线性,其相关系数均大于0.9993;杀鼠酮的`检出限为0.1 mg/L,敌鼠和氯敌鼠的检出限均为0.2 mg/L;回收率在80.0%～95.1%;RSD均小于8.0%.结论:该法灵敏度高、操作简便、准确、适用于谷类食物中茚满二酮类鼠药残留的检测.

作 者：陈海燕 陈晓红 金米聪 Chen Hai-yan Chen Xiao-hong Jin Mi-cong 作者单位：陈海燕,Chen Hai-yan(浙江省宁波市鄞州区疾病预防控制中心,浙江宁波,315040)

陈晓红,金米聪,Chen Xiao-hong,Jin Mi-cong(浙江省宁波市疾病预防控制中心,浙江宁波,315010)

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第7篇

通过对吸烟机接口的改装,应用酸化的2,4-二硝基苯肼的乙腈溶液作为吸收液,对主流烟气中的甲醛、乙醛、丙酮、丙醛、丙烯醛、丁醛、丁烯醛、丁酮进行衍生化,形成相应的.苯腙,采用紫外检测器在波长为360nm处进行检测,方法的最小检测限在0.54-1.65ng・μl-1之间,样品中被检测物的RSD值在6.22%-12.34%(n=6)之间.

作 者：徐济仓 侯英 杨式华 周萍萍 吴永宁 XU Ji-cang HOU Ying YANG Shi-hua ZHOU Ping-ping WU Yong-ning 作者单位：徐济仓,XU Ji-cang(云南烟草科学研究院,昆明,650106;中国疾病预防及控制中心营养与食品安全所,北京,100050)

侯英,杨式华,HOU Ying,YANG Shi-hua(云南烟草科学研究院,昆明,650106)

周萍萍,吴永宁,ZHOU Ping-ping,WU Yong-ning(中国疾病预防及控制中心营养与食品安全所,北京,100050)

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第8篇

当前国际上普遍采用液相色谱串联质谱法进行硝基呋喃代谢物的检测和确证[1]。水解和衍生化是质谱法检测硝基呋喃代谢物的关键步骤。常用的衍生化试剂是邻硝基苯甲醛,衍生时间长达16 h。本文在参考相关文献的基础上对实验条件作进一步优化:在酸性条件下使硝基呋喃代谢物与蛋白质水解,同时用邻硝基苯甲醛衍生化,研究对比发现使用水浴40℃水浴超声衍生1 h,不仅能够大幅缩短反应时间,而且可以提高检测的灵敏度,且方法的重现性好,精密度高,实现了快速检测水产品中硝基呋喃代谢物的要求[2]。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器:Aglient 1200系列高效液相色谱仪;Aglient 6410triple Quad LC/MS质质谱谱仪仪;旋旋转转蒸蒸发发仪仪(瑞瑞士士步步琪琪Rotavapor誖R-210/R-215);高速匀浆机;高速冷冻离心机等。试剂:呋喃唑酮代谢物AMOZ、呋喃它酮代谢物AOZ、呋喃妥因代谢物AHD、呋喃西林代谢物SEM标准品及其邻硝基苯甲醛衍生物2-NBA-AMOZ、2-NBA-AOZ、2-NBA-AHD、2-NBA-SEM标准品,均购于Dr.E公司;乙酸乙酯、乙腈、正己烷,均为色谱纯;盐酸、氢氧化钠、磷酸氢二钾、邻硝基苯甲醛,均为分析纯;水为二次蒸馏水。

1.2 试验方法

1.2.1 标准溶液的配制。

分别准确称取2-NBA-AMOZ、2-NBA-AOZ、2-NBA-AHD、2-NBA-SEM标准品,用乙腈配制成1 mg/m L的标准储备液,-4℃避光保存。临用前移取适量标准储备液用流动相乙腈-0.05%甲酸水(1∶9,v/v)稀释成适当浓度的系列标准溶液。

1.2.2 LC/MS/MS分析条件。

色谱条件:Eclipse XDB-C18色谱柱(2.1 mm150.0 mm,5μm);柱温35℃;流动相A为0.05%甲酸水溶液,流动相B为乙腈;梯度洗脱条件为:A相0~6 min,90%~5%;6~9 min,5%~90%;9~30 min,保持90%。质谱条件:离子源为ESI(+),多反应监测模式(MRM),利用保留时间和碎片信号比值判断定性结果。干燥气流速:10L/min;干燥气温度:350℃;雾化器压力:310.28 k Pa;毛细管电压:4 000 V。

1.2.3 样品处理。

准确称取5.00 g均质样品于50 mL离心管中,加入10 mL 0.2 mol/L的盐酸溶液,10 000 r/min均质30 s,10 mL 0.2 moL/L的盐酸溶液清洗刀头,合并匀浆液,加入100μL 50 mmoL/L的邻硝基苯甲醛的二甲基亚砜溶液,涡旋30 s后于40℃水浴中超声1 h。取出样品冷却至室温,10 000 r/min离心5 min,将上清液转移至另一离心管,并向其中加入5 mL 0.1 mo L/L的K2HPO4,用1 moL/L和0.1moL/L的NaOH调节pH值为7.5(±0.2)。加入10 m L乙酸乙酯,涡旋、振荡5 min,6 000 r/min离心5 min,吸取上清液。乙酸乙酯10 m L重复提取1次,合并乙酸乙酯层,45℃下减压浓缩近干。在残留物中准确加入5 mL乙腈-0.05%甲酸水(1∶9,v/v)定溶液溶解,涡旋30 s后加入3mL正己烷,超声1min后10 000 r/min离心5 min,下层水相经0.22μm微孔滤膜过滤后供仪器分析。

2 结果与分析

2.1 样品衍生条件的优化

4种硝基呋喃的分子量在75~201,在这个质量范围内质谱背景噪音很大,4种代谢产物的电离效率比较低,同时这些代谢产物无特异性裂解行为(主要是去氨、水或二氧化碳),因此它们的质谱检测灵敏度低。而在酸性条件下,利用一些衍生剂如邻硝基苯甲醛上的醛基(-CHO)可以与AMOZ、SEM、AHD、AOZ等4种代谢物上的含氮亲核基团胺基(-NH2)发生醛胺亲核加成反应,可以分别形成较好的特性衍生物,使衍生物的分子离子质荷比大于200,处于相对适于检测的质量区域,质谱检测灵敏度会有很大提高。另外,由于硝基呋喃代谢物多与蛋白质结合的形态存在于有机体中,在参考相关资料的基础上,选择采用盐酸水解,邻硝基苯甲醛衍生[3,4]。本试验比较了40℃恒温振荡16 h、水浴超声1 h、恒温静置16 h等3种条件下的衍生效率。研究发现,除AOZ外,其他3种呋喃代谢物衍生效率在40℃水浴超声1 h条件下的产率最高。这可能由于超声波的空化作用,使溶液的流动性大幅增加,溶液中的分子碰撞速度加快,反应速度加快。本试验选择40℃超声1 h,缩短了反应时间且产率提高,实现了快速检测(图1)。本试验中还比较了超声时间和p H值对衍生效率的影响。研究发现,在超声1 h、p H值为7.5时,4种呋喃代谢物衍生物的回收率最高[5,6]。

2.2 快速超声水解衍生方法的有效性、重现性

为了确定新方法在检测实际样品时的有效性、重现性,选择了按照GBT 20752-2006方法检测获得的3个阳性样品,其中鳜鱼(Fish)AOZ、SEM含量为0.58μg/kg和1.86μg/kg,虾1(shrimp 1)和虾2(shrimp 2)中SEM分别为0.96μg/kg和10.87μg/kg,随后对这3个阳性样品分别采用40℃水浴超声1 h和按照37℃水浴振荡16 h 2种方法进行处理,结果如表1所示。从表1可以看出,新方法无论是在低浓度范围(0.5μg/kg左右)还是在高浓度范围内(10μg/kg左右)均有较高的灵敏度、较好的重现性。因此,新方法完全能够满足对实际样品的检测分析。

2.3 样品净化条件的优化

试验中比较了HLB柱和乙酸乙酯直接提取、正己烷除脂2种方法的回收率和净化效果。研究发现,HLB柱的净化效果好,但回收率不高且操作步骤复杂,不适合作为硝基呋喃类代谢物的快速分析检测方法;另一种方法净化效果和回收率均较好。本试验最终选择了后一种方法,因为其操作简单、快捷,且满足快速检测的要求。

2.4 质谱条件的优化

硝基呋喃代谢物是强极性物质,因此采用ESI正离子电离模式。分别将2-NBA-AMOZ、2-NBA-AOZ、2-NBA-AHD、2-NBA-SEM注入离子源,在正离子模式下分别对其一级质谱分析得到分子离子峰,再对分子离子进行二级质谱分析,得到碎片信息,然后对Fragementor、collision energy进行优化,使分子离子与特征离子强度达到最大,确定最佳质谱条件(表2)。

2.5 线性范围和检出限

对样品中不含硝基呋喃代谢物的空白样品,其检出限(LOD)以3倍信噪比计算,定量限(LOQ)以10倍信噪比计算。4种硝基呋喃代谢物在0.25~25μg/kg范围内回归方程的相关系数大于0.998,检出限为0.25μg/kg,方法的灵敏度达到限量检测要求。

2.6 回收率和精密度

取3种水产品样品,各称取6份,按照试验方法处理。3个不同浓度水平的回收率、精密度见表3。从表3可以看出,4种硝基呋喃代谢物的加标回收率在81.9%~111.6%,相对标准偏差小于10%。

3 结论

建立了一种液相色谱串联质谱法方法快速检测水产品中呋喃唑酮代谢物AOZ、呋喃它酮代谢物AMOZ、呋喃西林代谢物SEM、呋喃妥因代谢物AHD等硝基呋喃类代谢物。方法的准确度、回收率和精密度均较好,满足硝基呋喃类代谢物残留检测要求。

参考文献

[1]CLAUDIA BOCK,PETRA GOWIK,CAROLIN STACHEL.Matrix-com-prehensive in-house validation and robustness check of a confirm-atorymethod for the determination of four nitrofuran metabolites in poultrymuscle and shrimp by LC-MS/MS[J].Journal of Chromatography B,2007,1-2(856):178-189.

[2]彭涛,储晓刚,杨强,等.高效液相色谱/质谱法检测奶粉中的硝基呋喃代谢物[J].分析化学,2005,8(33):1073-1076.

[3]VERDON E,COUEDOR P,SANDERS P.Multi-residue monitoring forthe simultaneous determination of five nitrofurans(furazolidone,furalta-done,nitrofurazone,nitrofurantoine,nifursol)in poultry muscle tissuethrough the detection of their five major metabolites(AOZ,AMOZ,SEM,AHD,DNSAH)by liquid chromatography coupled to electrospray tandemmass spectrometry—In-house validation in line with CommissionDecision 657/2002/EC[J].Analytica Chimica Acta,2007,1-2(520):336-347.

[4]尹江伟,刘红河,刘桂华.HPLC-MS/MS法测定水产品中硝基呋喃类化合物代谢物[J].中国卫生检验杂志,2007,12(17):2141-2143.

[5]FINZI J K,DONATO J L,SUCUPIRA M,et al.Determination of nitrofuranmetabolites in poultry muscle and eggs by liquid chromatography-tandemmass spectrometry[J].Journal of Chromatography B,2005,1-2(824):30-35.

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第9篇

摘要：多巴胺是人脑中一种重要的神经递质，帕金森病等神经系统病变与其含量异常有密切的关系。目前常用的多巴胺检测方法有光谱法、高效液相色谱法、化学修饰电极法、传感器法、毛细管电泳法，本文就高效液相色谱法做一综述。

关键词：高效液相色谱法；多巴胺；检测

中图分类号：R742.5 文献标识码：A 文章编号：1006-3315（2015）07-188-001

多巴胺（dopamine， DA）是一类儿茶酚胺类物质（CAs），它存在于神经组织及体液中，是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质，脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系，导致神经功能紊乱，是帕金森病（Parkinsons disease）发病的一个重要影响因素。另外，多巴胺还能够引起心脏兴奋，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。所以，进行多巴胺检测的研究具有重要的现实意义[1]。本文就多巴胺的高效液相色谱法检测作一综述。

高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）[2，3]也是通用的DA的检测方法。近年来，由于高效液相色谱技术的不断发展，用HPLC法分离测定体液和组织中CAs的方法日趋完善，检测灵敏度可达pmol水平。高效液相色谱法具有高分离率，所以在CAs的分析中受到极大重视，HPLC法同电化学检测和荧光检测相结合是目前最有效且最常用的方法。CAs本身有自然荧光，经HPLC法分离后，可以利用它的荧光进行检测，但是由于其自然荧光相对比较弱，不能用作生物样品灵敏的选择性测定方法。儿茶酚胺类物质具有两个官能团（氨基和邻二羟基），因此可以通过衍生化形成具有强荧光的物质，借此提高检测灵敏度。吴予明等[4]利用HPLC和荧光检测器对嗜铬细胞瘤患者和正常人24h尿中DA含量进行测定，对样品进行调酸、萃取、调碱、吸附、洗涤、解析处理后，100微升进样，结果可见：多巴胺浓度在1.3*10-7mol/L～3.8*10-6mol/L内与色谱峰峰高的线性关系良好（r=0.998）精密度RSD（n=6）4.2%～10.3%。

衍生化可分成柱前衍生化和柱后衍生化两种，在分离前需要制备荧光衍生物的柱前衍生化是，有邻苯二甲醛（OPA）、荧光胺（FA）、丹磺酞氯（DNSCI） l，2一二苯基乙二胺（DPE）及萘一2，3一二羧醛等属于柱前衍生化试剂。这些试剂可用于尿样和一些经提纯的组织样品中的儿茶酚胺类物质的测定，但对血浆中CAs的测定灵敏度较低。

CAs与1，2一二苯基乙二胺有特异性反应，用离子交换树脂柱萃取，经过简单的提纯过程，就可以进行血浆、血红细胞和尿样中CAs的测定。Nohta等用柱前衍生化方法测定了血浆和尿样中的CAs。Ragab等用上述试剂作为HPLC法化学发光检测CAs的灵敏前置柱衍生剂，测定了CAs和异丙肾上腺素，检出限为400～120amol。目前，日本Hitachi公司已研制出基于1，2一二苯基乙二胺衍生化反应的HPLC法CAs自动分析仪，并已投放市场[5]。

参考文献：

[1] 张庆云，李佳林，郑培，李艳霞，车雨轩，董晓东.大脑神经递质多巴胺的检测方法 [J]医学研究与教育，2014，31（1）：87-90

[2] Fotpoulou Maria A， Ioannou Penelope C. Post-column terbi sensitized fluorescence detection for the determination of nopinephrine， epinephrine and domamine using high-performance liq chmmatography[J].Anal Chim Acta，2002，462（2）：179～186.

[3] 马奎蓉，权迎春，秦元满，等.手性荧光衍生化反相高效色谱法分析多巴胺[J]分析测试学报，2005，24（2）：73～75

[4] 吴予明，等.中国卫生检验杂志，2000 ，10 （5） ：526 - 528.

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第10篇

目前关于草莓中农药残留检测已有不少报道[2,3,4], 但是检测农药主要集中在有机磷农药和菊酯类农药, 氨基甲酸酯类农药鲜见报道。本文采用乙腈直接提取, 固相萃取净化, 浓缩定容后直接高效液相色谱上机测定, 该方法前处理步骤简单, 并且可以同时测定7种氨基甲酸酯农药, 对于掌握草莓中氨基甲酸酯农药残留状况, 具有一定的指导意义。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Waters 2695型高效液相色谱仪, 配有FLD检测器 (美国沃特世公司) , 柱后衍生系统 (Pickering公司) , 1%电子天平 (Precisa公司) 、T-25 basic匀浆机 (IKA公司) 、MULTIVAPTM118氮吹仪 (Organomation公司) , ASPEC XL4全自动固相萃取仪 (法国吉尔森公司) , XW-80A旋涡混合器 (上海精科公司) 。

前处理用乙腈、氯化钠、甲醇、二氯甲烷均为分析纯, 广州化学试剂厂生产;氨基柱固相萃取小柱 (500 mg 6 m L) , 美国supelco公司生产;最终定容用甲醇为色谱纯, 默克公司生产;0.22μm尼龙滤膜, 天津津腾实验室设备有限公司生产;柱后衍生试剂氢氧化钠溶液、OPA稀释溶液、邻苯二甲醛和巯基乙醇均为Pichering公司生产。

涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、3-羟基克百威、涕灭威、克百威、甲萘威7种氨基甲酸酯农药标准品均购自农业部环境保护科研监测所, 浓度均为100 mg/L, 使用前用色谱纯甲醇将其稀释成所需浓度的校正曲线混标工作液。

1.2 试验方法

1.2.1 样品的提取与净化。

称取捣碎后的草莓样品25.0 g, 加入50.0 m L乙腈中, 高速匀浆2 min, 过滤到装有6 g氯化钠的100 m L具塞量筒中, 剧烈震荡3 min, 室温静置20 min待用。

从具塞量筒吸取10.00 m L乙腈提取液到烧杯中, 80℃水浴加热, 杯内通入氮气, 蒸发至近干, 加入2 m L甲醇+二氯甲烷 (1+99) 溶解残渣, 待净化。

氨基柱预先用4 m L甲醇+二氯甲烷 (1+99) 预淋洗活化, 待溶液到达柱吸附层表面时, 立即加入待净化溶液, 用15 m L离心管收集洗脱液, 用6 m L甲醇+二氯甲烷 (1+99) 分2次洗烧杯后过柱。将离心管置于氮吹仪, 50℃氮吹至近干, 色谱纯甲醇定容至2.5 m L, 旋涡混合均匀, 过0.22μm尼龙滤膜, 供高效液相色谱分析测定。

1.2.2 仪器条件。

ZORBAX Eclipse Plus C18液相色谱柱, 4.6mm250 mm, 5μm;流动相组成:甲醇、水, 梯度洗脱 (表1) ;流速:1.0 m L/min, 柱温:40℃;进样量:10μL;定量方法:外标法;检测器:荧光检测器;检测器波长:激发波长 (330 nm) ;发射波长 (465 nm) ;柱后衍生系统流速:0.3 m L/min;水解温度:100℃;衍生温度:25℃。

2 结果与分析

2.1 7种氨基甲酸酯农药的色谱图

仪器条件优化过程中根据既能使待测农药完全分离, 又能节约分析时间, 提高分析效率的原则, 按1.2.2所述仪器条件进行测定, 得到7种氨基甲酸酯农药的色谱图 (图1) , 结果表明, 7种待测氨基甲酸酯农药在30 min内得到良好分离, 且峰形对称, 能满足方法要求。

2.2 标准曲线、线性范围及检出限

用甲醇作溶剂, 准确配制成含量分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00 mg/L的涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、3-羟基克百威、涕灭威、克百威、甲萘威7种氨基甲酸酯混合标准溶液, 按1.2.2所述仪器条件进行测定, 以3倍信噪比表示方法检出限, 以各色谱峰面积为纵坐标, 对照溶液的浓度为横坐标, 绘制标准曲线, 回归方程及相关系数见表2。7种氨基甲酸酯农药在0.02~1.00 mg/L范围内呈良好的线性关系, r2均大于0.999 1。

2.3 方法回收率和精密度

在前述分析条件下, 在经检测不含待测农药的空白草莓样品中添加7种氨基甲酸酯农药混合标准溶液达到0.3mg/kg的水平, 进行回收率和精密度试验, 试验进行6个平行样测定, 7种氨基甲酸酯农药加标回收率在86.7%~106.5%, 其相对标准偏差在4.8%~10.9%。方法具有良好的精密度和回收率。

3 结论

本文采用乙腈直接提取, 固相萃取净化, 浓缩定容后直接用高效液相色谱荧光检测器 (FLD) 同时检测, 建立了草莓中7种氨基甲酸酯农药检测方法, 该方法前处理步骤简单, 准确性好, 精密度高, 适合于草莓中多种氨基甲酸酯农药同时测定[5,6]。

摘要：研究了草莓中的7种氨基甲酸酯农药 (包括涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、3-羟基克百威、涕灭威、克百威、甲萘威) 残留量的高效液相色谱测定方法。采用乙腈提取, 氨基柱净化, C18柱色谱分离, FLD检测器检测, 7种氨基甲酸酯农药在30 min内获得良好的分离, 线性相关系数r2为0.999 1740.999 987, 检测限可达0.010.02 mg/kg, 当添加水平为0.3 mg/kg时, 回收率为86.7%106.5%。该法快速灵敏, 且易操作。

关键词：高效液相色谱法,草莓,氨基甲酸酯农药,残留量

参考文献

[1]王忠和.世界草莓产业发展概况以及我国发展对策[J].科学种养, 2012 (6) :5-6.

[2]杨振华, 魏朝俊, 贾临芳, 等.SPE-GC法同时检测草莓中7种常用农药的残留[J].农业环境科学学报, 2012, 31 (11) :2304-2308.

[3]翟硕莉, 张秀丰.固相萃取-气相色谱法检测草莓中农药残留量[J].现代食品科技, 2013, 29 (6) :1434-1436.

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[5]刘靖靖, 宫萍, 张晓梅, 等.液相色谱-四极杆飞行时间质谱法快速测定草莓中6种植物生长调节剂的残留量[J].色谱, 2012 (10) :1012-1016.

高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 第11篇

关键词：植物油 苯并（а）芘 高效液相色谱

中图分类号：TS20 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）06-0033-02

Abstract：A method for determination of benzopyrene in vegetable oil by High Performance Liquid Chromatography was established. Using C18 （250mm×4.6mm×5μm） reversed-phase column， with acetonitrile and H2O （88∶12，v/v） as mobile phase，flow rate was 1.0 ml/min， and excitation wavelength was 384nm and emission wavelength was 406 nm， and column temperature was 35℃， and injection volume was 10 μl. Results： The detection limit was 0.5μg/kg， and the recovery rate arange from 95% to 103%， and relative standard deviation RSD was ≤ 2.7%. This method is simple preparation， reagent consumption， short analysis time， precision advantages for vegetable oils and efficient determination of benzopyrene residues.

Key Words：vegetable oil benzopyrene High Performance Liquid Chromatography

苯并（а）芘（BaP）是一種由五个苯环构成的多环芳烃，是公认的强致癌物之一，已成为当前环境污染中的重要监测物质[1，2，3]。苯并芘能够引起皮肤、肺、食道等部位的肿瘤和癌变，广泛存在于水、大气、土壤、动植物中。植物油中苯并芘的主要来源包括：油料作物在晾晒过程中可能受到苯并芘污染；在浸出阶段温度过高可能产生苯并芘；在油料焙烤时也可能产生苯并芘。目前，我国检测植物油中苯并芘的国标测定方法（GB/T22509-2008）中，操作过程复杂，费时、费溶剂、溶剂毒性大、回收率不稳定、对试剂和人员要求较高等问题，以致我国很多基层检验机构不能很好地用此法对植物油中苯并芘残留进行有效检测。因此，寻求更为准确、快速、简便的检测方法，对植物油中苯并芘残留进行高效的定性定量分析具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 试剂

乙腈、四氢呋喃均为色谱纯（TEDIA）；水为去离子水；滤膜（0.22μm，有机相）；苯并（a）芘标准品购于国家标准物质中心。

1.2 仪器与设备

Agilent1200高效液相色谱仪（配荧光检测器FLD）；涡旋混合器。

1.3 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18色谱柱（250×4.6mm，5μm）；流速：1.0mL/min；流动相：乙腈+水（88+12）；柱温：35℃；进样量：10μL；激发波长384nm；发射波长406[4]。

1.4 样品前处理

准确称取2.0g样品，置于10ml容量瓶中，加入5ml四氢呋喃后，摇匀后用乙腈定容，摇匀后过0.22μm有机滤膜，供HPLC检测分析。

1.5 回收率、精密度及检出限的测定

称取均匀破碎试样约2g，添加定量的BaP标准品，混匀，余下操作按1.3～1.4进行，计算回收率；将浓度为0.01μg/ml的标准样品按最佳色谱条件重复测定6 次并取平均值计算精密度；对添加逐级稀释得低浓度水平的BaP标准品的食用植物油进行测定，得到方法的检出限；采用本方法和国标GB/T22509-2008两种方法，对计算结果进行分析比较。

2 结果与分析

2.1 检测器的选择

BaP在紫外和荧光下都有吸收峰。但荧光检测器只对带荧光基团的物质有响应，因此可有效去除那些不带有荧光基团的杂质对样品测定的干扰，大大提高BaP的检测灵敏度，故本文采用荧光检测器检测。

由于大多数有荧光的化合物在230nm波长下都能被激发，因此在230nm激发波长下选择多波长发射，发现406nm为最佳发射波长，在固定406nm发射波长后选择多波长激发，最终选择激发波长384nm，发射波长为406nm（图1）。

2.2 苯并芘高效液相色谱测定条件

比较了3种流动相，分别为乙腈+水（84+16）、乙腈+水（88+12）、乙腈+水（90+10），发现乙腈+水（88+12）条件下苯并芘和样品中干扰物能达到较好的基线分离；流速为1.0ml/min 时，苯并芘出峰时间约为12.5min，分析时间短，有利于快速分析且峰形较好，基本达到基线分离效果。

nlc202309012153

2.3 线性关系与检测限

对BaP标准溶液逐级稀释后，配制一系列标准溶液，浓度分别为0.5μg/L、2.5μg/L、5.0μg/L、10μg /L、25μg/L、50μg/L，进样高效液相色谱仪上机测定，以峰面积A对BaP浓度Amt（μg/L）作线性回归方程，A=1.13136927Amt+2.2138403，线性相关系数r=0.99985，线性关系良好，可以依据此方程进行定量分析。根据对添加低浓度水平的BaP样品的测定，以3倍信噪比计算检出限得到，本方法的检出限为0.5μg/kg。

2.4 加标回收率和精密度

为了计算检测方法的回收率和考察本方法的实用性，向大豆油（图2）和花生调和油（图3）2份样品中，分别加入2种不同浓度BaP标样（表1），经样品前处理后，采用HPLC检测。结果显示，选定的样品经处理后，样品中BaP的加标回收率在95%～103%之间，RSD≤2.7%，符合食品检验分析的要求；与国标GB/T22509-2008试验结果对比，结果说明：本方法样品前处理简便，且回收率和精密度均较高，方法高效实用。

3 讨论

该研究建立了利用高效液相色谱法高效快速测定食用植物油中苯并芘残留的方法。试验结果表明，其回收率为95%～103%，最低检出量为2.5μg/kg，符合国标中对食用植物油中苯并芘的检测要求。该法样品预处理简单，试剂消耗少，分析时间短，明显提高了检测效率。且其准确性和精密度好，是测定食用植物油中苯并芘含量的较理想方法。

参考文献

[1]李伟紅，戴廷灿，周瑶敏 等.高效液相色谱法测定熟肉制品中的苯并（α）芘[J].江西农业学报， 2008，20（1）： 86～88.

[2]刘福岭，戴行均.食品物理与化学分析方法[M].北京： 轻工业出版社，1987：41l～425.

[3]Meudec A， Dussauze J，Jourdin M， et al. Gas chromatographic mass spectrometric method for polycyclic aromatic hydrocarbon analysis in plant biota[J].Journal of Chromatography A， 2006， 1108（2）：240-247.

[4]田晓玲，柏云江.高效液相色谱法测定饲料中的苯并（a）芘[J].饲料工业，2005，26（1）： 53～54.