苯酚类物质范文

苯酚类物质范文（精选3篇）

苯酚类物质 第1篇

关键词：硝化细菌,对氨基苯酚,2,4—二氯苯酚,抑制,非竞争性抑制

1 绪 论

随着人们生活质量的不断提高,人们对周围环境的要求也日趋提高,而工业的迅速发展和人类活动的加剧,使得我们身处的环境遭受到各种各样的污染,近年来,根据国内外的资料报道,水源水和自来水的污染相当严重,而氨氮、和挥发性酚类已经成为了水体污染的重要指标。

氮、磷污染已经逐渐成为各大水体的主要污染物。根据报道[1],近十年来我国富营养化的湖泊、水库的比例已从5%上升到了55%左右。从2005年黄河控制断面的监测数据来看,重要污染指数COD基本得到控制并逐年有所下降,而氨氮指标已跃为影响黄河水质的首要污染指数;2004年淮河水中氨氮的含量几乎超过饮用水标准的数十倍,尤其是安徽段已经造成了对人民生活和工农业生产的严重危害;2005年1月对21个重点湖库的水质监测结果表明,主要污染物为总氮和总磷。造成水体严重污染的另一个因素是水中含有的有机物,尤其是有毒有害的有机污染物。有机污染物对人类的危害已为人们所认识,许多有机物具有较强的亲脂性和稳定性极易富集于生物体内,并产生致癌、致畸型和致突变的毒性作用。许多有机物即使在环境中的浓度极低,但由于其在生物体内的富集作用,也会对人体健康构成威胁[2]。大气中的酚类可以通过湿沉降的途径进入水体;另外,人工合成的有机物质如农药、酚、醛等主要通过石油化工的合成生产过程及产品使用过程中排放出的污水,不经处理排入水体也造成一定污染。酚类物质由于有以下的污染特征:①比较稳定,不易被微生物分解;②有害于人类健康;③某些条件下,好氧微生物也能够对其进行分解。所以酚类排入水体后严重影响水质及水产品质量。

硝化细菌是在生物硝化脱氮中起主要作用的微生物,它的量的多少直接影响硝化效果和生物脱氮的效率。据研究表明,污水中硝化细菌的浓度与硝化速率成正比[3],提高污水处理中硝化细菌的硝化作用对生物脱氨具有十分重要的意义。研究发现,一些工业废水的生物脱氮系统在运行中经常会有不稳定的情况发生,这主要是由于工业废水成分复杂,其中的许多有毒有害物质(包括有机物和重金属)都会对硝化过程产生严重抑制,其持续作用导致硝化效率不断下降直至消失[4]。因此为了确保生物硝化过程的有效正常运行,有必要对有毒有害物质对硝化作用的抑制效应和抑制规律进行深入的研究,从而为工业废水生物脱氮工艺的合理设计与稳定运行提供理论指导。

酚类物质的存在不仅会对硝化过程产生抑制作用,而且它的存在还会严重阻碍硝化反应的正常进行。为此本实验着重选取为研究对象,研究不同浓度的对氨基苯酚、2,4—二氯苯酚对氨氮生物硝化过程的影响,并得出抑制类型和其半致死浓度。

1.1 有毒物质对硝化过程抑制毒性的测定方法

随着硝化作用在废水治理中的地位日益提高,保护敏感的硝化菌群也成为必要,从而推动了抑制硝化细菌的有毒物质的检测方法的发展。早在1976年,Stensel就将硝化细菌做成生物传感器对毒物进行检测。Kroiss等在20世纪90年代初,通过测定加入亚硝酸细菌特异性的抑制剂(ATU)后硝化细菌的耗氧速率的差值,来检验废水中是否含有有毒物质[5]。目前鉴定有毒有机物对硝化细菌抑制毒性的方法有很多种。常用来计算抑制程度的指标主要有以下几种:硝化速率(NH3-N)的去除速率或NOx-N的生成速率),硝化细菌的比增值速率,硝化细菌的呼吸速率,硝化细菌脱氢酶(DHA)活性以及硝化过程中ATP的还原等。

1.2 有毒物质的抑制类型及动力学特性

抑制作用可以分为可逆抑制与不可逆抑制两大类。如果某种抑制可通过如透析等物理方法把抑制剂去掉而恢复酶的活性,则此类抑制成为可逆抑制。而若抑制剂与酶的基团成共价结合,此类抑制将导致酶的永久性失活,为不可逆抑制。有机化合物种类不同,对硝化过程的抑制机理就可能不同,反映出的抑制动力学也就有所不同。根据产生抑制的机理不同,可逆抑制又分为竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制。各种抑制类型和动力学特性列于表1[6]。

2 实验内容

2.1 硝化菌的富集培养

2.1.1 菌种来源

待富集的污泥取自某城市污水处理厂A-O法中O段污泥。

2.1.2 培养条件[7]

(1)温度:

温度对硝化细菌的生长和硝化速率有较大的影响。其适宜的温度范围为20~30 ℃。若温度低于10 ℃以下,硝化细菌的生长及硝化作用将显著减慢。而温度高于35 ℃,则对硝化细菌的酶系具有破坏作用。因此控制好温度,是本实验的关键,在实验中,我们采用加热棒,将温度控制在25 ℃左右。

(2)DO:

硝化细菌正常代谢需要的溶解氧。充足的DO,能加速硝化细菌的生长。因此,本实验中维持DO为5 mg/L左右。

(3)pH值:

硝化细菌喜欢偏微碱性的环境,适宜的pH范围为7.5~8.5。本实验培养用NaHCO3,Na3PO4控制pH值在7.5~8.5之间。

2.1.3 培养装置及方法[7]

本次试验采用间歇式反应器富集培养硝化细菌。反应器体积为6 L,每天曝气约18 h,每天换水一次,每次换水之前,先沉淀,用虹吸方式吸去上清液,再通过逐渐提高基质——NH3-N浓度并加入相应比例的硝化菌富集培养液。培养60天后,再取出硝化污泥供实验。

2.1.4 硝化细菌富集培养基

表2列出了实验中硝化细菌富集培养基的成分,称量误差不超过10%。

2.2 监测分析方法

3 实验结果与讨论

3.1 硝化菌的富集培养

对硝化细菌的富集培养,要注意控制适当的温度,pH值,和氧气的量。在本实验中,培养反应器温度由加热器控制在25 ℃左右,进水pH值控制在8.0~8.5左右,出水pH值在7.5~8.5左右,并提供充足的曝气量以维持硝化过程的正常进行,DO在5.0 mg/L左右。

经过一段时间的培养,反应器出水氨氮浓度小于0.5 mg/L,亚硝态氮小于0.1 mg/L,硝态氮的出水浓度到后期也基本稳定。泥呈红褐色,这是典型的硝化生物所具备的颜色。所有进出水氮元素基本守恒,反应器运行状态稳定,硝化菌状态良好,可供抑制研究使用。

3.2 对氨基苯酚对硝化过程的抑制研究

3.2.1 动力学测定实验方法[7]

在每次实验之前,从富集硝化细菌的反应器中取出适量的污泥,清洗离心(2000 r/min)2次,洗尽NO2-N和NO3-N后加入按一定比例稀释的培养基中进行间歇试验(总体积为1 L),在恒温水浴锅中培养,按一定的时间间隔取样,并测定试样的NH3-N,NO2-N,NO3-N浓度及pH值。实验过程中,DO=5.0 mg/L,T=25 ℃。

3.2.2 不同浓度的对氨基苯酚、2,4-二氯苯酚对硝化过程的抑制

工业废水中多种有毒物质都对硝化过程具有抑制作用,实验着重选取对氨基苯酚作为研究对象,采用实验室间歇反应器富集培养的硝化污泥在不同浓度的对氨基苯酚条件下对氨氮的硝化做了一系列间歇实验。

许多研究结果表明,氨氮生物硝化的动力学可以用Monod方程来模拟[8,9],本实验用origin 6.0软件计算出不同浓度的对氨基苯酚的污泥硝化速率及硝化细菌的动力学参数。

*抑制率=(未加抑制剂时的Vmax-加抑制剂时的VI,max)/未加抑制剂时的Vmax。

*抑制率=(未加抑制剂时的Vmax-加抑制剂时的VI,max)/未加抑制剂时的Vmax。

由表4、表5可以看出,随着对氨基苯酚、2,4-二氯苯酚浓度的增加,氨氮硝化的VI,max(不同抑制剂浓度下的最大比基质利用速率)都随之下降,对氨基苯酚对最大比基质利用速率的抑制率也逐渐增加,半饱和常数KS值变化不大。

3.2.3 对氨基苯酚、2,4-二氯苯酚对氨氮生物硝化抑制特性

从表4、表5的模拟结果可知,随着对氨基苯酚、2,4-二氯苯酚浓度的增加,虽然VI,max值逐渐减小,但是半饱和常数KS值却变化不大,加入对氨基苯酚时,硝化污泥的KS值始终在10.48~11.06 mg/L左右,是与无抑制条件下的半饱和常数值10.86 mg/L接近;加入2,4-二氯苯酚时,硝化污泥的KS值始终在5.05~5.30 mg/L左右,是与无抑制条件下的半饱和常数值5.11 mg/L接近。也就是说,对氨基苯酚和2,4-二氯苯酚对这种污泥抑制的特点是:随着抑制剂浓度增加,最大比基质利用速率值下降,但半饱和常数KS值基本不变。这与非竞争性抑制的特点是一致的[10],所以对氨基苯酚对硝化细菌的抑制为非竞争性抑制。即使增大底物即氨氮的浓度也不能减弱抑制剂的影响。

非竞争性抑制的动力学关系为:

$V=\frac{V{}_{\max }\cdot S}{(1+\frac{C{}_{{\rm I}}}{{\rm K}{}_{{\rm I}}})({\rm K}{}_S+S)}$或$V{}_{\text{Ι},\max }=\frac{V{}_{\max }}{(1+\frac{C{}_{{\rm I}}}{{\rm K}{}_{{\rm I}}})}$(1)

而由于非竞争性抑制中KS值不发生变化,所以根据式(2)中抑制剂浓度和比基质利用速率的关系即可求得抑制常数KI的值。

$\frac{1}{V{}_{\text{Ι},\max }}=\frac{1}{V{}_{\max }}+\frac{1}{V{}_{\max }{\rm K}{}_{{\rm I}}}C{}_{{\rm I}}(2)$

根据式(2)和表6中数据对抑制常数KI的模拟如图1、图2所示。

由对氨基苯酚的斜率可得抑制常数KI=17.03 mg/L,同样根据非竞争性抑制的特点,污泥的EC50值等于抑制常数KI,即EC50=KI=17.03 mg/L。

由2,4-DCP的斜率可得抑制常数KI=1.92 mg/L,同样根据非竞争性抑制的特点,污泥的EC50值等于抑制常数KI,即EC50=KI=1.92 mg/L。

4 结 论

(1)本实验选取富含硝化细菌的活性污泥作为富集培养的对象,采用间歇式反应器,通过逐渐提高基质——NH3-N浓度并加入相应比例的硝化菌富集培养液对硝化细菌进行定向富集培养。在硝化细菌富集培养阶段,对氨氮、亚硝态氮、硝态氮三个出水指标进行监测发现,反应器出水氨氮浓度都小于0.5 mg/L,亚硝态氮小于0.1 mg/L,随着每天加入基质的增多,硝态氮的出水浓度相应增加到后期也基本稳定。2个月后得到大量硝化细菌富集培养物,大部分异养细菌被淘汰,硝化细菌成为优势菌群。泥呈土黄色,这是典型的硝化生物所具备的颜色,和文献所述相符。所有进出水氮元素基本守恒,反应器运行状态稳定,硝化菌硝化状态良好,可供抑制研究使用。

(2)用origin 6.0软件模拟对氨基苯酚的抑制作用得Monod方程为$V=\frac{2.34S}{10.86+S}$,则得动力学参数Vmax=2.34 d-1和KS=10.86 mg/L;2,4-二氯苯酚的抑制作用Monod方程为V=

$\frac{1.18S}{5.11+S}$,则得动力学参数Vmax=1.18 d-1和KS=5.11 mg/L。说明2,4-二氯苯酚对硝化细菌的抑制作用小于对氨基苯酚。

(3)对氨基苯酚、2,4-二氯苯酚对硝化细菌的抑制均为非竞争性抑制:随着对氨基苯酚、2,4-二氯苯酚浓度增加,最大比基质利用速率值下降,但半饱和常数KS值基本不变。即使增大底物即氨氮的浓度也不能减弱抑制剂的影响。

参考文献

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苯酚类物质 第2篇

关键词：金荞麦；（-）表儿茶素；体外抑菌

中图分类号： S482.2+92文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0308-03

收稿日期：2014-02-18

基金项目：安徽省高校省级自然科学研究重点项目（编号：KJ2012A280）；国家级大学生创新创业训练计划（编号：201210376004）。

作者简介：黄仁术（1976—），女，新疆阿克苏人，硕士，副教授，主要从事天然活性物质研究。E-mail：ahhrs@126.com。植物是抑菌活性物质的天然宝库，Grange等报道约有2 400种植物具有防治有害生物的活性[1]。金荞麦（Fagopyrum dibotrys）作为一种具有开发前途的资源植物，目前有关其抑菌方面的研究较少，且未涉及具体的抗菌活性物质成分。如有关文献报道金荞麦乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链球菌、沙门氏菌等有抑制作用[2-5]；而陈福勇等发现金荞麦乙醇提取物对鸡白痢沙门氏菌、金黄色葡萄球菌有较好的抑菌作用，对大肠杆菌无抑制作用[6]；张永仙等则报道金荞麦乙醇提取物对猪霍乱沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、猪与鸡的致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、猪链球菌、克氏肺炎球菌等几乎无抗菌作用，但在体内却有明显的抗感染作用[7]。实际上，金荞麦乙醇提取物为一类含原花色素的缩合性单宁混合物，主要由（-）表儿茶素及其二聚体组成，其中（-）表儿茶素单元的含量占65%～70%[8]。为此，本研究对金荞麦乙醇提取物——（-）表儿茶素类活性物质的含量进行测定，并在此基础上确定其对一些代表性细菌和真菌的抗菌效果，从而为无残留、无毒副作用及细菌不易产生耐药性的抗菌药物开发奠定基础。

1材料与方法

1.1试验材料

金荞麦采集于安徽省潜山县；（-）表儿茶素纯度为98% （中国药品生物制品检定所）；试验菌株包括革兰阳性菌、革兰阴性细菌和真菌，其中革兰阳性细菌以金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为代表，革兰阴性菌以大肠杆菌（Escherichia coli）为代表，真菌以黑曲霉（Aspergillus niger）、灰绿青霉（Penicillium glaucum）、酿酒酵母（Saccharomyces carlsbergensis）为代表；牛肉膏蛋白胨培养基，PDA培养基。

1.2仪器设备

TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），202-1型电热恒温干燥箱（上海浦东英丰科学仪器有限公司），HH-2/HH-4数显恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司），YX-450电热蒸汽压力消毒器（上海三申医疗器械有限公司），PYX-150HA恒温恒湿培养箱（科立仪器），SW-CJ-1C洁净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）。

1.3试验方法

1.3.1金荞麦（-）表儿茶素类活性物质的提取与测定建立香荚兰素-盐酸分光光度法对（-）表儿茶素类活性物质含量的测定标准曲线：D=0.226 2C-0.012 6，R=0999 3，其中，D为吸光度，C为测定液浓度（μg/mL）。称取20.0 g金荞麦根部粉碎物，70%乙醇浸泡24 h，提取物用布氏漏斗抽滤提取得到上清液，上清液继续用旋转蒸发仪旋转蒸发得到浓缩提取液，直至冷凝装置不再有液体滴出，倒出提取液，量出为37 mL，封口冷藏保存。提取液测定时，用移液枪取10 μl提取液和10 mL乙醇于50 mL容量瓶中，用1%香荚兰-浓盐酸定容，测定吸光度，根据标准曲线计算测定液中（-）表儿茶素类活性物质的浓度[9]，试验重复测定3次。

1.3.2供试菌株的复苏与纯化无菌条件下用接种环接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，37 ℃条件下培养 1 d。接种酿酒酵母、黑曲霉、灰绿青霉于PDA培养基，28 ℃条件下培养3 d。再用接种环挑取单个菌落接种培养，如此重复4次，得到纯种菌体。用接种铲刮下纯种菌体，无菌水稀释备用。

1.3.3牛津杯法测定（-）表儿茶素类活性物质抑菌效果在倒好的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上分别加入100 μL金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌菌液，在PDA培养基上分别加入100 μL酿酒酵母、黑曲霉、灰绿青霉菌液，涂抹均匀。用镊子夹取已经灭菌的牛津杯置于平板中央，用已灭菌的移液枪移取200 μL浓缩物加入牛津杯中。细菌在37 ℃条件下培养1 d，真菌在28 ℃条件细培养3 d，观察并测量抑菌圈。

1.3.4（-）表儿茶素类活性物质的MIC、MBC测定每组取灭菌小试管10支，按照1～10编号，细菌每管加入牛肉膏汤1 mL，真菌每管加入马铃薯葡萄糖液1 mL；采用二倍稀释法，用吸管吸取提取液 1 mL放入第1管，并反复吹匀；接着从第1管吸出1 mL放入第2管同样吹匀后吸出1 mL放入第3管，依次逐管进行稀释到第8管；然后各管加入0.5 mL供试菌菌液。第9管为加入1 mL提取液但不加菌液的阴性对照管，第10管为不加提取液只加0.5 mL供试菌菌液的阳性对照管。细菌在37 ℃条件下培养1 d，真菌在28 ℃培养3 d，根据各管菌液生长情况测定最低抑菌浓度（MIC）。

nlc202309040105

进一步将未见细菌或真菌生长的各试管内的培养液移种到牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或PDA培养基上，细菌在37 ℃条件下培养1 d，真菌在28 ℃条件下培养3 d，根据培养皿中菌落生长情况测定最小杀菌浓度（MBC）。

2结果与分析

2.1金荞麦（-）表儿茶素类活性物质的含量

由表1可见，金荞麦的乙醇提取物经旋转蒸发浓缩后，其（-）表儿茶素类活性物质含量达到10.019 mg/mL，总提取量占其块根干物质质量的1.85%。

表1金荞麦（-）表儿茶素类活性物质含量测定情况

重复测定液吸光度测定液中活性物质

含量（μg/mL）提取液中活性物质

含量（mg/mL）Ⅰ0.4391.9969.982Ⅱ0.440 2.00110.004Ⅲ0.443 2.01410.071平均0.4412.00410.019

2.2（-）表儿茶素类 活性物质抑菌效果

由图1可知，金荞麦（-）表儿茶素类活性物质在10.019 mg/mL浓度时对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、大肠杆菌均形成抑菌圈，表明有明显的抑菌作用；但对黑曲霉、灰绿青霉没有形成抑菌圈，表明没有抑菌作用。进一步测量表明，相同浓度下，金荞麦（-）表儿茶素类活性物质对上述菌群的抑菌圈直径为：金黄色葡萄球菌>酿酒酵母>枯草芽孢杆菌>大肠杆菌（表2）。

2.3（-）表儿茶素类活性物质的MIC、MBC

从表3中可知，金荞麦（-）表儿茶素类活性物质对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）为1.252 mg/mL，最小杀菌浓度（MBC）为5.010 mg/mL；对大肠杆菌的MIC为 2.505 mg/mL，对枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的MIC为 5.010 mg/mL。

3讨论

金荞麦乙醇提取物原液——（-）表儿茶素类活性物质含量在10.019 mg/mL浓度时，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、大肠杆菌有抑菌作用，对黑曲霉、灰绿青霉没有抑制作用。（-）表儿茶素类活性物质对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的MIC分别为1.252、2505、5.010、5.010 mg/mL，对金黄色葡萄球菌的MBC为5010 mg/mL；因提取液原液的浓度关系，未测定出大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的MBC。金荞麦（-）表儿茶素类活性物质的抑菌活性不同，主要原因是活性成分对不同菌种的菌丝或孢子的生长抵制能力不同所致[10]。同时，试验结果与前人对金荞麦乙醇提取物的抑菌情况报道不一，可能与提取液中的活性物质浓度不同相关。

香荚兰素比色法测定（-）表儿茶素时，所测物质应包括（-）表儿茶素、（+）儿茶素，以及二者的二聚体和没食子酸酯等（-）表儿茶素类物质总含量[11]。此类含原花色素的缩合性单宁混合物可以通过结合细菌细胞壁蛋白质，聚集细胞脂质，以及单宁自氧化产生过氧化氢，干扰细菌细胞膜的通透性，进一步改变细菌细胞壁脂肪酸的组成，从而减缓细菌的生长[12]。

表2金荞麦（-）表儿茶素类活性物质对供试菌的抑菌圈的影响

供试菌抑菌圈直径（mm）金黄色葡萄球菌13枯草芽孢杆菌10酿酒酵母12大肠杆菌9黑曲霉-灰绿青霉-注：“-”表示未见明显抑菌圈。

表3金荞麦（-）表儿茶素类活性物质的MIC、MBC

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苯酚类物质 第3篇

关键词：高效液相色谱,对氨基苯酚,C6H7NO,HOC6H4NH2

一、引言

高效液相色谱法 (high performance liquid chromatography;HPLC) HPLC高效能分析技术, 也称为高效液相色谱检测法。这种分析技术, 不受样品挥发性和热不稳定性的限制。因此, 这种方法多用在对高沸点、热不稳定及强极性化合物的定量分析上。一般的合成染料和医药产品等, 一些原料中都含有对氨基苯酚这种中间体。对于对氨基苯酚这种热稳定性差的物质, 是不能用气相色谱法对之加以检测分析。同样的, 由于在合成产物的成分中, 既有原料有含有其他的副产原料, 用紫外分光光度法, 也不能得到很有效的检测。一般的化学实验室和制药厂, 都用化学方法来进行定量分析。方法是在对氨基苯酚与副产原料分离的基础上, 进行滴定分析, 但是这种化学分析方法在操作工序上较为复杂, 也很浪费时间。本文用HPLC高效液相色谱, 紫外检测器, 经过采用定性定量分析对氨基苯酚相关物质的方法, 发现该方法简便快速便于掌握, 同时发现HPLC高效液相色谱检测法分离完全, 定量准确。

二、试验环节

(一) 仪器与试剂。

(1) 岛津液相色谱仪10A高效液相色谱仪。 (2) CQ-250-超声波清洗器。用于实验仪器玻璃器皿的清洗、分析前的脱气、药物的分散钨丝、放射性物体等的清洗。用于液相色谱、农残留检测仪的配套, 实验仪器玻璃器皿的清洗、分析前的脱气、药物的分散, 钨丝、放射性物体等的清洗以及加速化学反应等。 (3) 分析纯试剂:对氨基苯酚 (简称PAP, 是对硝基氯苯的重要下游产品, 是精细化工中间体, 主要用于医药、染料、橡胶、饲料、石油、照相等行业) 、苯酚、硝基苯。 (4) 试样:由河北冀衡 (集团) 药业有限公司实验室提供。 (5) 柱温:室温。

(二) 流动相正相操作。

最理想分离, 在色谱分析中, 需要选择最佳的色谱条件, 即正相操作法, 这样, 计算机才能建立和优化HPLC分析方法。色谱柱:RNH2 (键合氨基柱) , 选择正相操作, 在F=0.6ml/min流速下, 对氨基苯酚、硝基苯及苯胺的标样, 将谱图记下, 观察在这种条件下的分离情况。出现分离偏差, 再次通过调整流动相配比, 目的是将三组分完全分离。

三、实验分析

(一) 定性分析。

采用标准物质保留值对照法。如果出现分离样品完全相同的时候, 分别重复标样进对氨基苯酚、硝基苯及苯酚三次。当标样和样品中有关物质在时间持续上等同, 很显然, 组分与标样物质同一。

(二) 定量分析。

最常用的一种定量方法是采用外标法。做标准曲线查浓度。用标准品的峰面积或峰高与其对应的浓度, 做一条标准曲线。测出样品的峰面积或峰高, 在标准曲线上查出其对应的浓度。配置标准溶液后进样。配制浓度0.2～2.5mg/ml的标准溶液, 分别在每个浓度下进样, 做标准曲线。以峰面积Ai对标样的浓度Ci作图, 得出线性同归方程Ai=0.95+7.24Ci, 系数是0.9999。然后准确称出待分析的样品的重量。如果出现和标准曲线完全相同时, 按照一定的比例进样, 通过打印面积, 结合标准曲线, 找对应浓度值, 并根据公式计算对氨基苯酚含量。公式:

V-配制试样的体积, 单位ml;Ci-从标准曲线上查得的浓度, mg/ml。

四、实验结果与讨论

(一) 分离条件的选择。

1. 前提条件。

在HPLC高效液相色谱分析中, 先将样品中各组分离, 才能进行定性定量, 流动相的组成决定HPLC的分离性能。对氨基苯酚是合成产物, 硝基苯和副产物苯胺, 属于残料。由于这些物质有一定的水溶性也有一定的油溶性, 就决定了流相的选择上正相、反相操作不受限制。

2. 系统操作。

反相流动相里一般都含有水分, 流动相变化灵活。首先试用反相系统 (RP) , 色谱柱为高密度键合十八烷基色谱柱 (C18) , 适合分析弱极性的物质。检测多环芳烃系列化合物, 可识别化合物具有的立体结构差异, 从而与普通的C18柱有不同的选择性, 根据ODS基的键合密度, 平面分子和非平面分子的相对保留时间会发生改变。

流动相为甲醇:水=80∶20, 变为甲醇:水=20∶80时, 对氨基苯酚与苯胺此时未分开。此时转为正相操作, 溶液中溶质微粒和溶剂微粒的相互作用导致溶解, 根据相似相溶的原则, 将柱子换成键合氨基柱。流动相以已烷为主, 为增大溶解性, 加入适量极性溶剂。如果得到的色谱图出的峰分的不完全, 可以加大水的比例。如果出得峰太靠后而分离效果又不错, 可加大甲醇的比例, 可使峰出的早一些。多次实验到配比为已烷∶乙醇=20∶3时, 三组分完全分离。谱图如图1。

(二) 结果的定性分析。

经保留值对照可知图1中1号峰硝基苯;2号峰苯胺, 3号峰对氨基苯酚。送检样品是硝基苯合成的, 不同反应条件下的对氨基苯酚产物。测的结果各条件下都有对氨基苯酚生成, 各图中的峰3。如图:苯基键合的链长对键合相的样品负荷量、溶质的容量因子及其选择性有不同的影响, 苯基键合相表面浓度相同时, 随着苯基链长增加, 溶质的保留值增加。

由于样品组分相对简单保留值对照法不会降低准确的定性分析。键合相不同, 导致同种组分在不同色谱柱上的保留时间不一致, 对各组分的保留能力也会不同, 峰位置就变化。

外标法对送检的三个样品定量分析后得出对氨基苯酚的百分含量:1号含量为21.6%, 2号含量为43.8%, 3号含量为52.3%。明显得出, 第三种反应条件效果最佳。

五、结语

所建立的HPLC是这种高效能分析技术高效液相色谱分析, 具有不受样品挥发性、热不稳定性的制约, 可以普遍用于对高沸点、热不稳定和极性较强的化合物的分析上, 如对氨基苯酚等热稳定性差, 不能用气相色谱等方法分析的物质。对于重要的医药、染料中间体对氨基苯酚, 采用高效液相色谱分析, 操作方法简单, 得出结果快速, 也不需要事先对样品的特殊加工处理, 非常适合在实验室和生产中的动态监测与质量控制。

参考文献

[1].王莲鸳等.硝基苯加氢合成对氨基酚用负载铂催化剂的制备[J].催化学报, 2002