O型合成肽疫苗论文

O型合成肽疫苗论文（精选4篇）

O型合成肽疫苗论文 第1篇

1材料

1.1试验动物

随机选择55 ~ 73日龄的仔猪若干头,无菌前腔静脉采血分离血清,用酶联免疫吸附试验检测母源抗体,筛选出母源抗体阴性仔猪30头并进行编号。

1.2试验疫苗

猪口蹄疫O型合成肽疫苗为上海某生物医药有限公司生产,批号为20131203,有效期至20141202。

1.3检测试剂

猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒,武汉科前生物制品有限责任公司生产,批号为140302, 有效期至20150112。

2方法

2.1免疫剂量与方法

每头仔猪耳根后肌肉深层注射猪口蹄疫O型合成肽疫苗1 m L。

2.2采血时间

分别于免疫后第7,15,30,45,60,90,120,150, 180天无菌前腔静脉采血,分离血清,4 ℃ 保存,次日检测。

2.3抗体检测

采用酶联免疫吸附试验法检测抗体水平。按猪O型口蹄疫病毒抗体检测试剂盒使用说明书进行操作、判定。样品OD630值 ≥0. 4时判为阳 性; 样品OD630值 < 0. 4时判为阴性。

3结果

3.1抗体检测结果

30头仔猪免疫后不同时间的抗体检测结果见表1。在整个试验过程中,因其他原因导致3头仔猪死亡( 免疫后第15天死亡1头,第45天死亡2头) 。

注: OD 值为 OD630值。

3.2血清样品OD值水平分布及平均OD值

免疫后7 ~ 180 d血清样品OD值水平分布及平均OD值情况见表2和图1。

份

注: OD 值为 OD630值。

3.3免疫不良反应调查

免疫后72 h内细心观察试验仔猪,30头仔猪均没有出现采食减少、体温升高及死亡等免疫不良反应情况。

4讨论

1) 从表1可知,接种猪口蹄疫O型合成肽疫苗后第7天,有22份血清样品OD值﹥ 0. 4,表明试验猪获得了免疫抗体,阳性率为73. 33% ,平均OD值为0. 621; 第60天平均OD值为2. 027,达到峰值,第150天阳性率下降至77. 78% ,平均OD值为0. 662, 第180天阳性率为22. 22% ,平均OD值为0. 319。试验结果表明,使用猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫1次,7天时即有70% 以上的猪只获得较好的免疫保护,到第150天时群体保护率仍为77. 78% 。

2) 从表2看出,免疫后的30 ~ 90 d所检血清样品OD值,除1份小于1. 2外,其余均大 于1. 2, 120天时血清样品OD值下降,在0. 4 ~ 0. 7之间的有8份,在0. 7 ~ 1. 2之间的有6份,大于1. 2的有11份,小于0. 4 ( 阴性) 的有2份。表明试验猪体内的免疫抗体水平在30 ~ 90 d时较为整齐。

3) 对猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后抗体消长变化的研究表明: 猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫1次即可确保高效价抗体维持150 d。猪口蹄疫O型合成肽疫苗具备免疫原性高、生物安全性好、免疫副反应小等优点,在生产实践中值得普及、推广。

摘要：为了掌握遵义市猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后抗体的消长规律,以便科学地使用猪口蹄疫O型合成肽疫苗,2014年在遵义市绥阳县某种猪场筛选30头55~73日龄的仔猪,注射猪口蹄疫O型合成肽疫苗,对其进行免疫抗体水平监测、免疫副反应和抗体维持时间调查。结果表明:仔猪免疫后7 d产生抗体,阳性率达73.33%,60 d达到峰值。猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫1次即可确保高效价抗体维持至150 d,说明猪口蹄疫O型合肽疫苗免疫原性高、生物安全性好、免疫不良反应小,在生产实践中值得推广。

O型合成肽疫苗论文 第2篇

目前, 广泛使用的猪O型口蹄疫疫苗有灭活疫苗、基因工程疫苗、合成肽疫苗, 其中以灭活疫苗和合成肽疫苗使用得最多。猪O型口蹄疫合成肽疫苗是用固相多肽合成技术在体外人工合成含有口蹄疫病毒主要抗原位点的多肽, 并连接人工合成的可激活辅助性T淋巴细胞的短肽, 以此作为免疫原, 加油佐剂混合乳化制成[3]。研究表明, 该苗具有较好的免疫原性, 免疫副反应较小[4,5,6]。传统的口蹄疫的防疫中使用的猪O型口蹄疫灭活疫苗, 是采用细胞培养病毒, 然后加灭活剂和油佐剂混合乳化而成, 在免疫过程中不良反应较大[7]。

为进一步探讨这两类疫苗在诱导抗体产生和安全性上的差异, 试验选择某规模化猪场, 应用猪口蹄疫O型合成肽疫苗 (Ⅱ) 和灭活疫苗进行免疫试验, 并用猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白酶联免疫吸附试验诊断试剂盒进行抗体检测, 以期更好地指导猪O型口蹄疫的预防控制, 也为制订合理的免疫方案提供依据。

1 材料

1.1 试验用疫苗

猪O型口蹄疫合成肽疫苗 (Ⅱ) (批号为0801002) , 申联生物医药 (上海) 有限公司提供。

猪O型口蹄疫灭活疫苗 (批号为L219654) , 中牧医药有限公司生产。

1.2 检测试剂

猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白酶联免疫吸附试验诊断试剂盒 (批号为200710001) , 上海优耐特公司生产。

1.3 受试动物

在广东某规模化猪场选择品种、来源相同的75日龄商品猪48头, 人工投料, 自由采食和饮水, 常规管理, 饲喂广东某猪场常规分阶段饲料。

2 方法

2.1 试验设计与分组

试验共分4组, A组为猪O型口蹄疫合成肽疫苗单次免疫组, B组为猪O型口蹄疫灭活疫苗单次免疫组, C组为猪O型口蹄疫合成肽疫苗双次免疫组, D组为猪O型口蹄疫灭活疫苗双次免疫组, 各组均为12头育成期商品猪。任何发生在工作中的不能预料到的事件 (疾病、事故等) 均记录在临床观察记录本中。

2.2 免疫接种

从2008年9月8日开始分别对4组猪进行首次免疫, 耳根后深层肌肉注射, 1.5 mL/头;C组、D组在进行首次免疫后28天再进行第2次免疫, 也于耳根后深层肌肉注射, 2.0 mL/头。

2.3 接种疫苗后的体温检测

首次免疫前检测直肠温度1次, 疫苗接种后每天检测1次, 连续检测4 d;第2次免疫前检测直肠温度1次, 疫苗接种后每天检测1次, 连续检测4 d。

2.4 接种疫苗后的采食量检查

首次免疫前检测采食量1次, 疫苗接种后每天检查1次, 连续检查4 d;第2次免疫前检查采食量1次, 疫苗接种后每天检查1次, 连续检查4 d。

2.5 接种疫苗后的临床观察

观察接种疫苗后猪的临床表现, 如精神状况、过敏反应、腹泻和咳嗽等情况。

2.6 血样的采集

首次免疫前采血1次, 第2次免疫前采血1次, 以后分别在首次免疫后和第2次免疫后15, 30, 60, 90, 120天采血1次 (每份血样存留1份备查) 。

2.7 抗VP1结构蛋白抗体水平的ELISA检测

按猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白酶联免疫吸附试验诊断试剂盒说明书进行检测。

3 结果与分析

3.1 免疫副反应观察

3.1.1 体温变化

各组免疫后第4天, 猪体温均呈现不同程度的波动, 但波动范围均在猪的正常体温范围之内。使用合成肽疫苗的试验组 (A组和C组) , 免疫后4 d内猪群体温在39.4～40.2 ℃之间;使用灭活苗的试验组 (B组和D组) , 免疫后4 d内猪群体温在39.8～40.8 ℃之间。具体见图1。

由图1可知, A组和C组在免疫后第1天体温均出现显著或极显著提高, 平均提高幅度分别为0.384 ℃ (P<0.05) 和0.484 ℃ (P<0.01) , B组和D组分别为0 ℃ (P>0.05) 和1.095 ℃ (P<0.01) 。

3.1.2 采食量变化

各组免疫后3 d内采食量有所下降, 第4天恢复正常, 属于正常免疫不良反应[8], 具体见表1。

3.1.3 猪群健康状况

接种合成肽疫苗后猪只精神状况良好, 无咳嗽和明显过敏现象, 但其中有2头猪在首免后发生轻微腹泻, 经及时治疗后痊愈。接种灭活疫苗后猪只精神状况良好, 但其中有2头猪发生轻微咳嗽和腹泻, 经及时治疗后痊愈;二免前采血时有1头猪应激过大出现休克, 使用肾上腺激素抢救有效。

3.2 VP1结构蛋白抗体水平的ELISA检测结果

A组首次免疫猪O型口蹄疫合成肽疫苗后, 以OD值作为判定抗体水平是否合格的标准, OD值≥0.117时合格 (达到合格标准时保护率为100%) , 于第60天达到100%, 120天时仍然达到83.33%, 且抗体水平相对比较高[OD值在60～120 d较免疫前显著或极显著提高 (P<0.05或P<0.01) ];B组首次免疫猪O型口蹄疫合灭活苗后, 抗体保护率于第60天达100%, 但抗体水平相对比较低, 30天达到显著 (P<0.05) , 60天达到极显著 (P<0.01) , 但从90天开始抗体水平迅速下降, 维持时间短, 从总体上来看猪群免疫不合格;C组二次免疫猪O型口蹄疫合成肽疫苗后, 抗体保护率于第30天达100%, 并一直维持到120天 (见表2) , 且抗体一直处于极高水平;D组二次免疫猪O型口蹄疫合灭活苗后, 抗体保护率于第60天达100%, 但抗体水平相对比较低, 维持时间短, 从总体上来看为猪群免疫不合格。不同方案免疫后抗体量变化见图2。

注:同列数据肩标**表示差异极显著 (P<0.01) 。

3.3 VP1结构蛋白抗体经ELISA检测后合格率比较

以OD值作为判定抗体水平是否合格的标准OD值≥0.117时合格。首次免疫合成肽疫苗后于第15天可检测到VP1结构蛋白抗体, 第30天抗体合格率达到75.00%, 第60天达到100%, 后逐步下降;首次免疫灭活疫苗后于第15天可检测到VP1结构蛋白抗体, 第30天抗体合格率达到66.67%, 第60天达到100%, 后迅速下降;二次免疫合成肽疫苗后于第15天可检测到VP1结构蛋白抗体, 第30天抗体合格率便达到100%, 并一直维持到商品猪上市;二次免疫灭活疫苗后于第15天可检测到VP1结构蛋白抗体, 第30天抗体合格率达到50.00%, 第60天达到100%, 后迅速下降。合格率比较结果见表2。

4 讨论

4.1 应激反应情况

在试验过程中, 接种灭活疫苗的商品猪有的出现过敏反应, 而接种合成肽疫苗的商品猪无明显过敏现象。临床上猪出现过敏反应的直接原因是传统灭活疫苗采用全病毒颗粒, 不可避免地存在着致敏因子对异体蛋白产生变态反应[9]。猪O型口蹄疫合成肽疫苗的多肽抗原纯度高, 生产过程中不需要灭活剂灭活, 不存在异体蛋白, 是一种单一的抗原, 能够有效避免异体蛋白引发的过敏反应[10]。由图1可见:A组和C组在免疫后第1天体温均有明显提高, 平均提高幅度分别为0.384 ℃ (P<0.05) 和0.484 ℃ (P<0.01) , 上升幅度不大, 而且比较平缓;B组和D组分别为0 ℃ (P>0.05) 和1.095 ℃ (P<0.01) , 值得注意的是D组, 第1天体温上升十分显著, 说明二次免疫灭活疫苗对机体有较强的刺激作用。

4.2 免疫次数

试验在进行二次强化免疫后的试验组 (C组和D组) , 免疫抗体群体保护率不但高而且维持的时间长, 这说明免疫抗体群体保护率与免疫次数呈正相关, 即强化免疫可以保持免疫抗体群体保护率高水平且维持时间长。从图1可以看出, 合成肽疫苗采取首次免疫的效果远好于传统灭活疫苗首次免疫的效果, 若在首免28天加强免疫1次, 对猪群将具有很强的保护, 保护率达到100%。加强免疫后抗体水平有大幅提高, 有效增强免疫力和延长疫苗免疫期。据了解, 广东省大多数猪场只免疫1次, 不进行二次免疫以及短期内加强免疫, 猪O型口蹄疫免疫效果差, 起不到有效的保护作用, 难以控制疫病的传播。

4.3 两种疫苗免疫效果对比

由图2及表2可知, 4组的猪O型口蹄疫抗体阳性率均在免疫后60天达到最高值, 合成肽疫苗首次免疫、合成肽疫苗二次免疫、灭活苗二次免疫的抗体合格, 以合成肽疫苗二次免疫的抗体水平最佳。说明合成肽疫苗临床使用的安全性较高, 免疫抗体合格率明显优于灭活苗。

在试验中, 经ELISA检测, 合成肽疫苗注射组在二免后30天抗体合格率达100%, 抗体合格率长时间维持在高水平, 至试验结束时仍然维持在较高水平, 考虑到生产实际中的性价比, 笔者认为采用合成肽作单次免疫已经能够达到对育成猪免疫保护的效果, 而合成肽疫苗加强免疫则可长时间显著提高抗体水平, 颇适合于对母猪的免疫, 通过母乳传递, 可使仔猪获得较强的被动免疫力;而灭活苗抗体水平反应迟缓且较低, 而且加强免疫时有较强的免疫不良反应, 说明疫苗中杂蛋白含量较高。研究为制订科学合理的免疫程序和严格的免疫操作规程, 提高免疫效果提供了重要参考。

就O型灭活疫苗本身来讲, 还存在一定缺陷, 一是只对O型病毒有效;二是由于疫苗是灭活苗, 只能产生体液免疫, 不能产生细胞免疫, 因此免疫期短, 1头肉猪从出生到上市需要进行多次免疫接种, 其缺点是显而易见的;三是具有一定不良反应, 对其他猪病的防控有一定的负面影响。而O型合成肽疫苗具有较高的安全性, 由于其合成肽成分较单一, 有效抗原浓度高, 加之含有能够刺激辅助性T淋巴细胞的短肽, 因此免疫效果特别好, 如能配合双次免疫程序则可以达到非常满意的效果, 是一种值得推荐的疫苗。

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O型合成肽疫苗论文 第3篇

1 材料与方法

1.1 疫苗种类

猪口蹄疫O型合成肽疫苗 (多肽2600+2700+2800) :申联生物医药 (上海) 有限公司生产。

1.2 样品采集

选择2个接种猪口蹄疫O型合成肽疫苗的规模化猪场, 从A场首次免疫后30d的猪群中采集30份血样, 从B场二次免疫后15d的猪群中采集20份血样。

1.3 检测试剂盒

1.3.1 猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒 (VP1-ELISA) :购自上海优耐特生物医药有限公司。

1.3.2 猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒 (LB-ELISA) :购自兰州兽医研究所。

1.3.3 正向间接血凝试剂盒 (IHA) :购自兰州兽医研究所。

1.3.4 猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒 (O-ELISA) :购自武汉科前生物制品有限公司。

1.4 检测方法

按使用说明书进行检测。同时取20份样品做2的倍比稀释, 使用农业部免疫方案规定的VP1-ELISA、LB-ELISA和IHA试剂盒检测出最高抗体效价。

1.5 结果判定

按照试剂盒要求判定, 使用VP1-ELISA的抗体效价≥25判定为合格, 使用液相阻断ELISA的抗体效价≥26判定为合格, 使用IHA的抗体效价≥25判定为合格, 使用O-ELISA的抗体效价≥25判定为合格。

2 结果

2.1 从表1可以看出, 4种试剂盒检测2个猪场的50份血清样品平均阳性率分别为98.0%、94.0%、54.0%、90.0%, 3种ELISA试剂盒检测阳性率在90%以上, IHA试剂盒检测阳性率最低。

2.2 使用3种试剂盒同时检测20份血清样品, 从表2抗体检测阳性合格率可以看出, 使用VP1-ELISA试剂盒与LB-ELISA试剂盒检测相比较, 阳性吻合率为95%, 有1份样品不合格;但与IHA试剂盒检测相比较, 阳性吻合率为5 5%, 有9份样品不合格。

2.3 从检测抗体效价滴度可以看出, 同一份血清的效价使用VP1-ELISA与LB-ELISA检测结果相差不大, 在0~2个滴度之间, 整体平均抗体效价相差0.7个滴度;但与IHA的检测结果相差较大, 整体平均抗体效价相差3.8个滴度。

3 分析讨论

3.1根据检测结果, 猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒 (VP1-ELISA) 和口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒 (LB-ELISA) 都可以用来评价猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后血清抗体水平, 这和朱图寿、云涛、侯英慧、陈晶等试验结果相同。虽然都可以用来评价猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后血清抗体水平, 但LB-ELISA试剂盒操作过程时间较长, 工作量大, 技术要求较高, 建议使用农业部文件规定的、操作简便、快速、特异性高的VP1-ELISA试剂盒。

3.2间接血凝试剂盒因其操作简便, 仪器设备、操作技术等要求不高, 在国内基层使用比较普遍, 但多数省份反映该方法的特异性、敏感性存在质疑, 建议有条件的检测室最好选用ELISA试剂盒进行口蹄疫免疫抗体的评价。

3.3正向间接血凝试验是在基层口蹄疫灭活苗检测中应用最为普遍的检测方法, 操作简单, 但应用该方法不能科学评价猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后血清抗体水平, 这与占松鹤、秦荣香等人的报道相一致。可能是因为其致敏抗原非纯净病毒粒子, 而是含大量的细胞蛋白, 故而特异性不好;同时其致敏抗原是全病毒粒子, 检测的抗体是全病毒结构的多克隆抗体, 因而通过它们检测结构蛋白中微小的多肽抗体的敏感性显然远远不够。

摘要：使用国产的4种猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒 (VP1-ELISA) 、猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒 (LB-ELISA) 、猪口蹄疫正向间接血凝试剂盒、猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒 (O-ELISA) 同时检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后的50份血清样品, 阳性率分别为98.0%、94.0%、54.0%、90.0%。同时使用农业部规定的3种试剂盒分别检测20份血清样品的抗体滴度发现, VP1-ELISA试剂盒和LB-ELISA试剂盒阳性符合率为95%, 平均抗体滴度相差0.7, 与IHA试剂盒符合率为55%, 平均抗体滴度相差3.8, 故LB-ELISA试剂盒可以用来评价合成肽疫苗免疫的抗体, 而IHA试剂盒不能用来检测合成肽疫苗免疫的抗体。

关键词：猪口蹄疫,合成肽疫苗,抗体检测

参考文献

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O型合成肽疫苗论文 第4篇

传统口蹄疫灭活疫苗常常产生较大的免疫反应,若救治不及时可继发感染,严重的可造成动物死亡,给养殖业主造成重大损失,从而给免疫工作实施带来较大困难。临床上猪出现过敏反应的直接原因是全病毒疫苗中存在着异体蛋白,对致敏因子产生的变态反应所致。近年来出现一种新型猪口蹄疫疫苗猪口蹄疫O型合成肽疫苗(多肽2570+7309),与传统灭活苗相比不含任何感染因子,具有较高的生物安全性,抗原为纯化的中和性抗原多肽,无任何杂质干扰,具有免疫的高效性,并且该疫苗不含任何多肽以外的异体蛋白,基本上不会产生过敏反应。猪口蹄疫O型合成肽疫苗的多肽抗原纯度高,生产过程中不需要灭活剂灭活,不存在异体蛋白,是一种单一的抗原,同时使用法国SEPPIC公司进口专用佐剂,从而能有效避免异体蛋白引发的过敏反应。

为验证合成肽疫苗的临床应用效果,2011年春防工作中,我们在2个养猪场和10个乡镇就猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活苗进行了临床对比,现报道如下。

1 免疫接种反应的主要症状* 通讯作者

1.1 严重反应型

注射疫苗后立即(3~5 min)出现步态蹒跚,如喝醉酒样,呼吸急促,站立不稳,肌肉震颤,口吐白沫,倒地,角弓反张,全身抽搐,四肢做游泳运动。皮肤充血潮红,继而发紫,特别是在腹下,可视黏膜发绀,粪尿失禁。抢救不及时甚至来不及抢救即死亡。

1.2 轻微反应型

注射疫苗后8~24 h出现体温升高0.5 ℃左右,食欲不佳,精神萎靡,行动迟缓,24~48 h 后可自愈。

1.3 局部反应型

个别猪注射疫苗后,注射部位肿胀,出现红、肿、热、痛症状,患畜不能扭头和低头采食。肿胀部位吸收比较慢,时间稍长会形成脓包或结节。

2 猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活苗的临床应用比较

2011年4月,我们在贵州省六枝特区郎岱镇章人上养殖场,郎岱、洒志、陇脚、中寨、毛口5个乡镇使用进口佐剂猪口蹄疫O型合成肽疫苗;同期在贵州省六枝特区落别乡何艳畅欣养殖场,木岗、落别、大用、平寨、新窑5个乡镇使用猪口蹄疫O型灭活疫苗进行对比。结果见表1、表2。