合并基因型范文

合并基因型范文（精选7篇）

合并基因型 第1篇

1 材料与方法

1.1 一般资料

实验组:129例冠心病患者为2003~2006年我院心内科住院患者, 男87例, 女42例;年龄41~75岁, 平均58.1岁。单纯心肌梗死患者11例、单纯心绞痛患者68例、冠心病合并2型糖尿病患者50例, 冠心病及2型糖尿病诊断符合WHO标准。健康对照组:系同期门诊系统体检健康人23例, 男17例, 女6例;年龄43~67岁, 平均55.0岁;无动脉粥样硬化、冠心病、高血压、糖尿病等疾病。

1.2 标本采集

取研究对象空腹静脉血作为实验标本。

1.3 仪器

实验仪器:Fluo Cycle荧光定量PCR仪 (上海科华公司) , PC-100扩增仪 (日本) , LDZ5-2自动平衡离心机 (国产) , UV-紫外线分光光度计 (日本) , 超速离心机, 7080全自动分析仪 (日本) 。主要试剂:Apo B100引物 (北京华美公司提供) 。引物1:5′-CCAACCCTTACTTGAAT-TCCAAGAGCACCC-3′。引物2:5′-CTCTGCTCCCAGAGG-GAATATAGGGTTGG-3′。DNA分子量标准PBR322DNA-Bst N1Digest (北京华美公司提供) 。DNA聚合酶d NTPs、MspⅠ、琼脂糖、丙烯酰胺、双丙烯酰胺、淋巴细胞分离液。

1.4 实验方法

(1) 载脂蛋白B100 (Apo B100) 血清学测定, 参见浙江温州伊利康公司Apo B100测定试剂盒。 (2) DNA模板制备参见Pe-ters, Hansen制备PCR反应体系, 其成分为:dd H20331, 10×buffer51, 4倍d NTPS (100 nmol/L) 15μl, Apo B100引物1、2各0.5μl, 模板4μl, 覆盖无菌液体石蜡50μl, 置扩增仪中预变性96℃300s、72℃300 s, 随后93℃90 s、44℃90 s、72℃120 s, 这样30个循环后延伸10 min。 (3) MspⅠ消化, 取扩增液101+101 MspⅠ37℃过夜。 (4) 扩增酶切产物检测。取酶切液8μl加入12%聚丙烯酰胺液凝胶电泳槽中, 电极1~8 V/cm电泳5~10 h。电泳完毕, 将凝胶全部没入。于室温染色30~45 min, 取出凝胶, 用紫外透射仪检查结果。

1.5 统计学处理

计量资料用均数±标准差 (x±s) 表示, 组间比较采用单因素方差分析, 全部数据用SAS软件处理。

2 结果

酶切产物:正常人的扩增片段可切开为一条126 bp带及另一条9 bp带, 而异常者仅见1条149 bp带。11例单纯心肌梗死患者中, 血清Apo B100基因水平异常者4例 (36.4%) ;68例心绞痛患者中, 血清Apo B100基因水平异常者21例 (30.9%) , 50例冠心病合并2型糖尿病患者中, 血清Apo B100基因水平异常者24例 (48.0%) , 冠心病患者组Apo B100水平异常者明显高于对照组 (P<0.01) 。冠心病合并2型糖尿病患者冠心病组患者更易出现Apo B100基因改变。

3 讨论

Apo B是低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C) 的主要载脂蛋白, LDL-C具有促进动脉硬化发生的作用[1,2]。另外, Apo B有刺激动脉平滑肌细胞增殖, 并进入内膜下层的作用, Apo B浓度增高者, 动脉粥样硬化多已累及冠状动脉[3,4]。本研究冠心病组的Apo B显著高于正常对照组, 显示了Apo B与动脉粥样硬化的密切关系。Apo B基因突变可引多种血浆脂蛋白代谢异常。Apo B100是肝脏合成和分泌富含三酰甘油的VLDL所必需的载脂蛋白。Apo B100是VLDL、IDL和LDL的结构蛋白, 参与脂质转运;其单一遗传位点上有两个特异性的等位基因, 即强结合和弱结合。中等结合形式的Apo B100是强结合和弱结合两种形式的杂合子[5,6,7]。基于本次基因水平酶切试验结果看, 心绞痛和心肌梗死患者PCR扩增产物MsⅠ酶切后, 发生变异率分别为30.9%, 36.4%, 说明两种冠心病与Apo B基因水平碱基突变有关。脂质代谢紊乱是糖尿病代谢紊乱的一个重要方面, 它与糖尿病并发症的发生有密切关系, 特别是冠状动脉性心脏病与动脉粥样硬化等。糖尿病患者发生血脂代谢紊乱是糖尿病并发大血管病变的主要原因及危险因素, 有的糖尿病患者最终出现CHD并发症[8]。研究结果表明, CHD伴2型糖尿病组患者存在更为严重的脂质代谢紊乱。冠心病合并2型糖尿病患者Apo B100水平明显高于对照组 (P<0.01) 。冠心病合并糖尿病的患者同时出现糖代谢的异常更加恶化脂类代谢, 在糖尿病中若持续性血糖升高, 则产生非酶糖基化作用[9]。而非酶糖基化作用易形成动脉粥样硬化斑块。同时高血糖时, 非酶糖基化还对纤维蛋白、胶原蛋白、内皮细胞、凝血因子、血小板等不同程度的影响, 导致血管壁增厚、弹性减退、血液呈高凝状态, 这些都导致冠心病在临床症状更加严重。因此Apo B100基因改变可以增加冠心病合并糖尿病患者的临床症状, 对CHD合并糖尿病患者应更加重视对血脂异常的治疗。

摘要：目的:观察冠心病 (CHD) 合并2型糖尿病 (T2DM) 患者载脂蛋白B100 (ApoB100) 基因突变的情况, 并探讨冠心病合并2型糖尿病与载脂蛋白B100基因突变的相关性。方法:采用PCR与限制性内切酶MspⅠ酶切的方法, 对129例冠心病患者及23例健康人进行载脂蛋白B100基因突变的研究。结果:11例单纯心肌梗死患者中, 血清ApoB100基因水平异常者4例 (36.4%) ;68例心绞痛患者中, 血清ApoB100基因水平异常者21例 (30.9%) , 50例冠心病合并2型糖尿病患者中, 血清ApoB100基因水平异常者24例 (48.0%) , 冠心病患者组ApoB100水平异常者明显高于对照组 (P<0.01) 。结论:冠心病患者中部分心绞痛和心肌梗死两类患者病因与ApoB100基因突变有关, CHD合并T2DM患中ApoB100基因突变患者则更易出现冠心病临床并发症。

关键词：冠心病合并2型糖尿病,载脂蛋白B100,基因突变

参考文献

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[3]杨振华, 周新, 王治国, 等.全国卫生专业技术资格考试指南[M].北京:知识出版社, 2002:205.

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[5]叶平, 陈保生, 王士雯.应用聚合酶链反应研究载脂蛋白B基因多态性及其临床意义[J].中华医学检验杂志, 1998, 17 (1) :7-11.

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[8]Orcards TJ.Dyslipoproteinmia and diabetes[J].J End Metab Clin, 1990, 12 (3) :361-363.

合并基因型 第2篇

1 对象与方法

1.1 对象

1.1.1 于2014年在新疆医科大学第一附属医院干部病房住院的T2DM合并冠心病患者共140例作为研究组，其中男103例，女37例；平均年龄（65.13±9.85）岁。正常对照组189例，其中男103例，女58例；平均年龄（54.10±10.92）岁。

1.1.2 纳入标准

1.1.2. 1 糖尿病诊断标准采用2010年美国糖尿病学会（American Diabetes association,ADA）糖尿病的诊断标准：（1）糖化血红蛋白（HbAlc）≥6.55%;(2）空腹血糖（FPG）≥7.0 mmol/L;(3）口服葡萄糖耐量试验（OGTT）中2 h血糖≥11.1 mmol/L;(4）有高血糖的症状或高血糖危象，随机血糖≥11.1 mmol/L。

1.1.2. 2 冠心病诊断标准均符合国际心脏病学学会及WHO1979年标准，有必要时经超声心动图，冠状动脉造影等以协助检查。

1.1.3 排除标准年龄小于20岁的患者；半年内发生过心肌梗死、脑血管意外、严重创伤、重大手术后患者；合并肝肾及造血系统严重疾病、精神病的患者；妊娠期及哺乳期妇女

1.2 方法

1.2.1 血生化指标检测

清晨空腹时抽取静脉血，采用美国雅培C16000全自动生化分析仪检测血总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、甘油三酯（TG）、血糖（GLU）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Cr）、纤维蛋白原（FBG）等生化指标；采用普利生血小板比浊仪NJ4检测血小板（PLT）聚集率。

1.2.2 PTS标志物的检测

采用全自动血凝分析仪检测FBG水平、APTT、PT和D-DD。

1.2.3 ALDH2基因测定

ALDH2基因型测定取静脉血2 ml，乙二胺四乙酸二钠抗凝，凝胶电泳提取DNA，聚合酶链反应（PCR）方法进行扩增，纯化产物后用Baio基因芯片图像分析软件V 2.0进行图像扫描与数据分析，输出检测结果。

1.3 统计学分析

数据处理应用SPSS 19.0软件，其中计量资料以±s表示；用Q-Q图进行正态分布检验，非正态资料的分析采用秩和检验；采用线性相关分析患者的PTS分子标志物与生化指标的相关性；采用非条件logistic回归分析PTS与ALDH2基因的相关性，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 糖尿病合并冠心病组与对照组一般资料比较

将糖尿病合并冠心病组与对照组的HbAlc、TG、GLU等11项生化指标采用秩和检验法进行分析。结果显示，与对照组比较，糖尿病合并冠心病组的体重指数（BMI）、HbAlc、TG、GLU、Cr以及血清胱抑素C水平明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。而PLT、TC、HDL和LDL水平明显下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 2型糖尿病合并冠心病组与对照组血栓前状态标志物测定结果

采用秩和检验法，将糖尿病合并冠心病组与对照组的PTS标志物水平进行比较发现，糖尿病合并冠心病组的PT、APTT均减少，而FBG、D-二聚体水平明显上升（P<0.05）。见表2。

注：D-DD—D-二聚体；PT—凝血酶原时间；APTT—活化部分凝血酶原时间；FBG—空腹血糖。

2.3 糖尿病合并冠心病组患者PTS分子标志物与其他指标相关性分析

采用线性相关分析法对患者的PTS分子标志物与生化指标进行比较，结果显示，D-DD与TG、血清胱抑素C水平密切相关；FBG与PLT、HbAlc、血清胱抑素C水平密切相关。见表3。

2.4 糖尿病合并冠心病组患者PTS与ALDH2基因的相关性分析

采用非条件logistic回归分析对目标血栓前状态与ALDH2基因的相关性进行分析。结果表明，ALDH2两个等位基因型与糖尿病合并冠心病患者PTS无相关性。见表4。

3 讨论

糖尿病并发症包括糖尿病合并冠心病、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、糖尿病足等多种疾病，其中糖尿病合并冠心病为糖尿病患者最严重的并发症[5]。据多种危险因素干预试验（multiple risk factorIntervention trial,MRFIT）统计，具有高血压、脂代谢紊乱、吸烟等冠心病危险因素的2型糖尿病患者死亡率比与其年龄匹配的对照组高出4.4倍[6]。

糖尿病合并冠心病时，会加快血栓形成。血管内皮功能紊乱是冠心病早期的特征性改变，是2型糖尿病患者并发冠心病重要的病理基础，也是血栓形成的重要过程。患者在形成血栓前将出现内皮细胞受损、血液流速减慢或血液黏度增高、抗凝蛋白和凝血因子异常等病理改变[7,8,9]。此时，PT、APTT、FBG和D-DD作为凝血、抗凝和纤溶指标，可作为PTS的标志物。其中，PT反映外源性凝血系统功能，APTT反映内源性凝血系统功能[10];FBG是血小板聚集的重要递质，其水平的升高引起血液黏度升高、血流减慢、抗凝及纤溶活性下降，从而促进血栓的形成；D-DD是交联纤维蛋白在纤溶酶作用下所产生的一种稳定而特异的降解产物，其水平升高表示继发性纤溶活性增强，可作为体内高凝状态和血栓形成的重要标志物。因此，前人采用上述4项指标的异常变化判断糖尿病合并冠心病患者是否处于血栓前状态[11,12,13]。

本研究中糖尿病合并冠心病组的PT和APTT水平明显低于对照组，说明患者血液处于高凝状态。而FBG水平明显高于对照组，表明2型糖尿病患者凝血活性比正常组高。而研究组D-DD的水平也明显高于对照组，提示糖尿病合并冠心病患者凝血和纤溶指标出现了不同程度的异常改变，即处于PTS。本研究线性相关分析还表明，PLT、HbAlc、血清胱抑素C、TG等因素也是糖尿病合并冠心病患者处于PTS的主要相关危险因素。这些指标对早期发现、早期治疗具有重要的临床价值。

ALDH2基因不仅是酒精代谢过程中的关键酶，也是体内重要的氧化应激分子，具有抑制细胞凋亡的作用。人体器官和组织中至少有12种不同基因编码的ALDH，其中只有ALDH2表现出遗传多态性。目前该基因成为糖尿病、心血管疾病发病机制研究的热点。现今，在国内外关于ALDH2基因与糖尿病，心血管疾病、呼吸道疾病之间相互作用方面的研究很多且结论不一致。有文献报道，增强ALDH2活力可显著改善糖尿病大鼠的肾脏损害，降低糖尿病诱导的肺损伤，提示ALDH2对糖尿病肾病和糖尿病肺有保护作用[14,15]。并且近期的一项研究也提示，ALDH2在心肌缺血保护中发挥了重要作用[16]；与此相反，有研究表明，在汉族冠心病患者中，突变型ALDH2基因是T2DM的独立危险因素[2]，上述研究结果不一，有待深入研究。

本次调查数据采用非条件logistic回归分析法初步发现ALDH2两个等位基因（野生型，突变型）与糖尿病合并冠心病患者PTS标志物之间无显著相关性。我们首次报道了ALDH2两个等位基因与T2DM合并冠心病PTS关联的阴性结果，这为进一步探讨ALDH2基因在PTS形成过程中所起的作用大小、ALDH2两个等位基因对临床干预PTS的影响大小提供了更多、更广的参考。

本项研究目前纳入的病例数较少，提示ALDH2两个等位基因与糖尿病合并冠心病患者PTS有无相关性的研究有待进一步深入。临床中可继续收集明确诊断为T2DM，冠心病（排除心肌桥、具有稳定型心绞痛病史）的患者，扩大病例数后进一步观察ALDH2基因两个等位基因与T2DM合并冠心病PTS的关联性。

作者声明

本文无实际或潜在的利益冲突

摘要：目的 探讨2型糖尿病(T2DM)合并冠心病患者血栓前状态(PTS)与ALDH2基因多态性的相关性。方法 将140例T2DM合并冠心病患者作为研究组,189例健康检查者作为对照组。采用全自动生化仪测定生化指标;采用全自动血凝分析仪检测纤维蛋白原(FBG)水平、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、D-二聚体(DD);采用Baio基因芯片图像分析软件V 2.0对ALDH2基因进行图像扫描与数据分析,输出检测结果。采用logistic回归方法分析ALDH2基因多态性与T2DM合并冠心病PTS之间的相关性。结果 与对照组比较,T2DM合并冠心病组的PT、APTT值均下降,而FBG、D-DD水平明显升高。线性回归分析显示,D-DD与甘油三酯(TG)以及血清胱抑素C水平密切相关;FBG与PLT、糖化血红蛋白(Hb Alc)、血清胱抑素C水平密切相关;差异均有统计学意义(P<0.05)。ALDH2两个等位基因中野生型(ALDH2*1,*504Glu)、突变型(ALDH2*2,*504Lys)与糖尿病合并冠心病患者PTS相关指标无相关性。结论 T2DM合并冠心病组的PT、APTT值均下降,而FBG、D-二DD水平明显升高,提示T2DM合并冠心病患者处于PTS;显示PLT、Hb Alc、血清胱抑素C、TG等因素是糖尿病合并冠心病患者处于PTS的主要危险因素;发现T2DM合并冠心病患者PTS与ALDH2基因多态性无显著相关性。

土拉菌菌株的基因型别 第3篇

最近的一项分子流行病调查显示, 来自黑龙江、吉林、内蒙古的33份阳性标本的Ft—M3基因座共有7种基因型, 重复数在七至十五之间。其中, 七次重复的基因型在holarctica亚种中尚属首次发现, 而过去这种基因型往往在tularensis亚种中才能检测到。

Xhol酶切可以将弗朗西斯菌分为五种菌型, 而利用Bam HI可以分为四种型。若用Xho I和Bam HI双酶切, 则49株分离株可被分为七个群。其中, 大部分holarctica菌株属于III群, 主要分离自西班牙和捷克。Tularensis亚种均属于I群, novicida亚种和F.philomiragia分别属于VI群和VII群。分离自美国的菌株分别属于I、Vl、VII群, 而分离自俄罗斯的菌株属于V群。

利用基因外重复回文序列PCR (PEP-PCR) 和肠细菌基因间共有重复序列PCR (ERIC-PCR) 的方法也可以对弗朗西斯菌属的各种进行区分.PEP—PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳分离可以看到至少七种图谱。其中holarctica亚种属于A或B型, tularensis亚种属于C或D型, mediasiatica亚种属于E型, novicida亚种属于F、G或H型, 而F.philomiragia被分为I、J、K、L和M型。ERIC-PCR也可以得到相同的结果。

绵阳地区乙肝病毒基因型分布研究 第4篇

1 资料与方法

1.1 病例选择

500例HBV DNA 阳性患者, 为2005年～2008年我院就诊的门诊及住院患者, 其中男性273例, 女227例。按照2000年第十次全国病毒性肝炎会议修订的病毒性肝炎标准[3], 将500例患者分为4组:①无症状携带者 (asymptomatic carrier, AsC) 共168例;②慢性乙型肝炎 (chronic hepatitis B , CHB) 共182例; ③肝硬化 (liver cirrhosis , LC) 共58例; ④原发性肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma , HCC) 共92例。收集患者静脉血5mL, 分离血清-20℃冻存备用。

1.2 仪器

PCR仪:美国ABI 7300

1.3 试剂

HBV DNA分型试剂由上海科华生物有限公司提供。

1.4 HBV

基因分型 参照NAITO H[4]等PCR条带分析方法, 对500例血清标本进行A～D型分析, 对不能确定基因型的血样利用基因测序方法。所用引物序列:5/-CGAACCACTGAACAAATGTC-3/;5/-GGCTCMAGTTCMGGAACAGT-3/;5/-CTCGCGGAGATTGACGAGATGT-3/;5/-CAGGTTGGTGAGTGACTGGA-3/;5/-GGTCCTAGGAATCCTGATGTTG-3/;5/-GCCAACAAGGTAGGAGCT-3/ 。

1.5 结果检测

依据琼脂糖凝胶电泳片段大小确定基因型别。

1.6 统计学方法

使用SPSS 13.0 统计软件对实验数据进行χ2检验 。

2 结果

HBV基因型的构成 500例患者血清, 经PCR条带分析法分型成功485例, 其中A型5例 (5/500) , B型214例 (42.8%) , C型261例 (52.2%) , D型5例 (5/500) ;未分出型15例经基因测序确定基因型, E型6例 (6/500) , F型9例 (9/500) 。随着疾病从慢性乙型肝炎 (CHB) 到肝硬化 (LC) 、原发性肝细胞癌 (HCC) 的进展, C型HBV所占比例明显上升 (P < 0.05) 。各组两两比较发现, AsC组与HCC组间、CBH组与HCC组间及CBH组与LC组间基因型构成差异具有统计学意义 (P < 0.05) , 见附表。

▲:各组两两比较, P<0.05。

3 讨论

乙型肝炎病毒 (HBV) 属嗜肝DNA病毒科, 它是已知的引起人类疾病的最小DNA病毒。HBV感染呈世界性分布, 有血清学证据表明全世界约有20亿人曾经或持续感染乙肝病毒。自1988年OKAMOTO首先提出了乙肝病毒基因分型法以来, 人们对乙肝病毒基因型进行了大量研究。其基因型分布具有明显的地域性, A型为全世界分布, B型、C型主要分布在亚洲, D型主要分布在美洲、南欧、澳大利亚和中东, E型主要分布在非洲, F型分布于美洲土著人和波利尼西亚, G型分布在美洲, H型仅在美国发现。这种基因型的地域性分布差异在一定程度上反应了HBV的起源及传播。我国以B、C型为主, 北方地区主要是C型, 南方则以B型为主[4,5]。本组研究结果显示绵阳地区HBV基因型, 仍以B型 (42.8%) 、C型 (52.2%) 分布为主。

随着疾病从慢性乙型肝炎到肝硬化、原发性肝细胞癌的进展, C基因型HBV所占比例明显增加, 尤其CBH组与HCC组间及CBH组与LC组间HBV基因型构成差异明显 (P<0.05) , 即在HCC组和LC组C基因型的比例明显高于B基因型, 提示C基因型HBV感染后可能更容易进展为严重的肝脏疾病。总之, 越来越多的研究表明HBV基因型与乙肝发病机制、疾病转归及抗病毒疗效有关, 并将随着分子生物学发展, 对HBV基因型及基因变异的研究将更加深入, 从而对HBV的发病机制和治疗提供更多的帮助。

摘要：目的 调研绵阳地区乙型肝炎病毒, (hepatitis B virus, HBV) 基因型构成, 了解HBV基因型与乙型肝炎病毒进程的关系。方法 运用PCR条带分析与基因测序的方法对500例HBV DNA阳性患者HBV基因分型。结果 本实验研究中, HBV-B型占42.8%, HBV-C型占52.2%, 其他型占5%。随着疾病从慢性乙肝肝炎到肝硬化、原发性肝细胞癌的进展, C型HBV所占比例明显上升 (P<0.05) 。结论 绵阳地区HBV基因型以B、C型为主, 在严重肝病中C型占比例更高, HBV基因型可能是影响疾病进程的重要因素。

关键词：乙型肝炎病毒,基因型,PCR条带分析

参考文献

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合并基因型 第5篇

随着人类基因组序列测定工作的完成，目前功能基因组学研究成为全世界关注的焦点，天赋基因型研究是功能基因组学研究的一个方向。天赋基因型检测技术是运用生物芯片技术和基因片段分析技术，通过对儿童的基因进行检测，确定儿童遗传天赋基因型，揭示其潜在智能类型及特点，帮助家长建立合适的培养计划。

生物芯片上海国家工程研究中心健康事业部总监黄新华介绍，天赋基因型检测的原理是：儿童遗传天赋是由其自身遗传基因决定的遗传潜能，每个儿童都有其特有的多种天赋潜能，这些天赋潜能是由多个基因型决定的，它包括科学家们已经找到的聪敏基因、领悟基因、记忆基因、思维基因、情感基因、专注基因、耐力基因、强壮基因、体能基因等。这些基因不同的组合，就形成了儿童未来成长发展的优势和劣势方向。天赋基因型检测就是对5大类11个基因33个亚型进行分析，从而发现孩子具有的遗传天赋。记忆潜能是多种能力发展的基础，记忆潜能不同，其后天的记忆也有不同，这也是孩子学习成绩差异的一个重要原因，越依赖记忆的学科，差异越明显。智商是教育和心理学公认的能力指标，智商潜能好，后天开发好的孩子，做科学家、工程师、教授等思维性专家型职业有较强的优势;情商潜能好，后天培养好的孩子，与人沟通能力强，经商、做企业领导等方面的工作有较强的优势;体能天赋出众的孩子，适合向竞技体育方向发展;专注天赋与各种职业生涯有关，对各种能力的培养都很重要。“顺势而为将会事半功倍，逆势而为多以失败告终，依据孩子的潜能开发培养，必将有益于孩子未来的成功。”黄新华说。

当然，孩子未来是否能成功，天赋基因只是基础，并不能代表全部。北京教育科学研究院基础教育所副所长张茜说：“即使天赋基因确实存在，但后天的正确培养和环境因素对孩子的发展也非常重要，仔细观察孩子的日常行为发现孩子的兴趣点，以便更有针对性地实施培养计划。”

旅美生物化学博士方舟子认为，目前科学家发现的人类基因类型只有很小一部分，影响某种天赋的基因种类非常复杂，科学界在这方面的研究还很有限，要想完全解读天赋基因的奥秘还有很长的路要走。

资料显示，基因是决定一个生物物种的所有生命现象最基本的因子，承载着一个物种之所以是这个物种的所有遗传信息，蕴藏着所有生命的奥秘。1990年，人类基因组计划正式启动，旨在阐明人类基因组30亿个碱基对的序列，发现所有人类基因并搞清其在染色体上的位置，破译人类全部遗传信息。2001年2月12日科学家发布了人类基因组图谱。

宫颈HPV感染现状及基因型分析 第6篇

1 资料与方法

1.1 材料

1.1.1 病例资料收集2013 年8 月~2014 年8 月我院门诊、体检居住于本地区3 年以上女性 (包括本市和外地户籍) 宫颈上皮细胞标本。3500 例受检者平均年龄 (38.6±14.7) 岁 (18~75 岁) , 其中年龄≤ 20 岁12 例, 21~30 岁554 例, 31~ 40 岁1514 例, 41~ 50 岁883 例, >50 岁537 例。受检者均为初次检测HPV, 无宫颈环切和锥切手术史, 所有受检者均为自愿检测。

1.1.2 仪器与试剂DNA提取、扩增仪为Cobas 4800 (罗氏诊断科技有限公司) , 人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒 (罗氏诊断科技有限公司) 。

1.2 方法

1.2.1 标本的采集及保存采用阴道扩张器充分暴露宫颈, 用棉拭子除去宫颈口过多的分泌物, 将采样宫颈刷置于宫颈口, 顺时针旋转宫颈刷4~5 圈, 慢慢抽出, 以获得足够的宫颈上皮细胞标本, 然后沿刷柄折痕处折断刷头, 将宫颈刷头部放入洗脱管中, 旋紧洗脱管盖, 做好标本标识, 保持采集管直立, 置入-20 ℃冰箱保存待测。

1.2.2 荧光PCR核酸提取、扩增、检测均为Cobas 4800 自动分析。

1.3 结果判定

设置阴、阳性对照, 根据阴、阳性对照的CT值判断结果。

1.4 统计学处理

应用SPSS17.0 软件进行统计分析, 计数资料采用 χ2检验, P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3500 例受检者的标本, HPV感染率为18.4% (643/3500) , 其中HPV 16 (40.8%) 、HPV 18 (35.0%) , 其它型高危型24.2%, 具体结果见表1。

2.2 不同年龄段HPV感染类型和感染检出率比较

将受检者分为≤ 20 岁、21~30 岁、31~ 40 岁、41~ 50岁和>50 岁组, 统计HPV感染类型及感染率, ≤ 20 岁组感染数1 例、检出率8.33% ;21~30 岁组感染237 例、检出率42.78%;31~ 40 岁组感染669 例、检出率44.19%;41~50 岁组感染326 例、检出率36.92%;>50 岁组感染213 例、检出率39.67%, 31~ 40 岁和21~30 岁是HPV感染的主要群体 (见表2) 。

3 讨论

3.1 本文结果显示, 3500 例女性宫颈上皮细胞标本中检出HPV感染者643 例, HPV总感染率为18.4%, 与黄雅等[3]报道结果相似。单一感染占感染人数的69.4%, 二重感染占感染人数27.7%, 三重感染占感染人数的2.9%, 单一感染是本地区的主要感染类型。

3.2 本文结果显示, 本地区HPV感染率以31~40 岁组最高, 其次是21~30 岁、>50 岁组, 与年龄的增加未成上升的趋势;本地区高危型HPV16、18 的感染率为75.8%, 与部分报道存在差异, 这种差异考虑检测人群健康健康教育程度不同、检测样本量, 检测方法不同所致。但仍有除16、18 型外的其它高危型350 例占24.2%, 因罗氏检测设备受限对24.2%的分型凸显重要的意义。对除感染HPV16、18 的其它高危型的分型及本地区少数民族妇女进行HPV亚型的调查, 仍是我们研究的方向

3.3 宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤, 在女性恶性肿瘤的发病率中位居第二, 是全球女性第二大癌症相关死亡的病因, 而高危型人乳头瘤病毒 (HR - HPV ) 持续感染是宫颈癌发生、发展的必要条件。目前HPV DNA亚型有100 余种, 其中30 余种与宫颈感染和病变有关, 根据其致病力的大小分为高危型和低危型两种, 高危型主要导致高度子宫颈上皮内瘤变 ( C IN Ⅱ、C IN Ⅲ ) 和宫颈癌的发生。因此检测宫颈病变中HPV感染情况, 有利于早期发现、早期诊断, 及时治疗控制HPV感染, 预防宫颈内瘤变发生, 效降低宫颈癌的发病率和死亡率, 对宫颈癌的防治有极大的临床价值。

参考文献

[1]王芳, 王玉欢.人乳头瘤病毒感染与宫颈癌关系的研究进展[J].医学综述, 2013, 19 (9) :1546-1547.

[2]江秀娟, 丁世凯.338例妇科门诊就诊者HPV检测结果分析[J].甘肃医药, 2013, 32 (7) :499-500.

[3]黄雅, 冯玉昆.昆明地区妇女宫颈HPV感染状况[J].昆明医学院学报, 2007, (2B) :71-76.

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[5]沈艳红.我国山西省子宫颈癌高发区人乳头瘤病毒感染调查[J].中国医学科学院学报, 2003, 25 (4) :381-385.

[6]梁凤荣, 汤玉美, 刘燕, 等.宫颈病变患者HPV基因分型[J].分子诊断与治疗杂志, 2010, 2 (6) :390-393.

合并基因型 第7篇

气胸的分类根据有无原发疾病分为原发性、继发性, 以及FLCN (Folliculin) 基因相关性气胸。F L C N基因过去一直被认为是一种肿瘤抑制基因, 2002年N i c k e r s o n等认为该基因是B i r t-H o g g -D u b e (BHD) 综合症致病基因之一, FLCN基因的发现可以部分解释遗传性原发性自发性气胸 (primary spontaneous pneumothorax, PSP) [3], 而该综合症的主要临床表现除皮肤损害 (纤维毛囊瘤, 毛盘状瘤, 软垂疣) 、肾脏肿瘤外, 肺大疱 (可引起SP) 是其重要特征之一。后续在气胸人群中的研究表明, FLCN突变可以仅有单纯性原发性自发性气胸或肺大疱, 而无其它BHD综合征的表型[4,5]。目前已有许多实验证明其与自发性气胸的发生相关。本文分析了南京市胸科医院自2009年3月至2013年11月自发性气胸患者的临床资料及与FLCN基因相关的特征结果, 报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

本组男1 8 6 例, 女2 2 例, 男: 女比例约为8.5:1, 年龄15~75岁 (35.8±17.5岁) 。有吸烟史66例 (31.7%) , 无吸烟史142例 (68.3%) , 吸烟与非吸烟比例为:1:2.2。有自发性气胸家族史11例 (5%) 。气胸位置:左侧68例 (32.7%) , 右侧75例 ( 3 6 . 1 % ) , 双侧4 7 例 ( 2 2 . 6 % ) , 存在肺大疱而未发作气胸18例 (8.7%) 。肺大疱直径≤1 cm 47例 (22.6%) , 直径>1 cm 161例 (77.4%) ;肺大疱位于肺上叶138例 (66.3%) , 位于肺中叶或下叶70例 (33.7%) ;单肺叶病变107例 (51.4%) , 双肺叶病变101例 (48.6%) 。208例患者均经胸部X线或C T检查后确诊为气胸或肺大疱, 表现为双肺或单侧肺的弥漫性肺大疱;92例患者行腹部B超检查, 有2例合并肾囊肿。

1.2 手术方法

患侧肺压缩大于30%, 或年龄大于60岁患者均于手术前行胸腔闭式引流, 行术前检查排除手术禁忌择期手术。全组采用双腔气管内插管静脉复合全身麻醉, 手术过程中单侧肺通气。采用电视胸腔镜手术 (Video-assisted thoracic surgery, VATS) 的患者, 标准侧卧位加腰桥抬高, 于腋中线第6或第7肋间做小切口为探查孔置入胸腔镜, 第4或第5肋间腋前线和腋中线肋间做小切口为操作孔进行手术, 以内镜切割缝合器切除肺大疱并修补[6]。部分患者探查见胸腔粘连或散在多发肺大疱, 则于第4肋间做5 cm左右辅助切口, 或中转延长切口, 用切割缝合器切除或结扎处理肺大疱。胸膜固定包括机械性胸膜摩擦、化学性高糖灌注和喷洒滑石粉等方法[7]。术毕胸腔放置1-2根引流管, 嘱麻醉医师充分膨胀肺组织, 观察是否有漏气并处理。

1.3 FLCN基因的检测

抽取全组病例外周静脉血, EDTANa2抗凝, 采用硅胶膜技术的离心柱提取D N A (D N e a s y B l o o d & Ti s s u e K i t, Q i a g e n) 。特异引物P C R扩增FLCN 14个外显子片段, 采用Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (Applied Biosystems) 对扩增产物双向测序, 其结果与参照序列 (NG_008001.2) 比对验证突变。

2 结果

本组中青少年患者体型均瘦长, 头围均不大, 宽肩, 胸部扁平, 四肢修长。静息状态、运动或负重等活动时均可诱发;中年或老年病例患者多有合并慢性支气管哮喘, 尘肺, 陈旧性肺结核等病史, 起病多为受凉后呼吸系统发病, 经常是上述原因急性加重导致诱发气胸, 亦有剧烈咳嗽、排便用力加大腹压所致;主要症状有胸痛、胸闷、咳嗽、呼吸困难等。肺功能差者可出现口唇紫绀, 端坐呼吸、大汗淋漓, 濒死感, 呼吸衰竭等。

F L C N基因突变组共有20例 (9.6%) , 无突变组有188例 (91.4%) , 两组在年龄、性别和吸烟史无明显差异 (P>0.05) ;突变组有明显的家族史 (P=0.000) , 详见表1。

两组气胸位置、肺大疱直径无明显差异 () ;无突变组患者肺大泡的两组气胸位置、肺大疱直径无明显差异位置多 (位P于>肺0.上05叶) (P;=0无.002突) , 变而携组带患FL者CN肺基大因突泡变的患位者肺置大多泡多位位于于肺肺中上下叶 (如叶图 (1 P所=示0) .0 (0P2=) 0.00, 1) 而, 详携见带表F2。LCN基因突变患者肺大泡多位于肺中下叶 (如图1所示) (P=0.001) , 详见表2。

左侧为FLCN基因突变非相关自发性气胸, CT显示左肺上基因突变相关气胸, CT显示两肺下叶大疱。 (箭头所示为肺大疱) 叶大疱;右侧为图F1L CFLNC基N基因因突突变变相相关关及非气相胸关, 气胸C TC显T示两肺下叶大疱 (箭头表所2 F示LC为N肺突大变组疱与) 无。突变组肺大疱位置与形态比较 (n)

本组186例均行VATS肺大疱切除术, 余22例行常规肺大疱切除术, 无围手术期死亡。手术时间30~120 m i n (40.3±12.4 m i n) ;术后胸腔引流时间3~14 d (4±2.2 d) ;住院时间7~22 d (5.1±3.3 d) 。手术方式更多的采用肺大疱切除联合胸膜固定术 (P=0.046) 。详见表3。

3 讨论

自发性气胸的一个重要的病理基础是患侧肺组织患肺大疱, 胸部X线及CT在手术前可诊断出80%以上的病例患肺大疱, 通过VATS或常规开胸手术能100%发现肺大疱[8]。其形态学 (主要是CT所见) 和组织病理学描述往往有异且不是很一致。本组资料显示青年男性, 体型瘦长者易发生自发性气胸, 大部分病人的肺大疱位于肺尖部, 关于青年性肺大疱病因, 有学者认为瘦长体型的患者由于肺的快速生长而引起肺局部缺血, 肺尖部形成大泡, 个子高的患者肺尖传导的压力高, 使扩张的肺泡破裂所致[9]。而FLCN相关的气胸病人的肺大疱在数量、位置及分布上与无家族史的病人有明显不同, 表现为分布广泛的多个双侧肺大疱, 肺下部和基底部常见[10], 显微镜下观察到肺泡壁变薄, 结缔组织和平滑肌减少, 弹性降低[11,12]。FLCN基因在人体的皮肤、肺、肾、胰腺、乳房、前列腺、脑组织中广泛表达, 参与分泌、细胞内吞和噬菌作用。在肺内, FLCN基因在基质特别是巨噬细胞和纤维原细胞中大量表达, 在I型肺泡上皮细胞内也有一定的表达。由此提出假说认为:当此基因发生突变时, 通过巨噬细胞和纤维原细胞分泌大量的炎性因子, 诱发炎症, 最终造成肺内弹性纤维的破坏而导致气胸[4]。近期报道的BHD病人的肺大疱组织中心的肺泡间隔有断裂及毁损, 而大泡壁有增生[13]。

本研究中发现气胸发生的年龄及肺大疱直径在F L C N基因突变组及无突变组中无明显差异, 9.6% (20/208例) 的患者携带FLCN突变, 主要的突变效应是造成FLCN蛋白的截短。其肺大疱多位于肺中下叶, 而无突变组肺大疱的位置多位于肺上叶, 同时发现FLCN基因突变组有明显的家族史 (P=0.000) , 提示我们FLCN基因突变具有家族性, 部分病人的一级亲属无气胸病史, 但传递FLCN突变, 因此, 针对该组病人进行FLCN基因检测诊断十分必要。一方面, FLCN突变的SP患者约80%有气胸反复发作趋势, 有的病例甚至经历多次外科手术;另一方面, FLCN基因突变的检出有利于追踪相关家族内潜在SP病人, 这些人虽没有气胸发作, 其CT检查结果仍显示为肺大疱患者;最后, FLCN基因突变的SP患者及其家系面临着皮肤纤维瘤和肾癌的高风险, 而这些均不能被目前的临床诊断和检测手段发现。新的诊断策略有利于临床将FLCN基因相关气胸与其他气胸在病因学上区分出来, 制定新的临床管理和处理措施, 同时病人的家族成员得到医疗关注, 遗传咨询和定期体检可帮助他们预防潜在的风险, 特别是肾癌的发生。