糜蛋白酶范文

糜蛋白酶范文（精选12篇）

糜蛋白酶 第1篇

1 材料与方法

1.1 材料

对照组收集健康人血浆22份,由太原市江阳工厂医院体检中心提供;实验组包括海洛因成瘾者血浆19份,由太原市戒毒所提供,颅脑创伤者血浆20份,由山西医科大学第一医院提供及初发心肌梗死患者血浆22份,由山西医科大学第二医院提供,分别作为实验组1、实验组2、实验组3。各组年龄最大值及最小值分别为对照组最大75岁,最小23岁;实验组1最大49岁,最小21岁;实验组2最大72岁,最小12岁;实验组3最大67岁,最小38岁。各组年龄段分布见表1。

由表1可见,对照组各年龄段随机分布,实验组的年龄段分布符合该组发病(发生)规律。吸毒人员主要集中在青壮年,颅脑外伤患者主要由意外、车祸及暴力等原因造成,各年龄段均有分布,以男性为主,初发心肌梗死患者多发于中老年,也有发病年轻化的趋势。

1.2 酶联免疫法测定血浆类胰蛋白酶及类糜蛋白酶含量

人类胰蛋白酶及类糜蛋白酶检测试剂盒购于北京索来宝公司。ELISA试验测定所用仪器为第四军医大学的DG3022酶联免疫检测仪。

各组抽取全血后立即2 000 r/min离心20 min,收集上层血清,置-70℃冻存备用。使用前室温复融混匀。

ELISA操作步骤:(1)标准品的稀释:在酶标包被板上设标准品孔10孔,每两孔为同一浓度,制备类胰蛋白酶浓度分别为4 800、3 200、1 600、800、400 ng/L,糜蛋白酶浓度为300、200、100、50、25 ng/L的标准样。(2)加样:每个指标检测设立两个空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)及待测样品孔,每孔加稀释度5倍待测样品50μL,轻晃混匀。(3)温育:用封板膜封板后置37℃温育30 min。(4)洗涤:揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 s后弃去,如此重复5次,拍干。(5)加酶:每孔加入酶标试剂50μL,空白孔除外。(6)重复(3)(4)步骤。(7)显色:每孔先加入显色剂A 50μL,再加入显色剂B 50μL,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 min。(8)终止:每孔加终止液50μL,轻轻混匀30 s,确定蓝色变为黄色。(9)终止反应后15 min以内进行测定,以空白对照调零,450 nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差表示,多组间比较采用单因素方差分析,组内两两比较采用LSD-t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组及实验各组类胰蛋白酶及类糜蛋白酶含量测定

对照组及实验各组类胰蛋白酶及类糜蛋白酶含量见表2。

由表2可见,实验组类胰蛋白酶及类糜蛋白酶含量较对照组差异有统计学意义(P<0.05),即海洛因中毒者、颅脑创伤及急性心肌梗死患者血浆类胰蛋白酶及类糜蛋白酶较对照组显著升高,但三组实验组间类胰蛋白酶及类糜蛋白酶含量差异无统计学意义(P>0.05)。提示上述三种情况收集的血浆,仅通过类胰蛋白酶及类糜蛋白酶两指标无法区分。

注:与对照组比较,*P<0.05

3 讨论

近年来类胰蛋白酶及类糜蛋白酶的应用越来越受到人们的重视,特别是在过敏性休克的诊断中,常被用来作为重要的诊断标准,但随着人们对急性过敏反应认识的加深,发现非变态反应性过敏反应以及其他多种情况均会导致类胰蛋白酶类糜蛋白酶升高,与肥大细胞脱颗粒及细胞膜破坏密切相关。有学者报道,除过敏反应性疾病外,肥大细胞至少还参与了35种非变态反应性疾病的发病过程[6]。肥大细胞胞浆颗粒中除类胰蛋白酶及类糜蛋白酶等中性蛋白酶以外,还包含组织胺、羧肽酶A3和蛋白多糖等。

海洛因化学名为二乙酰吗啡,俗称“白面”,最早由英国Wright医师于1874年合成,1898年德国开始规模化生产该药,由于其优良的镇痛作用及强烈的成瘾性和毒性,使其成为迄今滥用倾向最大、依赖潜力最强的吗啡衍生物。海洛因中毒者临床表现为昏迷、瞳孔缩小(针尖样瞳孔)和呼吸抑制,同时出现心动过缓和血压下降。有48%～80%的海洛因中毒者伴有肺水肿,症状表现与过敏反应相似。早在1880年Osler就发现海洛因中毒者肺充血、水肿、出血和呼吸衰竭的病理生理表现[7]。海洛因在体内的毒理作用还包括中枢神经细胞不同程度变性、坏死、灶性血管周围出血、急性脑水肿等,上述非特异性的类过敏样反应,是导致海洛因急性中毒死亡的主要原因。Edston等[8]进一步研究发现,海洛因中毒死亡者血中吗啡浓度低于0.2μg/mL,不能产生明显呼吸衰竭,而血浆类胰蛋白酶含量的升高开始越来越受到人们重视。之后有学者用抗层粘连蛋白和胶原质Ⅳ的抗体对海洛因中毒引起肺水肿死亡的肺标本进行了免疫组化检测,发现肺毛细血管壁周围有类胰蛋白酶免疫染色阳性细胞出现,提示类胰蛋白酶与肺泡基底膜破坏有关,基质金属蛋白酶的激活起关键作用,而肺泡基底膜的破坏是导致肺水肿及呼吸衰竭的重要原因[9]。作为引起非变态反应性过敏反应代表的海洛因中毒者或死者由于非免疫机制所导致的肥大细胞脱颗粒引起的血浆类胰蛋白酶及类糜蛋白酶高表达,已经越来越成为研究的重点。

有学者在研究类胰蛋白酶及类糜蛋白酶中发现,动脉粥样斑块的稳定性与类胰蛋白酶激活基质蛋白酶有关[4],类胰蛋白酶还可以通过促进黏附分子表达,起到聚集炎症细胞、促进梗死区修复、对组织碎片吞噬和再吸收以及促进血管再生的作用[10];类糜蛋白酶可以通过将血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ发挥心脏组织重塑作用[11]。创伤性休克中的血压等生命体征变化,就与急性创伤刺激肥大细胞脱颗粒及破坏肥大细胞释放出类胰蛋白酶和类糜蛋白酶等活性物质有关,与促进释放儿茶酚胺、缓激肽以及其他血管活性物质并激活补体系统也有关联。基于此观点,本试验除选择海洛因中毒者外还测定了颅脑创伤者(实验组2)及初发心肌梗死患者(实验组3)的血浆标本中类胰蛋白酶和类糜蛋白酶。

正常情况人体血浆类胰蛋白酶的基础值为0.8～1.5 ng/mL(应用瑞典Pharmacia&Upjohn AB公司UniCAP类胰蛋白酶FEIA检测仪及相应试剂测定),浓度大于15 ng/mL时为非正常升高。而实际操作中,海洛因成瘾者中毒症状的认定与取血时机对肥大细胞脱颗粒有一定影响,由于症状不够典型或症状缓解后取血,都会使类胰蛋白酶及类糜蛋白酶的实测值与预期有差异。Erik等[5]在创伤死亡者血浆中测得类胰蛋白酶一般在10 ng/mL以上。后来的实验中发现由于肥大细胞多分布于心脏及肺脏,而类胰蛋白酶、类糜蛋白酶的释放又与组织损伤程度有关,所以两者在复合创伤者中浓度要大于单纯创伤,胸部创伤及挤压损伤实测值要大于其他部位创伤[12],这就造成单纯颅脑损伤患者血浆中测得类胰蛋白酶-类糜蛋白酶与文献记录有一定差异。急性心肌梗死患者也存在发病程度与取血时机的影响。

本实验结果表明,在临床与法医病理学检案中,应用类胰蛋白酶、类糜蛋白酶对过敏性休克诊断和认定时,应排除海洛因中毒等非变态反应性过敏反应以及创伤、急性心肌梗死等情况,如要区别上述原因以外的其他诱因是否导致过敏性反应,应结合其他指标(如IgE、组织胺)以及临床表现综合判断,同时,类胰蛋白酶及类糜蛋白酶的变化也为海洛因中毒者诊断拓展了新的研究方向。

摘要：目的 探讨海洛因中毒为代表的非变态反应性过敏反应患者血浆类胰蛋白酶及类糜蛋白酶的含量变化及其机制。方法 对照组为22名正常人,实验组1为19例海洛因中毒者,实验组2为20例颅脑外伤患者,实验组3为22例初发急性心肌梗死患者。应用ELISA方法检测对照组和实验各组血浆胰蛋白酶及类糜蛋白酶含量。结果 三组实验组与对照组比较血浆胰蛋白酶及类糜蛋白酶含量差异有统计学意义(P<0.05),即实验组血浆类胰蛋白酶和类糜蛋白酶含量较对照组均升高,而三组实验组间两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 海洛因中毒、颅脑创伤与心肌梗死者血浆类胰蛋白酶及类糜蛋白酶含量均增加,提示在非变态反应性过敏反应及上述两种疾病患者均伴有肥大细胞脱颗粒或溶解,类胰蛋白酶和类糜蛋白酶含量升高可以作为非变态反应性过敏反应的诊断依据之一,但应排除急性心肌梗死和颅脑损伤,或者联合其他指标综合判断。

菠萝蛋白酶纯化方法总结 第2篇

（1）沉淀法

沉淀法是粗提酶蛋白的方法之一，主要用于前期酶的初步分离和浓缩，常用的方法有盐析法，有机溶剂沉淀法，聚乙二醇沉淀法，等电点沉淀法等。用新型吸附洗涤沉淀法和单宁沉淀法也可以提取菠萝蛋白酶，操作简单，产率也较高，但酶的产量与单宁的用量密切相关，而且所含单宁有毒，导致这种方法逐渐被淘汰了。以酒精为沉淀剂提取菠萝蛋白酶时，酒精的加入量会对菠萝蛋白酶产生较大的影响，酒精的浓度太低时，不能使菠萝蛋白酶沉淀下来，浓度太高容易使酶变性失活。酒精的浓度为80%时，酶的收率最高。从茶叶中提取的多酚类物质茶多酚也可用于菠萝蛋白酶的分离，用0.5%的茶多酚提取物对菠萝汁中菠萝 蛋白酶进行沉淀最多可达78%，其最大沉淀率明显比单宁法高。（2）离子交换色谱法

离子交换色谱层析法是蛋白质研究领域内比较高效的纯化技术，目前国外用于分离菠萝蛋白酶常用的离子交换剂有Sephacryl S-200柱、Mono S阳离子交换剂、S-Sepharose、弱酸性阳离子交换树脂、CM-纤维素阳离子交换柱、Q阴离子交换柱。国内常用的有羧甲基纤维素（CMC）、二乙胺乙基纤维素（DEAE），酶的纯化过程通常是将若干色谱纯化技术联合使用来实现的。Ota最早用SephadexG-75结合CM-SephadexC-25柱层析分离得到5种茎酶的组分。用DEAE-52离子交换柱层析结合Sephadex G-75分子筛柱层析色谱法纯化果酶，能 获得比活力为12.5U/mg的单一电泳纯酶制剂。（3）固定化金属离子亲和色谱法

固定化金属离子亲和色谱法是以普通凝胶作为载体，连接上合适的螯合配体和足够暴露的金属离子，制成亲和吸附剂，进行分离纯化蛋白质的方法。此法介于高特异性的生物亲和分离法和低特异性的离子交换色谱法之间，对组氨酸基团有特异性。Huali Nie 等（2008）首次应用固定化金属亲和膜（IMAM）—肽-尼龙膜，这是一种将七肽共价固定到复合膜上作为配体的新型尼龙膜，用其从菠萝中分离和提纯菠萝蛋白酶，可使菠萝蛋白酶纯化 15.4 倍，回收率达 94.6%，而且不会造成任何变性。固定化金属亲和层析技术正逐渐被采用，Pawan Gupta等（2007）将菠萝蛋白酶成功固定在亚氨基二乙酸载体琼脂糖凝胶 6B 型中。Cu2+ 与亚氨基二乙酸（IDA）的络合被用来作为螯合配体将单个组氨酸结合到菠萝酶上。固定化高亲和性载体的制备是试图将可溶性交联菠萝蛋白酶制剂固定到铜-亚氨基二乙酸-琼脂糖凝胶上。（4）超滤法

超滤法是在离心力或较高的压力作用下，选择适当孔径的超滤膜，使水和其他小分子物质通过，而使所需酶蛋白截留的方法。利用超滤法提取酶蛋白，具有无相变、生物活性不易丧失、得率较高，不会改变溶液糖酸比等特点。用超滤法浓缩有机溶剂提取的菠萝蛋白酶产品质量好，对环境污染少，可以实现清洁生产，酶粉得率比高岭土工艺高出47%。超滤法分离提取的粗酶比活力较单宁沉淀法高2.7倍，也比酒精沉淀法高。用超滤法浓缩提取菠萝蛋白酶需要对操作条件进行研究，尽最大可能提高超滤效果，促进工业化生产。杨辉等研究认为压力差在300kPa，透过液通量为50L/m2·h时即能保持较大的流量，又不会对酶活造成损失。在对菠萝汁进行超滤的过程中，料液透过通量随压力差增加和循环速度的增大逐渐上升并趋于稳定。用超滤法浓缩提取生物大分子时因不同膜材料的透过通量和截留率不同，而导致不同的分离特性。用聚丙烯腈膜（PAN）膜浓缩工艺较适合对菠萝蛋白酶进行超滤浓缩，可使果菠萝酶回收率达93.3%，截留率达97.8%。用PSA膜超滤菠萝皮汁制得的菠萝蛋白酶酶活总回收率为65.7%。李兴，林哲甫用二氧化钛吸附菠萝果汁中的菠萝蛋白酶再用截留值2万和5万的超滤膜超滤浓缩，能获得较高比活的果酶。得到的果酶活力回收率为54%，比活力为911单位/mg。目前将纳米氧化锌吸附、陶瓷膜超滤浓缩和冷冻干燥法结合的综合性技术已达到国际先进水平，创新性较好。(5)双水相萃取法 利用两种多聚物，或多聚物与盐在水相中的不相容性，可以从细胞破碎后的细胞碎片中直接分离、纯化并浓缩蛋白质。该方法的优点是比较温和可在室温下进行，一般不造成酶的变性失活，还可提高其稳定性。与其它分离纯化方法相比，利用双水相萃取法有很多优点，如易于放大、成本低、可以连续操作、并且是环境友好的。这就使其成为分离纯化生物分子的诱人的替代方法，在国外进行了大量的应用。B.Ravindra Babu等（2008）首次使用该法从菠萝中分离纯化菠萝蛋白酶和多酚氧化酶的混合物，结果使菠萝蛋白酶的纯度提高4.0倍，得到约228%的活性回收率。双水相萃取法提供了一种有效的、经济上可行的分离纯化菠萝蛋白酶的方法。在双水相体系中用PEO–PPO–PEO 嵌段共聚物分离纯化菠萝蛋白酶，其活性回收范围为7.5%~79.5%，纯化倍数0.1~1.25倍。在双水相体系中，各种参数如聚合物的分子质量、聚合物和形成相的盐浓度和分离体系的pH对分离纯化的结果影响较大。(6)反胶团萃取法

生物技术的发展为重要生物分子的生产开辟了一条新的途径，在选择性提取的生物分子中，逆胶束有机相很有潜力发展为液液萃取的生物分离技术。反胶团是表面活性剂，使水滴稳定分散在有机溶剂中，这种表面活性剂是双亲性的有机复合物，既亲脂也亲水。反胶团萃取法有如下一些优点：不会造成原有功能或活性的损失、界面张力较低、易于规模化、有连续运作的潜力。H.Umesh Hebbar等（2008）用溴化十六烷基三甲铵/异辛烷/正己醇/正丁醇和磺酸钠/异辛烷的反胶束体系从菠萝废料的水提物中提取和初步纯化菠萝蛋白酶。用反向阳离子表面活性剂（CTAB）胶束体系能使菠萝蛋白酶获得一个较好的活性回收率可达106%，纯化 5.2 倍，而采用阴离子表面活性剂（AOT）则没有获得较好的产率。(7)新型纳米吸附剂法

随着一种以氧化铁纳米粒子为核心，聚丙烯酸为离子交换组的新型磁性纳米吸附剂的开发，其在生物分离和生物医学领域已经被广泛应用。它具有高的离子交换容量和快速的吸附/解吸率。这种纳米粒子用于菠萝蛋白酶的分离是很有效的。近年来，纳米纤维膜由于其非常大的表面积和体积比、优越的机械性能引起人们的广泛关注，Haitao Zhang 等（2010）通过一步静电纺丝技术以二甲基乙酰胺为溶剂制备出超细聚丙烯腈（PAN）纳米纤维膜，用化学的方法连接到壳聚糖的表面，共价连接到染料配体辛巴蓝上制成染料固定化亲和膜，而且可以重复使用，膜的再生显示出良好的机械性和化学稳定性。这种新开发的染料亲和膜首次用于菠萝蛋白酶的吸附，批次试验揭示出它具有一个很高的吸附菠萝蛋白酶的能力，可以实现高效率的大规模的吸附，这种低非特异性结合的亲和膜对于纯化高纯度的菠萝蛋白酶是很有效的。

供试酶液的制备（纳米二氧化钛吸附法分离纯化效果明显好于高岭土吸附法和超滤浓缩有机溶剂提取法，所得酶的比活力分别是后两者的1.94倍和3.81倍）清洗后菠萝茎在 4℃冷室中预冷 12h，组织捣碎机捣碎，加 1 倍 0.05mol/L，pH6.0 磷酸缓冲液（含 5 mmol/L 的 EDTA）浸提，缓慢搅拌，浸提 10min，4 层纱布过滤，离（4000rpm，15min），上清液即为供试酶液，蛋白质含量为 1.62 mg/mL。（菠萝果、皮中酶供试液制备方法同上）操作要点：选取干净的菠萝茎，除杂，清水中漂洗三次，沥干，放入 4℃冷室中 预冷备用。预冷后茎用高速组织捣碎机打浆，加 0.05 mol/L，pH6.0 磷酸缓冲液浸提 10min，4 层纱布过滤，滤液在 4000 rpm 条件下，离心 15min，取上清液，放入 4℃冷室中备用。1.纳米 TiO2吸附法

（纳米 TiO2的用量直接影响吸附效果。用量不足，对酶的吸附不完全；用量过多，增加处理和洗脱难度，浪费资源）（超滤过程中会发生浓差极化现象，导致菠萝蛋白酶的损失。在压力较低时，随压力增大，通量呈直线上升，但随压力增大，膜逐渐被压实，浓差极化（膜分离过程中的一种现象，会降低透水率，是一个可逆过程。是指在超滤过程中，浓差极化由于水透过膜而使膜表面的溶质浓度增加，在浓度梯度作用下，溶质与水以相反方向向本体溶液扩散，在达到平衡状态时，膜表面形成一溶质浓度分布边界层，它对水的透过起着阻碍作用。）现象增加，膜通量增幅变缓。）

供试酶液中加纳米 TiO2搅拌均匀→离心（4000 rpm，15min）→取沉淀用柠檬酸缓冲液洗脱→搅拌（30min）→离心（4000 rpm，15min）→取上清液→超滤浓缩→冷冻干燥→酶制品。操作要点： ① 吸附、洗脱：供试酶液置于玻璃或不锈钢容器中，加入纳米 TiO2搅拌均匀，吸20~30min，离心弃上清，沉淀用柠檬酸缓冲液洗脱，离心取上清。② 超滤：洗脱液先用截留分子量为 40KD 的超滤膜除去较大分子量的杂蛋白，再用截留分子量为 20KD 的超滤膜除去较小分子量的杂蛋白及其它小分子杂质，采用加去离子水多次超滤。③ 冷冻干燥：据共晶点确定干燥参数。④ 纳米 TiO2吸附能力再生：纳米二氧化钛吸附洗脱后，采用 0.1mol/LNaOH 溶液浸泡，再用去离子水洗涤至中性，干燥后进行重吸附实验，吸附效果可恢复 90%以上。通过正交试验得影响实验效果的因素主次为：纳米 TiO2用量＞吸附液 pH＞吸附时间＞吸附温度 高岭土吸附法（高岭土吸附法生产工艺和操作都比较复杂，原材料消耗多，所需设备也多，酶活总回收率及纯化倍数都较低，投资较大。）

供试酶液→加 4%高岭土，搅 20min，10℃吸附 30~60min→静置→吸出上清→沉淀用 16%NaOH 调 pH6.5~7.0→加 7%~9%NaCl，搅 30min→压滤，滤液用 1:3（体积比）盐酸调 pH5.0→搅拌→加滤液量 25%（NH4）2SO4→溶解→4℃静置过夜→离心→沉淀→干燥（王平诸等，2002）。操作要点：

①吸附：将供试酶液加入吸附槽中搅拌，同时加入 4%的高岭土，搅拌约 20min，在 10℃吸附 30~60min，用虹吸排掉上清液，收集高岭土吸附物。

②洗脱：用 16%的 NaOH 溶液调节吸附物的 pH 至 7.0 左右，再加入吸附质量为 7%~9%的工业食盐，搅拌 30min 进行洗脱，然后迅速压滤，收集滤液。

③盐析：将压滤液收集在盐析槽中，用 1:3 的盐酸调节 pH 至 5.0 左右，搅拌加入压滤液质量 25%的硫酸铵，待完全溶解后，4℃过夜；然后离心，收集沉淀盐析物，干燥即为粗酶。

3.超滤浓缩有机溶剂沉淀提取

供试酶液→超滤浓缩→有机溶剂沉淀→干燥→酶制品。

操作要点：①超滤：供试酶液先用截留分子量为 40KD 的超滤膜除去较大分子量 的杂蛋白，再用截留分子量为 20KD 的超滤膜除去较小分子量的杂蛋白及 其它小分子杂质。

②有机溶剂沉淀：将浓缩液降温至 0~4℃，边搅拌边加入-20℃的 95% 乙醇，直至混合液中乙醇浓度为 50%，静置，使酶沉淀，移出上清液，即 为湿酶。

③干燥：将湿酶在 0℃下减压干燥即得菠萝蛋白酶制品。2.4.4.5 离子交换层析条件的确定（D.R.马歇克等，1999.）

pH：配制pH5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0 的0.01 mol/L Tris-磷酸盐缓冲液（含0.01 mol/LNaCl及1 mmol/LEDTA）。量取离子交换树脂 1mL，用蒸馏水充分冲洗，定量到 10mL 悬浆。取 7 个 2mL 离心管，每管加入 1mL 离子树脂悬浆，分别用上述缓冲液平衡。去掉多余缓冲液。按纳米二氧化钛吸附法最佳条件制得供试酶样品，配成一定浓度酶液。取 1mL 样品与相应缓冲液等量加入离子树脂中，混匀，离心取上清液，测酶活性。离子强度：取 4 支 2mL 离心管各加入 1mL 离子树脂悬浆，分别用含0.1mol/L、0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L NaCl 的初始 pH6.0 的 0.01 mol/LTris 缓冲液充分润洗 1~4 号试管，使离子树脂与相应缓冲液平衡，去掉多余缓冲液，向各管中加入 1mL 样品及等量缓冲液。混匀，静置 10min，离心取上清，测酶活性。吸附容量：取4支2mL离心管加入同初始缓冲液平衡后的离子交换树脂0.2mL。用离心管处理样品，于1、2、3、4号管中各加入1mL、2mL、3mL、4mL的样品。混匀，离心取上清液，测酶活性。离子交换层析：（1）PH的确定pH6.0的0.01mol/LTris-磷酸盐缓冲液（2）洗脱液的浓度采用 1.5mol/L 的 NaCl 溶液作为梯度洗脱的上限浓度。（3）吸附容量的测定为保证柱层析效率和菠萝蛋白酶的回收率拟选择 1mL 为最佳吸附容量。

离子交换法的详细步骤.1 离子交换介质处理与转型

用初始缓冲液替换倾倒澄清掉 20%乙醇，并用初始缓冲液配成凝胶匀浆（凝胶占 75%，缓冲液占 25%），作真空脱气处理备用。2 装柱与平衡

将所有材料和试剂平衡至室温，配制初始缓冲液为 20mM pH4.0 的醋酸缓冲液（含 0.01%的 EDTA）和洗脱液为 1M NaCl~20mM pH4.0 醋酸缓冲液（含 0.01%EDTA）。根据试验中柱子（1.1cm×30.0cm）的类型取所需量的凝胶，打开层析柱顶部，关闭出口，用 20mM pH4.0 的醋酸缓冲液润湿层析柱柱内及柱子底端并保持一小段液位，略高出滤膜，仔细驱除底端气泡。将凝胶匀浆用玻璃棒引导边搅拌边沿着柱内壁按同一方向连续倾倒入柱内，防止空气泡的产生，同时用缓冲液填充柱子的剩余部分。打开柱下口出水口夹子，使凝胶在柱内自由沉降，装上层析柱顶端柱头，连接好洗脱液。打开蠕动泵，调节流速，让缓冲液按一定的流速 通过，稳定柱子。用 3~4 倍柱体积的缓冲液平衡柱子，直至流出的平衡液和初始平衡液 pH 相等时表示已达到平衡。同时连接紫外检测仪，等流出液在检测仪上绘出的基线稳定后平直即可。3 加样

略微增大层析柱出口的流速，排除凝胶床表面缓冲液。打开层析柱顶塞，用移液管将透析至无 SO42-的酶蛋白溶液沿管壁从凝胶床表面上数毫米处缓慢流下。加样时应先沿柱内壁转动一周，然后移至中心缓慢小心地将样品溶液加到凝胶表面，最好避免破坏凝胶，以保持凝胶表面平坦。打开层析柱出口，让蛋白质样品溶液进入凝胶柱床内，待液面重合时，可用少许起始缓冲液洗柱内壁和床表面，关上层析柱出口。.4 洗脱

加样后用足够量的起始缓冲液淋洗，使未吸附的物质被洗出，并达到充分平衡，在凝胶表面缓慢滴加洗脱液，加至洗脱液表面与柱口形成凸面，加入 1MNaCl~20mM pH4.0 醋酸缓冲液（含 0.01%EDTA）以 1mL/min 流速，开始洗脱，同时连接紫外检测仪，调整横流泵为 1mL/min，同时以自动部分收集器收集，每5min 收集一管，分别测定每管的蛋白浓度及酶活。

二．蛋白含量测定方法

采用考马斯亮兰 G-250 法（George R，1973）测定蛋白质含量：①标准蛋白溶液的配制：称取 10mg 牛血清白蛋白溶于去离子水并定容至 100mL，配成 0.1mg/mL 的标准蛋白溶液。②考马斯亮兰 G-250 染料试剂：称 100mg 考马斯亮兰 G-250，溶于50mL 95%的乙醇后，再加入 120mL 85%的磷酸，用水稀释至 1L，过滤后贮于棕色瓶中。③标准曲线的绘制：取 7 支试管，编号后如表 1，混匀，放置 2min后，在 595nm 波长下比色测定（应在 1h 内完成），以牛血清白蛋白含量（μg）为横坐标，以吸光度为纵坐标。根据表 1 不同蛋白质浓度样品液分别测定吸光度，以蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线：：y＝0.0028x+0.0743；R2=0.9996；式中：y 为吸光度，x 为蛋白质浓度 μg/mL。

酶的活力测定：精密移取PH7.0的干酪酸溶液5ml与15ml的具塞试管中，置于37摄氏度恒温水浴中保温十分钟，准确取一定量的的供试菠萝蛋白酶液，用酶液激活液（ph4.5L-cys胱氨酸和EDTA-2Na配置）稀释至1ml，加入上述底物溶液中，摇匀，立即置入37摄氏度的恒温水浴中，准确反应10min，加入5ml三氯乙酸溶液中，终止反应，用力混匀，在37摄氏度恒温水浴中静置保温30min，待蛋白凝聚沉淀，然后冷却至室温于3500rpm离心10min，取上清液于275nm波长下测为其吸光度A。另取等体积的供试酶液，按上述步骤操作，对换酶液和三氯乙酸的加入顺序，测得吸光度A0。

糜蛋白酶 第3篇

关键词：α-糜蛋白酶 泪道激光【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1879（2012）12-0015-02

慢性泪囊炎在临床上是一种常见病，患者较为痛苦。治疗上常规行鼻腔泪囊吻合术。但该手术损伤较大，术后影响患者美容。自90年代以来，用激光治疗泪道阻塞性疾病，国内已连续有报告，其治愈率92.4～95.2%^[1]但单纯泪道激光成形术后由于阻塞部位纤维化瘢痕增生而出现阻塞复发，医师们曾尝试激光术后将素高捷疗眼膏，透明质酸钠、丝裂霉素注入泪道，但因为会引起眼部及吞入腹腔引起黏膜坏死等不良反应而放弃，因而我们采用泪道激光成形术联合α-糜蛋白酶治疗慢性泪囊炎，取得了良好效果，现我们自2009年1月至2011年12月采用KTP泪道激光联合泪道内注入α-糜蛋白酶治疗慢性泪囊炎患者52例68眼，随访3个月进行疗效观察。

1 临床资料

2009年1月至2011年12月在我院门诊经裂隙灯检查排除急性结膜炎，眼鼻部外伤所致的骨性泪道阻塞，高血压病及血液系统疾病等全身及眼部其他疾病。泪道冲洗检查确诊为慢性泪囊炎患者52例68眼，根据年龄，性别分组后随机分为：①α-糜蛋白酶组；②生理盐水组，每组34眼。患者经常规泪道冲洗无脓液和冲洗液自鼻腔流出，病程平均3-40年。

2 仪器设备

带光纤的Nd：YAG泪道激光机，波长1.064μm，脉冲频率5～40Hz，输出功率3～6W；特制9号，8号空芯泪道探针，常规泪道冲洗物品，泪点扩张器，泪道冲洗针头。

3 术前准备

3.1 术前常规。用0.85%生理盐水泪道冲洗，确定阻塞部位。慢性泪囊炎患者，术前用庆大霉素溶液加地塞米松混合溶液冲洗泪道，每日1次，同时点用氧氟沙星滴眼液，至泪道冲洗无脓性分泌物溢出，泪囊炎症控制后再行激光治疗。

3.2 器械设备。武汉华工激光工程有限公司生产HGL-MYK10型带导光纤维倍频YAG（KTP）泪道激光机，波长532nm，功率0～10W，光纤直径0.4mm，9号空芯泪道探针（带有针芯）。

4 治疗方法

4.1 患者取仰卧位，1%麻黄素滴鼻液棉片置于中鼻道及下鼻道5分钟，爱尔凯因作表面麻醉，对特别敏感的患者可用1%利多卡因注射液做滑车神经及眶下神经阻滞麻醉，用泪点扩张器适度扩张泪小点。左手将眼睑向反方向绷紧，以消除泪小管的生理弯曲，将带针芯的泪道套管探针自下泪小点进入泪小管，依泪小管走行轻轻插入至阻塞处，抵达阻塞区后稍后退，拨出针芯，插入导光纤维对准阻塞区，用单次脉冲400mJ频率30Hz对阻塞处连续击射，每次击射持续20s，至阻力消失有落空感后，拨出导光纤维，用生理盐水冲洗泪道，如患者诉口腔或鼻腔内有液体流入，提示泪道通畅，如无液体流入，再将泪道探针芯插入慢慢向前推进至鼻泪管走行方向，如遇阻塞拨出针芯，插入导光纤维再次连续发射激光直到有落空感，再次以生理盐水冲洗，患者口或鼻腔流入，提示泪道通畅，至整个泪道通畅后将配制好的0.2g/Lα-糜蛋白酶0.5ml注入泪道，边注射边抽出套管针，保留5分钟，用生理盐水30ml充分冲洗泪道，结膜囊及角膜，并嘱患者吐出冲洗液，注入适量的典必舒眼膏。

4.2 术后处理。嘱患者勿挤压泪道，复方妥布霉素滴眼液，双氯芬酸钠滴眼液点眼2周，1%麻黄素滴鼻，连续1周，庆大霉素注射液和地塞米松混合液冲洗泪道，每日1次，连续5天，通畅者改为3天冲1次，而后每周冲1次，持续1个月。每次使用较粗的泪道探通针，留置20分钟后再注入典必舒眼膏。

4.3 注藥方法。用0.85%生理盐水注入泪道，以患者鼻腔或口腔感到有液体溢出为准；α-糜蛋白酶自插入空芯探针注入，并边注药边将探针撤出。每隔1周行泪道冲洗后按组别分别将以上2种药物注入泪道，持续2个月，随访3个月。

5 观察指标

以术后6个月患者泪溢及泪道冲洗是否通畅为标准。治愈：冲洗泪道通畅且无泪溢；无效：冲洗泪道不通畅，有粘液或脓性分泌物溢出，泪溢症状无缓解。观察3个月。

6 统计方法

计数资料采用X2检验，P<0.01为显著性差异指标。

7 结果

2组病例共68眼，均为一次穿通。术后6个月α-糜蛋白酶组34眼中有28眼冲洗通畅，通畅率达82.35%，生理盐水组34眼21眼冲洗通畅，通畅率为61.76%，两组间比较差异有显著意义（X2=9.31，P<0.01）。

8 讨论

慢性泪囊炎常继发于邻近的鼻腔、副鼻窦的感染，形成周围组织的炎症^[2]，下泪道阻塞致使泪液潴留，使泪囊内容物增加，细菌容易滋生。滞留在泪囊内的分泌物积聚，造成细菌繁殖和泪囊壁炎症^[3]。

α-糜蛋白酶是上海其胜公司生产的，它具有促进上皮细胞生长，抑制成纤维细胞生长的生物学特性，可以减少胶原纤维形成，达到预防粘连的目的，并具有一定的黏性和弹性，为创面的修复，泪道黏膜上皮的生长提供了空间。通过细菌培养抑菌试验证明其还有抑菌作用，可降低机体的感染机会，并可对慢性泪囊炎的致病菌起到抑制作用，是一种无毒、无刺激性、无免疫抗原性，组织相容性好，在体内易被吸收的药物。于泪道激光术后注入泪道治疗慢性泪囊炎，国内尚未见报道，临床实践证实，这种治疗方法对于提高手术成功率，减轻患者痛苦，防止术后泪道粘膜粘连有很好的作用^[3]。加之手术时间短，费用低，患者乐于接受，使患者的生活质量得以改善。参考文献

[1]郑晓龙，贺玲.泪道激光成形术疗效分析[J].中国眼耳鼻喉科杂志，2003，（3）：49

[2]王峰，苏颖主编.泪器病学[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，2001，78～79

糜蛋白酶 第4篇

1 MMPs的基本特点

MMPs是一组锌离子 (Zn2+) 依赖性的内源性蛋白水解酶家族, 几乎可降解除多糖外的全部ECM成分, 参与胚胎植入、伤口愈合、肿瘤转移、心肌重塑和动脉粥样硬化等重要生理病理过程。除MMPs-7外, 均包括3个同源性结构域;①前肽区结构域, 包含一小段约10 kD的信号肽, 引导新合成的酶分泌。同时, 此结构域使MMPs处于失活状态, 其他酶将其裂解后可激活酶。②催化结构域, 包括中心部位的锌离子和与之相结合的3个组氨酸, 促进酶与底物的结合。③C-末端结构域, 包含ECM的蛋白结合位点, 与酶的特异性有关, 各种MMPs特异性的差异就是由于该结构区域的不同而导致的。不同的MMPs都具有以下共同特性:①至少可降解一种ECM成分;②在pH中性环境中活性最佳;③每一分子MMPs需要两分子Zn2+和一分子Ca2+维持其稳定性;④可被其他蛋白酶或有机汞激活, 同时也可被金属离子螯合剂如乙二胶四乙酸 (EDTA) 抑制;⑤均为内肽酶, 能从肽链中间裂解产物;⑥通常以潜酶-抑制物复合体形式分泌到细胞外, 常位于底物附近, 并在细胞外激活;⑦除膜型MMPs外, 其他MMPs均可被相应的金属蛋白酶组织抑制因子 (tissue inhibitor of metalloproteinases, TIMPs) 抑制。

2 MMPs的分类

MMPs可分为2型, 4个亚群[2]。一是分泌型MMPs:此型MMPs以潜酶方式分泌到细胞外, 需蛋白水解酶激活, 包括胶原酶 (MMP-1、MMP-8、MMP-13、NNP-18) 、明胶酶 (MMP-2、MMP-9) 、基质水解酶 (MMP-3、MMP-10、MMP-11) 3个个亚群。二是膜结合型MMPs (MT-MMPs) :包括MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-24、MMP-25。该型MMPs位于细胞膜上, 为ECM蛋白降解提供了特定位置, 并可激活其他种类MMPs (如MMP-2) , 且不受局部TIMPs的抑制。

通过近年的研究, 人们发现:心肌组织中MMPs主要来源于成纤维细胞等非心肌细胞, 其中又以MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、MMP-14与心肌重塑有关。

3 MMPs的活性调控

机体内的MMPs主要受5种形式的调节, 包括转录水平的调节、潜酶的活化、特异性TIMPs的调节、其他抑制因子的调节和负反馈调节。

3.1 转录水平的调节

①大多数MMPs的基因调节序列中, 在-30±2位置中含TATA盒, 此盒之前存在多种转录调节结合位点, 激素、细胞因子可直接与之结合, 或通过诱导C-fos、C-jun等原癌基因表达相应产物并与这些位点结合, 从而刺激MMPs转录。②有的MMPs转录起始部位还有转录因子的多瘤病毒增强子A3 (PEA3) 结合位点, PEA3可与ets基因产物结合, 是一功能性转录元件, 具有调节编码基质降解酶基因转录因子的作用。③MMP-2基因无TATA盒, 其表达很少受原癌基因影响, 属典型的看家基因。④细胞外基质金属蛋白酶诱导剂 (EMMPRIN) 是存在于心肌组织中的一种免疫球蛋白, 也可诱导MMPs基因表达。

3.2 潜酶的活化

MMPs均以潜酶形式分泌到细胞外, 在蛋白水解酶的作用下快速激活和动员, 主要有3种激活方式:①逐级活化:新分泌的MMPs前肽区含有高度保守序列PRCGVPDV, 内有一半胱氨酸残基, 它通过与催化部位的Zn2+相互作用而使酶处于失活状态。一些蛋白水解酶如纤溶酶、胰蛋白酶可将前肽区劈开, 使半胱氨酸与Zn2+分离, 从而暴露出Zn2+活性中心, 即被激活。由于整个过程均是酶活化, 因而具有瀑布级联效应。某些细胞因子如白介素-1 (IL-1) 可诱导纤溶酶原激活因子合成, 抑制纤溶酶原激活抑制因子合成, 使纤溶酶合成增加, 进而促使MMPs酶原激活。②细胞内活化:MT-MMPs与其他MMPs不同, 它们是在分泌过程中逐渐活化, 到达细胞膜时已呈活化状态。③由MT-MMPs激活:部分MMPs可被MT-MMPs激活, 如MT1-MMPs可激活MMP-2、MMP-13。

3.3 其他抑制因子的调节

α2-巨球蛋白可抑制所有蛋白水解酶, 但由于分子量太大, 难以进入结缔组织, 故对MMPs调节作用较弱。

3.4 负反馈调节

纤溶酶一方面激活MMPs, 引起ECM降解, 另一方面又诱导产生纤溶酶原激活抑制因子-1, 使纤溶酶的产生受限, 从而使其作用不至过度。

4 MMPs在心肌重塑中的作用

所谓心肌重塑, 是指在各种病因作用下, 心肌细胞出现坏死、凋亡和肥大, 心肌细胞外基质主要是胶原蛋白的类型、组织、连接结构和浓度发生改变 (即间质纤维化) 的过程。在这一过程中, MMPs扮演着重要角色, Battle等[3]发现扩张性心肌病致重度心力衰竭病人的心肌MMP-9表达水平下降;Felkin等[4]发现需要左心辅助装置的重度心力衰竭病人心肌MMP-1和MMP-8表达增高;Ahmed等[5]发现高血压伴左室肥厚的病人MMP-2和MMP-13表达下降, 而MMP-9增加;在Syrian豚鼠心肌病模型中, MMPs的活性明显升高, 且发生心肌重塑的心肌标本中MMPs活性升高更明显。Mori等[6]发现在转基因大鼠的MMP-3活性增加并可通过调节MMP-9促进心肌重塑和心力衰竭的发展。Ducharme等证实, 剔除MMP-9的大鼠发生心肌梗死后, 其左心室腔扩大延缓至梗死后15 d;过度表达肿瘤坏死因子 (TNF) 转基因小鼠, 早期出现MMPs活性增高, 后逐渐出现心肌总纤维胶原减少及左室的扩大。总的说来, MMPs在心肌重塑中主要作用有:①直接降解ECM中的胶原, 引起ECM退化, 从而心肌排列紊乱, 收缩功能异常。②增加 (趋化作用) 纤维细胞进入其作用后的区域, 引起胶原沉积, 使基质重量增加, 但质量下降。③介导许多物质的活化, 如TNF-α、转化生长因子-β (TGF-β) 及白介素-1β (IL-1β) , 这些物质一方面增加新胶原的合成, 并破坏心肌细胞;另一方面可促使MMPs表达增加, 构成恶性循环, 进一步加重心肌重塑。需要指出的是, 某种MMP在心肌重塑中到底起何作用, 除了取决于其本身的特异性, 还与其产生的时间、地点及底物有关。

5 国内外对MMPs及其抑制剂的研究进展

过去20年来, 各国学者尤其是以Weber、Schaper为首的研究小组对心肌ECM研究做了大量的工作, MMPs作为ECM的高效水解酶, 自然备受青睐。由于多种MMPs在心肌重塑、心力衰竭过程中均有不同程度的活性增高, 因此人们希望通过某种方式抑制MMPs活性, 以达到延缓甚至逆转心肌重塑的目的。理论上说, 抑制MMPs活性有如下方法:①加入外源性TIMPs;②减少局部MMPs的产生;③促进局部TIMPs合成;④研制人工合成的MMPs抑制剂。其中, 外源性TIMPs易受各种因素影响而发生变性和降解;人为加入某些细胞因子可减少局部MMPs产生或促进局部TIMPs合成, 但副反应较大。因此, 人工合成的MMPs抑制剂成为主要研究方向。Spinale等用MMPs抑制剂PD166793治疗快速起搏引起充血性心力衰竭猪, 减轻了左室扩张和后壁变薄程度, 并使左室功能得到改善。Rohde等在心肌梗死小鼠模型中证实, 早期应用MMPs抑制剂可以减轻左室扩张。虽然广谱MMPs抑制剂减缓了心肌重塑过程, 但它同时还会影响正常组织的重建, 引起不良反应如肌肉骨骼肌疼痛。因而, 选择性MMPs抑制剂成为研究的新热点。2003年King等[7]证实选择性MMPs抑制剂可在不影响正常组织结构和功能的前提下阻止心力衰竭中心肌重塑过程。

6 目前研究中存在的问题

尽管动物实验结果为MMPs抑制剂的临床应用展现出美好的前景, 但仍存在以下问题亟待解决:①心肌重塑、心力衰竭是一个逐渐进展的漫长过程, 在这一过程中, MMPs并非一直保持高表达, 而是呈现动态变化规律。在不同原发疾病致心肌重塑、心力衰竭的演变中, 活性增高的MMPs种类及变化规律是不尽相同, 不同时相中起主要作用的MMPs种类也是不同的。当临床医生面对心力衰竭的病人时, 又应当在何种时期选用何种选择性MMPs抑制剂?关于这方面的研究较少。②MMPs、TIMPs及各种细胞因子之间构成了一个复杂的调控网络。当使用MMPs抑制剂时, 网络中其他成员也会受到一定影响, 并间接作用于ECM, 从而可能干扰疗效。对于这一调控网络, 我们仍然知之甚少。③许多关于MMPs抑制剂的研究时间太短, 对其改善心功能及降低死亡率的长期效应尚不明确, 因此还不能对MMPs抑制剂的疗效贸然下结论。④使用MMPs抑制剂可能导致合并其他脏器纤维化疾病的病人出现病情恶化。

参考文献

[1]Hijova E.Matrix metalloproteinases:Their biological functions and clinical i mplications[J].Bratisl Lek Listy, 2005, 106 (3) :127-132.

[2]汪砚雨.基质金属蛋白酶在心室重构及充血性心力衰竭中的地位[J].医药论坛杂志, 2004, 25 (11) :78-79.

[3]Batlle M, P啨rez Villa F, Garcia Pras E, et al.Down-regulation of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) expressioninthe myocardiumof congestive heart failure patients[J].Transplant Proc, 2007, 39 (7) :2344-2346.

[4]Felkin LE, Birks EJ, George R, et al.Aquantitative gene expression profile of matrix metalloproteinases (MMPs) and their inhibitors (TI MPs) inthe myocardiumof patients with deteriorating heart failurere-quiringleft ventricular assist device support[J].J Heart Lung Trans-plant, 2006, 25 (12) :1413-1419.

[5]Ahmed SH, Clark LL, Pennington WR, et al.Matrix metallopro-teinases/tissue inhibitors of metalloproteinases:Relationship between changes in proteolytic determinants of matrix composition and struc-tural, functional, and clinical manifestations of hypertensive heart disease[J].Circulation, 2006, 113 (17) :2089-2096.

[6]Mori S, Gibson G, McTiernan CF.Differential expression of MMPs and TI MPs in moderate and severe heart failure in a transgenic model[J].J Card Fail, 2006, 12 (4) :314-325.

芦笋菠萝蛋白酶胶囊说明书 第5篇

【拼音全码】LuSunBoLuoDanBaiMeiJiaoNang

【主要成份】芦笋菠萝蛋白酶胶囊为复方制剂，其组分为：每粒含芦笋粉0.25g，菠萝蛋白酶1.5万单位。

化学名：芦笋菠萝蛋白酶

【性状】芦笋菠萝蛋白酶胶囊为硬胶囊剂，内容物为棕黄色粉末。

【适应症/功能主治】芦笋菠萝蛋白酶胶囊具有软坚散结，消炎镇痛作用。适用于乳腺囊性增生病和男性乳腺发育症。

【规格型号】100s

【用法用量】成人4-6粒每次，每日3-4次。

【不良反应】尚不明确。

【禁忌】1、对芦笋菠萝蛋白酶胶囊成分过敏者禁用。2、严重肝、肾疾病患者禁用。3、血凝功能不良者禁用。

【注意事项】肾炎、胃溃疡病者慎用。

【儿童用药】儿童慎用。

【老年患者用药】在医生指导下服用。

【孕妇及哺乳期妇女用药】孕妇禁用。

【药物相互作用】如与其他药物同时使用可能发生药物相互作用，详情请咨询医师或者药师。

【药物过量】尚不明确。

【药理毒理】芦笋中主要成份为天门冬酰胺，在体内对恶变细胞生长建立一种生化障碍，能防止健康细胞恶变菠萝蛋白酶是巯基酶，能选择性地水解纤维蛋白，将阻塞于组织内的纤维蛋白血凝块溶解，改善病灶局部体液循环。芦笋菠萝蛋白酶胶囊具有软坚散结，消炎镇痛作用。

【药代动力学】尚不明确。

【贮藏】密闭，干燥处保存。

【包装】100s/盒。

【有效期】24月

【执行标准】化学药品地标升国标12册

【批准文号】国药准字H44025162

【生产企业】广东彼迪药业有限公司

乳清蛋白，蛋白中的“精英” 第6篇

1、蛋白质被人体消化、吸收得越彻底，其营养价值越高；

2、被人体吸收后的蛋白质，利用程度有高有低，利用程度越高，其营养价值也越高；

3、必需氨基酸种类齐全、数量充足、构成比例适当的蛋白质，营养价值高。

有一类蛋白质，在这些方面都非常出众，它就是乳清蛋白。先看看它具有哪些“精英气质”：

1、乳清蛋白易消化吸收，属于快消化蛋白。

2、乳清蛋白中必需氨基酸种类齐全、数量充足、比例适当，与人体需要模式相近，在体内利用率高。

3、乳清蛋白中富含支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)及α-乳白蛋白、免疫球蛋白、乳铁蛋白等多种活性成分。免疫球蛋白可以调节机体免疫力。乳铁蛋白是乳清中另一种具有多种生理功能的蛋白质，大量存在于哺乳动物的初乳中，其主要作用是为新生动物提供抵御外来感染的能力，提升免疫调节，抑制体内自由基，调节体内铁的运输及促进肠道有益菌的生长。

乳清蛋白的“精英风范”使其在营养应用方面相当广泛：母乳是婴儿最完美的食物，婴幼儿喂养首选母乳，因种种原因不能母乳喂养时，选择婴幼儿配方奶粉。世界各地已非常普遍地在婴幼儿配方奶粉中添加乳清蛋白，以尽量缩小婴幼儿配方奶粉与母乳的差异，使其成为仅次于母乳的最佳婴儿食品；乳清蛋白的氨基酸模式几乎与骨骼肌中的氨基酸模式完全一致，对肌肉蛋白质合成不可或缺。乳清蛋白富含支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)，对能量供给、骨骼肌蛋白质合成、降低运动疲劳、增强免疫功能等具有重要作用，因此是运动人群需要的完美蛋白质；随着年龄增加，老年人的新陈代谢和活动量以及各种生理机能都在发生变化。肌肉的流失和功能的衰退也与多种老年疾病紧密联系在一起。乳清蛋白可以避免增加老年人机体的代谢负担，更有利于蛋白质合成，从而保持良好的蛋白质营养状态，并减缓肌肉组织的丢失，从而降低罹患各种老年疾病的风险；创伤、烧伤及手术前后补充乳清蛋白，可促进患者伤口愈合，减少并发症；肿瘤放疗、化疗病人可补充乳清蛋白；对某些肝脏疾患，补充乳清蛋白可纠正支链氨基酸与芳香氨基酸的比值，防止肝性脑病。

没有一种蛋白质是100％被利用的，高质量蛋白质的利用功效损失约为30％，低质量蛋白质其功效损失为60％。理论上说，要想获得100克额外蛋白质，就需要在1周内摄入130克高质量蛋白质或160克低质量蛋白质。摄入过量蛋白质尤其是低质量蛋白质会增加内脏器官如肾脏的代谢压力。摄入高生物价的蛋白质，能达到事半功倍的效果。

如何找到并享用乳清蛋白

乳清蛋白是牛奶中天然存在的一类可溶性蛋白质，增加乳制品的摄入量就能获得更多的乳清蛋白，如含有乳清蛋白的酸奶、饮料、营养棒等。然而，常见的乳制品中乳清蛋白的含量比较低，要想直接获得乳清蛋白，可以选择乳清蛋白粉。

美国大杏仁奶露

1、加热牛奶500毫升，放入美国大杏仁粉150克，浸泡20分钟；

2、过滤，得到奶露；

3、在奶露中加入乳清蛋白粉20克，搅拌均匀即可。

牛奶鸡蛋麦片

1、鸡蛋1个搅拌成蛋浆；

2、加热牛奶200毫升，倒入蛋浆，用勺轻轻搅拌，打散蛋浆；

3、加入麦片100克，煮1分钟，加糖少许调味，熄火；

4、加入乳清蛋白粉10克，搅拌均匀即可。

乳清蛋白果昔

新鲜果汁、牛奶配乳清蛋白粉，搅拌均匀即可。

糜蛋白酶 第7篇

1 病例介绍

患儿, 女, 出生后1 h, 于2006年4月拟胎粪吸入综合征收入院。入院时体查患儿哭声弱, 烦躁, 体温不升, 脉搏150/min, 呼吸70/min, 唇周发绀, 明显三凹征, 肤色苍白, 四肢冰凉, 入院后患儿继发全身水肿, 头皮下严重皮下气肿, 给予呼吸机辅助呼吸, 抗感染、输血、抗休克等治疗, 经治疗1周后患儿病情稳定, 予停用呼吸机时发现枕部出现两处压疮, 直径分别为2 cm×2 cm和1 cm×1 cm, 表面形成黑色硬痂皮, 周围皮肤苍白, 予剪去坏死皮肤, 创面有大量脓性分泌物排出, 两压疮间有瘘管相通, 已达压疮坏死溃疡期。我科在护理上运用局部解除压迫和创面处理、抗生素控制感染、增加营养等压疮的常规治疗并采用白蛋白涂敷1周后, 疗效欠佳。改用糜蛋白酶涂敷治疗, 取得较好效果, 15 d后压疮治愈。

2 护理

2.1 清创

常规用安尔碘消毒压疮周围皮肤后, 先用3%过氧化氢5 mL～10 mL冲洗创面, 后再用生理盐水清洗至创面清洁, 每日2次或3次。

2.2 照射

清创后用红外线灯照射创面15 min～20 min, 视创面分泌物的多少决定照射次数, 每日可照射2次或3次, 对准压疮部位, 距离10 cm～20 cm, 防止烫伤、电伤。

2.3 糜蛋白酶涂敷

照射后, 在临床医师及药剂师的指导下, 根据创面的面积、患儿的体重计算药量, 取糜蛋白酶2瓶, 取出粉末, 均匀地轻涂在创面上, 再无菌纱块覆盖, 并用胶布固定。其换药时间要根据渗液量多少而定, 第1天, 创面渗出液较多, 每天换药4次～6次, 第2天渗出液较前减少, 每天换药3次～5次。第3天渗出液明显减少, 每天换药3次。1周后, 渗出液基本吸收, 每天换药2次。

2.4 结果

患儿用糜蛋白酶涂敷治疗3 d后, 炎性分泌物明显减少, 边缘皮肤红润、光滑, 出现新鲜肉芽, 瘘管已闭合。1周后渗出液完全吸收, 肉芽组织迅速生长, 两个创面缩小至1.5 cm×1.5 cm和0.5 cm×0.5 cm, 15 d后创面结痂、脱落、瘢痕形成, 压疮治愈。用药过程中未见任何不良反应发生。

3 体会

新生儿的皮肤很娇嫩[2], 与正常成人的皮肤有很大差异, 所以在压疮的治疗上也有很大差异, 成人常用白蛋白外涂治疗压疮, 效果显著, 但在此例新生儿使用过程中, 发现白蛋白对娇嫩的新生儿皮肤刺激性较大, 局部皮肤发红、发热, 创面分泌物增多, 压疮治疗效果差。糜蛋白酶为牛胰中分离提纯的一种蛋白水解酶, 分解能力强, 能使某些脂和蛋白水解, 可消化脓液、积血、坏死组织, 起创面净化、消肿作用, 而且毒性低, 副反应小。临床用于创伤或术后创面愈合、炎症、局部水肿、积血、扭伤血肿等[3,4]。改用糜蛋白酶涂敷后, 发现该药对皮肤刺激性少, 药物容易吸收, 肉芽组织生长迅速, 且操作简单, 易于掌握, 配合局部照射, 照射能促进局部血液循环, 使创面干燥, 减少渗出, 以免湿润条件使细菌繁殖, 创面迅速愈合, 可以在临床推广使用。

摘要：[目的]探讨使用糜蛋白酶涂敷治疗新生儿压疮的效果。[方法]采用糜蛋白酶涂敷加局部照射。[结果]糜蛋白酶涂敷治疗3d后, 炎性分泌物减少, 肉芽组织生长, 1周后渗出液完全吸收, 15d后压疮治愈。[结论]采用糜蛋白酶对压疮涂敷治疗, 效果较好。

关键词：新生儿,压疮,护理

参考文献

[1]李如竹.护理学基础[M].北京:人民卫生出版社, 2005:186.

[2]赵兰英, 凌殿芬, 孙桂芳.新生儿的皮肤特点及护理[J].中华现代护理学杂志, 2006, 3 (6) :572.

[3]丁全福.药理学[M].北京:人民卫生出版社, 2002:231.

糜蛋白酶 第8篇

1 资料与方法

1.1 临床资料：

本组研究对象为我院2009年10月至2014年5月收治的213例软组织中晚期血肿患者，发病原因均为外伤，男150例，女6例；发病部位：头部43例，颈部15例，腹股沟部21例，下腹部10例，下肢65例，髋部19例，臀部8例，上肢20例，腰部12例。中期血肿13例，晚期血肿83例；随机分组，研究组113例，对照组100例，两组在一般资料方面比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 治疗方法

1.2.1 研究组治疗方法：

生理盐水和2%利多卡因各取一半，共约5 mL（据血肿大小取不同的量），溶解糜蛋白酶。小血肿用1～2支（每支4000单位），较大的血肿用2～3支。患处皮肤用75%酒精消毒，用5 mL注射器接7号针头，于血肿低位处穿刺，抽出积液。过于黏稠不易抽出者，可注入少量盐水，反复冲洗，尽量抽尽积液，留置针头，注入糜蛋白酶药液，拔出针头，其中7例血块严重，需配合小切口血块清除后再注入糜蛋白酶药液，用纱块弹力绷带包扎。每隔1 d后重复上述治疗，直到治愈。

1.2.2 对照组治疗方法：

按传统治疗方法，操作时常规皮肤消毒后铺无菌孔巾，利多卡因局麻后手术切开行凡士林纱条引流后包扎，严格无菌操作，每日换药，不使用糜蛋白酶治疗。

1.3 观察指标：

对两组患者的临床愈合情况及不良反应发生情况进行观察及对比。临床愈合分：优（无瘢痕，肤色正常，无功能障碍）、良（瘢痕小，肤色正常，无功能障碍）、差（瘢痕明显，色素沉着，合并功能障碍）。

1.4 统计学处理：

数据采用SPSS16.0进行处理，计量资料均采用（x-±s）表示及t检验，计数资料采用率表示和χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者临床愈合情况：

研究组113例患者临床愈合时间7～10 d，平均（8.5±1.5)d；对照组100例患临床愈合时间12～20 d，平均（16.±4.1)d；两组患者在临床愈合时间方面比较，差异较大（t=5.216,P<0.05）；研究组其中90例于注射后7 d内肿块消失，23例10 d内肿块消失；而对照组82例14 d治愈，10例10 d治愈，8例20 d治愈；研究组疗效明显优于对照组（P<0.05），见表1。

2.2 两组不良反应及随访结果对比：

研究组注射后半小时局部肿胀或有痛感，24 h内消退，局部无发热、无影响休息，本组患者注射后未见有心慌、头晕等过敏者；113例均随访3个月以上，均无复发，全部注射后无局部组织坏死、感染，恢复后皮肤弹性、色泽正常，愈合优比例93.8%；对照组100例的随访，患者术后疼痛不适发生率高76例（76.0%),3例合并术后感染给予静脉用药治疗，愈合后瘢痕明显，影响美观，血肿发生在关节处的还对活动造成一定影响，两组不良反应率比较（χ2=4.371,P<0.05），差异具有统计学意义。随访结果显示研究组临床愈合优的患者达93.8%明显高于对照组0.0%，差异具有统计学意义，见表2。

3 讨论

软组织血肿是指机体损伤后（挫伤或扭伤），因局部血管壁受损血液外漏在组织中所造成的闭合性软组织内出血，周围组织受压力的作用，使其成为1个容纳血液的囊腔[3]。因创伤积液的隔离，影响创面愈合，早期大多靠抽吸及加压可治愈，晚期陈旧性血肿内的血液日久之后有的成分已被吸收，血肿周围形成假囊壁、内有液体残留的假性囊肿，同时血肿形成皮肤屏障减弱有于细菌繁殖，形成脓肿，既往常认为必须手术治疗[4]。一般只要临床不忽视都在早期发现及治愈，但实际工作中，因不够重视，屡见不鲜，直至中晚期才给予进一步处理，此研究将血肿按发现时间分为早期血肿（1～7 d），中期血肿（8～14 d），晚期（陈旧性）血肿（15 d以上）。

糜蛋白酶能水解蛋白质和肽类分子中由苯丙氨酸、酪氨酸的羧基组成的肽腱[5]，本组患者采用糜蛋白酶治疗正是利用它能水解蛋白质的特点使黏液液化利于吸收消散，糜蛋白酶可充分与血肿假囊内壁接触，假囊内壁损伤坏死组织逐渐溶解后，以及糜蛋白酶渗到周围组织中被吸收后粘合，囊壁脱水变性，最终纤维化而消除空腔，且浓度迅速降低，亦不引起周围组织坏死，同时可预防感染。本组113例注射后，无局部组织坏死、感染，恢复后皮肤弹性、色泽正常，无1例发生感染。无明显不良反应，但应避免药液从针孔漏出到周围正常组织中引起不良反应。

糜蛋白酶通过对蛋白质的肽链水解作用，可以液化脓液，分解坏死组织，增加白细胞的游走及吞食作用[6]，从而促使炎症消除，消化脓液、积血、消炎、消肿作用，可减少局部分泌和水肿，清洁净化创面，有助于新生肉芽组织的生长，促进炎症的消散和伤灶愈合，与以往传统治疗必须切开引流比较：痛苦少，治愈快，不留明显瘢痕，经临床应用效果显著，无明显不良反应，值得临床推广使用。参考文献

摘要：目的 评价糜蛋白酶对中晚期软组织血肿的治疗效果。方法 将我院213例软组织中晚期血肿分为研究组113例,对照组100例分别进行不同方法治疗,研究组清除积液后注入糜蛋白酶药液治疗,对照组按传统方法进行手术切开引流治疗;对两组的临床愈合情况及不良反应进行对比分析。结果 研究组临床愈合时间(8.5±1.5)d明显快于对照组(16.0±4.1)d,P<0.05;研究组疗效明显优于对照组,P<0.05;研究组临床愈合优的患者达93.8%明显高于对照组0.0%,P<0.05;研究组不良反应率明显低于对照组,P<0.05。结论 糜蛋白酶腔内注射使用大大提高了血肿的吸收速度,缩短了血肿残留时间,较以往切开引流痛苦少,治愈快,不留明显瘢痕。

关键词：糜蛋白酶,腔内注射治疗,软组织中晚期血肿

参考文献

[1]周士杰.皮下血肿的处理[J].中国实用医刊,1981,3(1):17

[2]葛长官,刘大玲.糜蛋白酶囊内注射治疗腱鞘囊肿和胭窝囊肿122例[J].中国临床医生,2000,28(6):31-31.

[3]黄向辉,丘革新,郑摇伟.创伤性腹膜后血肿治疗的临床分析[J].吉林医学,2014,35(4):685-686.

[4]陈才华,江川,蔡敬.迟发性外伤性颅内血肿42例临床分析[J].创伤外科杂志,2013,15(5):449.

[5]彦祖.糜蛋白酶[J].山西医学杂志,1964,1(1):67-70.

糜蛋白酶 第9篇

目前, 提高小麦蛋白乳化性的方法主要有以下4种, 分别包括化学法、物理法、酶解法和基因工程法。目前, 由于酶解法反应条件温和、能耗低, 安全天然, 逐渐成为研究热点, Kong X Z等[2]、张锐昌等[3]、齐军茹等[4]在小麦蛋白改性方面的研究选择了胰酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶等, 经过效果比较, 对小麦蛋白进行改性后, 则其分子结构发生了明显变化, 其酶解产物的一些功能性质发生了明显的变化, 如乳化性、水溶性、起泡性等, 因此可在食品及饲料开发中得到应用。其中, 碱性酶、胰酶等在条件为碱性的条件下对小麦蛋白的水解程度较大, 产生的改性效果也较为明显, 因此成为相关学者研究的重点。

本文选择乳化活力作为试验的指标设计正交试验, 对碱性酶水解小麦蛋白的工艺条件进行了较为系统的研究, 现将试验情况总结如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料包括济宁和美生物工程有限公司生产的碱性蛋白酶、徐州澳凯小麦淀粉有限公司生产的小麦蛋白粉、广东天地食品贸易有限公司生产的纯正花生油等。药剂包括十二烷基硫酸钠 (SDS) 、三氯乙酸 (TCA) 、福林试剂等, 其中甲醛、盐酸、氢氧化钠等为分析纯, 水为蒸馏水。仪器包括上海精密科学仪器有限公司生产的分光光度计 (752N) 、上海大中分析仪器厂生产的酸度计 (p HS-25B) 、国华电器有限公司生产的水浴锅 (HH-4) 、上海沪西分析仪器厂生产的恒温磁力搅拌器 (90-1型) 。

1.2 试验方法

1.2.1 蛋白酶活性测定。

采用福林-酚试剂法[5]测定蛋白酶活力。

1.2.2 小麦蛋白粉粗蛋白含量测定。

采用凯氏定氮法 (2010年标准) 测定小麦蛋白粉粗蛋白含量。

1.2.3 小麦蛋白粉乳化性测定。

测定小麦蛋白粉乳化性的方法为取0.1%蛋白溶液45 m L, 加入纯正花生油15 m L中, 在离心速度为10 000 r/min、室温下进行搅拌, 时间控制为1 min即可, 取样的时间分别在搅拌后的0、5、10 min, 取样的部位为底部[6]。以0.1% (w/v) 的SDS稀释100倍, 对500nm处的吸光值A500进行测定, 空白溶液选择SDS。乳化活力指数EAI可用零时刻的吸光值表示, 计算公式如下:

式 (1) 中, EAI表明蛋白质的乳化面积, 单位为m2/g;N表示稀释倍数;Ф表示油相所占的分数, 本试验中油相占1/4;C表示蛋白质的浓度, 单位为g/m L;L表示比色池光径, 单位为1 cm。

以5、10 min时刻的吸光值表示乳化稳定指数 (ESI) :

式 (2) 中, A0表示零时刻的吸光值;At表示t时刻时的吸光值;ΔT表示时间差;ΔA表示ΔT内的吸光值差。

1.2.4 小麦蛋白粉乳化性影响的单因素考查。

(1) 温度对小麦蛋白粉乳化性的影响。取5份小麦蛋白粉5 g溶解在蒸馏水95 m L中, 并将p H值调到8.5, 加入碱性蛋白酶0.05 g, 分别在40、45、50、55、60℃的水浴锅中进行反应, 滴定的试剂选择1 mol/L Na OH, p H值控制为8.5, 反应时间达到2 h后, 将5份反应样均放在温度为95℃下进行灭酶, 时间为10 min, 然后按照1.2.3中的方法, 对乳化活力指数进行测定。

(2) p H值对小麦蛋白粉乳化性的影响。准备5份小麦蛋白粉5g溶解于95 m L的蒸馏水中, 加入适量的碱性蛋白酶 (0.05 g) , 将p H值分别调节为7.5、8.0、8.5、9.0、9.5, 然后将5份样品均放在温度为50℃的水浴锅中反应, 滴定的试剂为1 mol/L Na OH, p H值应保持恒定, 反应的时间达到2 h后, 在温度为95℃下进行灭酶, 时间控制为10 min, 然后按照1.2.3中的方法, 进行乳化活力指数的计算。

(3) E/S (碱性蛋白酶/小麦蛋白粉质量比) 对小麦蛋白粉乳化性的影响。准备5份小麦蛋白粉5 g溶解于95 m L的蒸馏水中, 并将p H值统一调至8.5, 分别加入碱性蛋白酶0.025、0.050、0.075、0.100、0.125 g, 然后放在温度为50℃的水浴锅中进行反应, 滴定的试剂选择1 mol/L Na OH, p H值维持在8.5, 反应时间达到2 h后, 5份样品均放置在温度为95℃的条件下进行灭酶处理, 时间控制在10 min, 然后按照1.2.3中的方法, 对乳化活力指数进行测定。

1.2.5 正交试验设计。

根据单因素试验结果, 以乳化活力指数为指标, 确定了三因素三水平L9 (34) 的正交试验, 各因素水平设计见表1。

2 结果与分析

2.1 样品蛋白酶活力

经过试验, 样品蛋白酶活力测得为133.05 U/g。

2.2 小麦蛋白粉粗蛋白含量

经过试验, 小麦蛋白粉粗蛋白含量测得为75%。

2.3 温度对小麦蛋白粉乳化性的影响

由图1可知, 随着反应温度的增加, 小麦蛋白粉的乳化活性逐渐降低。可知, 反应温度为40℃时的小麦蛋白粉乳化活性最好。温度在45~50℃之间, 乳化活力指数趋于平稳;而在50~60℃乳化活力指数呈下降趋势。由图2可知, 在温度为45℃时, 乳化稳定性 (ESI) 达到最好, 说明此时的小麦蛋白粉乳化稳定性活性比较稳定。

2.4 p H值对小麦蛋白粉乳化性的影响

由图3可知, 随着p H值的升高, 产物的乳化活性呈先上升后下降, 在碱性条件中, 氨基酸为阴离子, 氨基反应性较强, 因此p H值增加会加速Maillard反应[7], 进而促进小麦蛋白酶解。因此, 乳化活性的p H值为7.5~8.0之间较好, 其他p H值范围内较差。由图4可知, 在5 min时刻, p H值为8时, 小麦蛋白粉的乳化稳定性达到最好;在10 min时刻, p H值为9时, 小麦蛋白乳化稳定性达到最好。

2.5 E/S (碱性蛋白酶/小麦蛋白粉质量) 对小麦蛋白粉乳化性的影响

由图5可知, E/S为2.5%时乳化活性最好, EAI为12.16m2/g;E/S为0.5%~2.5%乳化稳定性变化趋势呈波动型。在选定范围内, 乳化活性变化为下降后上升, 下降后再上升的趋势。由图6可知, 在E/S为1.50%时, 小麦蛋白粉的乳化稳定性最好。

2.6 正交试验结果分析

表2、表3是碱性蛋白酶水解小麦蛋白粉的正交试验结果、极差以及方差分析。

由表2可知, 通过正交试验结果和极差分析可以得到最佳改性条件为p H值7.5、E/S为2.5%、温度为60℃。各因素对提高小麦蛋白粉乳化性的重要性按大小次序为p H值>E/S>温度。根据分析, 最佳条件下的EAI为15.48 m2/g。由表2可看出, 3个因素对小麦蛋白粉乳化活力指数均无显著影响[8]。

3 结论

以乳化活力指数为指标, 采用单因素和正交实验研究了碱性蛋白酶对小麦蛋白水解最适条件。结果表明:3个因素对小麦蛋白粉乳化性的影响由强到弱的顺序为p H值>碱性蛋白酶/小麦蛋白粉质量>温度, 最佳酶解条件为p H值7.5、底物浓度2.5%、温度60℃, 此时的乳化性达到最高, EAI为15.48 m2/g。各因素对小麦蛋白粉乳化性的影响都不显著。酶法改性小麦蛋白粉生产乳化剂不仅成本低廉, 而且天然健康, 若能工业化生产天然食品添加剂, 具有巨大的市场潜力。

参考文献

[1]阙斐, 赵粼, 陈锡威.胰酶提升小麦蛋白酶解产物乳化活性工艺及其功能特性研究[J].食品工业科技, 2014 (10) :303-307.

[2]KONG X Z, ZHOU H, QIAN H F.Enzymatic preparation and functional properties of wheat gluten hydrolysates[J].Food Chemistry, 2007, 101:615-620.

[3]张锐昌, 徐志宏.小麦蛋白酶解物功能性质的研究[J].粮食与饲料工业, 2011 (7) :27-30.

[4]齐军茹, 王兰, 李瑜.中性蛋白酶对小麦面筋蛋白的水解改性研究[J].郑州工程学院学报, 2001, 22 (4) :46-49.

[5]李伟格, 李美同, 苏晓鸥, 等.饲料分析及饲料质量检测技术[M].北京:中国农业科技出版社, 1998:5.

[6]王亚平, 王金水, 张伟红, 等.乳糖改性提高谷阮粉乳化性研究[J].食品工业科技, 2005, 26 (4) :77-80.

[7]程辉, 黄河龙, 谢小勇.水溶性小麦蛋白制备工艺研究[J].粮食与油脂, 2008, 11 (8) :23-24.

糜蛋白酶 第10篇

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2001年7月～2012年6月收治的褥疮患者178例, 其中, 男94例, 女84例, 年龄35～74 (58.7±14.3) 岁;脑血管意外偏瘫患者126例, 脊髓损伤截瘫患者52例, 所有患者褥疮均因长期卧床引起;褥疮面积2.5cm×3.0cm～12.0cm×20.5cm;褥疮分期:Ⅱ期74例, Ⅲ期81例, Ⅱ期和Ⅲ期同时存在23例;褥疮部位发生于背部、骶尾部、髂部、踝部、足跟部等处;178例患者随机分为观察组90例和对照组88例, 两组患者从年龄、性别、褥疮面积、部位、分期等各方面比较差异不大, 具有可比性 (P>0.05) 。

1.2 治疗方法

1.2.1 对照组

常规方法清创, 用过氧化氢溶液和生理盐水清洗创口后, 用剪刀对坏死创面进行修剪, 再用过氧化氢溶液和生理盐水清洗创口, 碘伏液消毒后, 用无菌纱布覆盖包扎, 连续20d用相同方法清创, 并观察创面渗出情况。

1.2.2 观察组

在对照组的基础上加用糜蛋白酶 (北京双鹤股份有限公司, 4000u/支) 、肤康霜 (西安仙草生物工程有限公司, 10g/瓶) 和康复新 (四川好医生攀西药业有限责任公司, 100ml/瓶) 混合液浸透的医用无菌纱布敷于患处, 再用凡士林纱布覆盖, 保持局部湿润;混合液调配剂量:糜蛋白酶4000U、肤康霜5g、康复新液10ml混合搅拌均匀, 根据药敏结果可加入庆大霉素8万U或其他抗生素[2];连续20d用相同方法清创换药, 观察创面渗出情况。

1.3 疗效判断标准

(1) 痊愈:创面疤痕结实, 上皮完全覆盖, 无脓液渗出, 创面无新溃烂出现; (2) 显效:创面面积减小≥2/3, 肉芽组织新鲜, 无脓性分泌物; (3) 有效:创面面积减小≥1/3, 但不足2/3, 肉芽组织较为新鲜, 有少量脓性分泌物; (4) 无效:创面面积减小不足1/3甚至增加, 脓性分泌物无明显减少甚至增多;总有效率=痊愈率+显效率+有效率。

1.4 统计学方法

本组数据采用SPSS 13.0统计学软件进行处理, 计量单位采用$\overline{x}\pm s$表示, 组间比较经χ2检验, 以P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者治疗7d后临床治疗效果比较 见附表。

由两表可知, 观察组总有效率为95.6%, 对照组总有效率为79.5%, 观察组临床治疗效果显著优于对照组, 具有统计学意义 (P<0.05) 。

2.2 附组褥疮治愈时间观察组比较平均16.7±2.1d, 对照组25.6±4.7d, 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 两组患者均未出现严重药物不良反应。

3 讨论

长期卧床患者褥疮的形成主要与局部皮肤受压或摩擦破损, 造成局部组织血液循环不畅, 供血不足, 皮下组织发生缺血坏死、溃烂;褥疮按形成过程主要分为四期, 即内淤血红润期、炎性浸润期、浅度溃疡期、坏死溃疡期, 临床以炎性浸润期和浅度溃疡期最为多见[3], 若治疗不及时可迅速发展为坏死溃疡期, 可引起骨髓炎、化脓性关节炎或蜂窝组织炎等并发症, 严重者可因并发脓毒败血症而危及生命;临床多采用局部清创加药物外敷治疗, 外敷药物以抗菌消炎、促进局部组织细胞生长为主。

本次研究在常规清创基础上加用糜蛋白酶、肤康霜和康复新混合液治疗, 其作用机制主要有以下几点: (1) 褥疮表面多附着表皮坏死组织及脓性分泌物, 对褥疮表面进行清创, 完全清除坏死组织和脓性分泌物, 既可使药物与创面完全接触, 促进肉芽组织生长, 促进表皮层生成, 同时外敷广谱抗生素, 避免细菌在创面表面滋生造成感染; (2) 糜蛋白酶是从动物胰脏中提取制成的蛋白水解酶, 具有肽链内切酶的作用[4], 易溶于水, 能水解苯丙氨酸和酪氨酸的羧基组成的肽链, 用于褥疮创面时, 能够分解感染部位的纤维蛋白, 清除创面周围的坏疽、碎屑和腐肉, 同时也可分解脓液中的蛋白质, 具有消除脓液、积血、坏死组织, 洁净创面, 促进创口愈合, 消炎抗菌的作用; (3) 肤康霜含有积雪甙成分[5], 具有激活上皮细胞, 促进正常肉芽组织形成和生长, 加快创面愈合的作用, 同时抑制成纤维细胞的增殖, 消除瘢痕组织, 主要应用于治疗各类皮肤溃疡; (4) 康复新液为美洲大蠊干燥虫体提取物[6], 具有显著促进肉芽组织生长, 加速坏死组织脱落, 加快各类溃疡修复和毛细血管新生, 促进创面愈合, 同时还能提高巨噬细胞的吞噬能力, 提高机体免疫功能, 消除局部组织炎性水肿, 散瘀活血, 养阴生肌, 常用于瘀血组织性褥疮及各类溃疡、烧烫伤等。此外, 加强对长期卧床患者护理, 定时协助其翻身, 更换衣物、被褥, 加强营养等措施也是预防和治疗褥疮的重要因素。

综上所述, 糜蛋白酶、肤康霜和康复新混合液治疗长期卧床并发褥疮, 临床疗效显著, 安全性高, 对提高患者生活质量, 减轻患者痛苦具有积极意义, 值得临床推广应用。

摘要：目的 观察糜蛋白酶、肤康霜和康复新混合液治疗长期卧床并发褥疮的临床疗效;方法 选取我院2001年7月～2012年6月收治的因脑血管意外偏瘫和脊髓损伤截瘫而长期卧床并发褥疮的患者178例, 随机分为观察组90例和对照组88例, 对照组给予常规传统治疗, 观察组在对照组的基础上加用糜蛋白酶、肤康霜和康复新混合液治疗, 观察两组患者治疗褥疮的临床效果;结果 观察组和对照组治疗总有效率分别为95.6%、79.5%, 观察组临床治疗效果显著优于对照组, 具有统计学意义 (P<0.05) , 观察组褥疮治愈时间平均16.7±2.1d, 对照组褥疮治愈时间平均25.6±4.7d, 差异具有统计学意义 (P<0.05) , 两组患者均未出现严重药物不良反应;结论 糜蛋白酶、肤康霜和康复新混合液治疗长期卧床并发褥疮临床疗效显著, 安全性高, 值得临床推广应用。

关键词：糜蛋白酶,肤康霜,康复新,褥疮,疗效

参考文献

[1]郭建林, 陆群峰, 朱晓萍.糜蛋白酶、肤康霜和康复新混合液治疗褥疮的疗效观察[J].全科护理, 2005, 4 (6) :432-433.

[2]陈锋, 叶丹, 豆哲敏.康复新液联合复合溶菌酶杀菌纱布治疗体表慢性溃疡创面疗效观察[J].现代中西医结合杂志, 2011, 20 (24) :3264-3265.

[3]徐兰平.百多邦和肤康霜联合创面换药的护理和疗效观察[J].中华临床医学研究杂志, 2006, 12 (4) :484-485.

[4]王翠芬, 潘彩莲, 江连湖.康复新液配合红外线治疗褥疮76例疗效观察[J].当代医学, 2012, 18 (14) :20-21.

[5]聂陆娥, 胡卿香, 程丽红等.糜蛋白酶治疗褥疮的疗效评价[J]中华国际护理杂志, 2004, 3 (12) :882-883.

血清胃蛋白酶原:早期发现胃癌 第11篇

据报道，测定血清胃蛋白酶原进行胃癌早期诊断的普查以及胃癌的预防干预计划，已在日本、芬兰、挪威等国家实行。日本利用胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ在大面积的人群中进行普查，使胃癌的早诊率提高到了90％。

以往的研究表明，血清胃蛋白酶原水平可反映不同部位胃黏膜的形态和功能，联合测定胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ比值(PGR)被视为胃黏膜的“血清学活检”。

在正常人血清中的胃蛋白酶原Ⅰ浓度是胃蛋白酶原Ⅱ的6倍。胃蛋白酶原Ⅰ正常参考值范围为67～200 微克/升。

胃蛋白酶原Ⅰ<67微克/升：提示胃体、胃底黏膜萎缩或受损，可能与浅表性胃炎、萎缩性胃炎等疾病有关；

胃蛋白酶原Ⅰ>200微克/升：提示可能与饮食、药物的刺激或幽门螺旋杆菌感染以及胃溃疡、十二指肠溃疡有关。

胃蛋白酶原Ⅱ正常参考值范围<15 微克/升。

胃蛋白酶原Ⅱ>15微克/升：提示可能与幽门螺旋杆菌感染、胃溃疡、十二指肠溃疡以及胃窦部的疾病有关；

胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ比值（PGR）正常参考值范围为>7.5。

PGR<7.5提示可能与浅表性胃炎、萎缩性胃炎、幽门螺旋杆菌感染、胃溃疡、十二指肠溃疡以及胃窦部的疾病有关。

众多流行病学证据表明，胃癌患者胃蛋白酶原Ⅰ较健康者明显下降，胃蛋白酶原Ⅱ因为分布较广、变化不大。而胃癌患者PGR明显降低，是胃癌的高危信号。可见，血清胃蛋白酶原的测定是普查中筛选胃癌的良好指标。

临床上，若血清胃蛋白酶原呈现“阳性”结果，需再进一步进行多种肿瘤标志物的联合检测。这样常可在临床症状出现之前数月鉴别出复发和转移。胃蛋白酶原阳性者应每年检查一次胃镜，并进行密切随访，以早期发现变化，早期在内镜下进行治疗，以达到根治的目的。

血清胃蛋白酶原检测方法简而易行，目前采用放射免疫分析法和酶联免疫法，受检者须清晨空腹采集静脉血2～5ml。

检验过程需要2～3小时，检验当天即可发出检验报告单。

糜蛋白酶 第12篇

1 资料与方法

1.1 一般资料

选用2011年1月-2014年1月在本科住院治疗的40例AECOPD患者。诊断均符合2007年中华医学会呼吸学分会慢性阻塞性肺疾病学组制定的COPD诊治指南[4]。排除支气管扩张、支气管哮喘、肺癌等慢性肺部疾患。按随机数字表法随机将患者分为治疗组和对照组。治疗组20例, 男12例, 女8例, 年龄50~84岁, 平均 (64.8±6.5) 岁。对照组20例, 男11例, 女9例, 年龄49~82岁, 平均 (63.9±6.3) 岁。两组患者的年龄、性别、病情严重程度比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 治疗方法

两组患者均给予劝导戒烟、缩唇呼吸锻炼、低流量吸氧 (2 L/min) 、抗感染、解痉平喘、止咳化痰、维持水电解质平衡等综合治疗。治疗组在上述治疗基础上加用吸入用布地奈德混悬液1 mg (商品名:普米克令舒, 瑞典阿斯利康公司生产) 、吸入用异丙托溴铵溶液250μg (商品名:爱全乐, 德国勃林格殷格翰公司生产) 、α糜蛋白酶2.5 mg (上海第一生化药业有限公司生产) 、NS 2 m L加入雾化器中, 以氧气驱动雾化吸入, 氧流量8 L/min, 每次10 min, 2次/d, 疗程7 d。指导患者雾化吸入时慢深呼吸, 雾化结束后用清水漱口。

1.3 观察指标

观察患者咳嗽、痰量和痰的性状、发热、气喘、肺部啰音等临床情况, 住院时间及Sp O2水平。治疗前后做血常规、CRP、胸部X线等检查。观察治疗期间及治疗后患者有何不良反应。

1.4 疗效判断标准

显效:气喘缓解, 咳嗽明显减轻, 痰量明显减少, 肺部哮鸣音消失。有效:气喘好转, 咳嗽减轻, 痰量减少, 肺部哮鸣音减少。无效:咳嗽、气喘、肺部哮鸣音等无改善或加重, 痰量增多或转为黄脓痰[5]。总有效=显效+有效。

1.5 统计学处理

使用SPSS 13.0统计软件进行分析处理, 其中计数资料的比较采用X2检验, 计量资料以 (±s) 表示, 比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床疗效比较

治疗组总有效率90%, 对照组总有效率65%, 两组比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。

例 (%)

2.2 两组临床观察指标的比较

治疗组患者在喘憋消失时间、肺部哮鸣音消失时间、肺部X线改善时间、住院时间等方面, 均短于对照组, 两组比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表2。

d

2.3 炎症指标及Sp O2比较

两组患者治疗后CRP、WBC水平较治疗前均降低, 而Sp O2水平升高, 各组患者治疗前后比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。治疗后CRP、WBC、Sp O2水平改善情况优于对照组, 比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表3。

*与本组治疗前比较, P<0.05;△与对照组治疗后比较, P<0.05

2.4 不良反应

治疗组有2例出现口干、咽部不适感, 但症状轻微, 检查咽部无真菌感染, 无需停药, 治疗后血糖、肝功能、肾功能无异常表现。

3 讨论

慢性阻塞性肺疾病的确切病因还不十分明确。目前认为是肺脏对香烟等有害气体或颗粒的异常炎症反应所致[6]。气道多种炎性细胞浸润, 黏膜充血水肿, 纤毛倒伏、脱失, 杯状细胞和腺体细胞肥大增生、分泌旺盛[7], 支气管净化功能减弱, 使气道狭窄, 阻力增加。患者常因呼吸道细菌或病毒感染而引起急性加重 (AECOPD) , 使支气管痉挛, 气道分泌物增多, 痰液稠厚, 甚至痰栓形成, 气道阻力进一步加重, 通气功能下降, 病情恶化[8,9]。因而迅速有效的解除支气管痉挛, 清理畅通气道, 改善通气是治疗的关键[10]。

布地奈德是一种不含卤素的肾上腺糖皮质激素类药物, 对多种炎症细胞和炎症因子介导的炎症反应有广泛的抑制作用[11]。局部抗炎能力约为皮质醇的1000倍。能减轻呼吸道高反应性, 舒张痉挛的支气管, 减少腺体分泌, 修复损伤的上皮细胞, 恢复纤毛功能。吸入布地奈德很少会经吞咽吸收进入血循环, 但90%被肝脏清除, 减少了副作用的发生[12]。

异丙托溴铵是一种具有抗胆碱能作用的四价铵化合物, 通过抑制乙酰胆碱与支气管平滑肌上的毒蕈碱受体结合而舒张支气管, 减少黏膜腺体分泌。起效较慢, 但治疗持续时间较长, 长期应用能延缓肺功能下降速率。反复使用不易产生药物耐药性, 副作用小, 非常适合有吸烟史的老年人使用[13]。

α糜蛋白酶是一种蛋白分解酶, 具有分解肽键的功能。能促进脓性分泌物、坏死组织的消化清除, 使稠厚的粘痰分解稀化, 易于排出体外[14]。

氧气雾化吸入能将药液吹散成均匀的微粒滴, 直径<5μm, 使药液能随气流直达深部细支气管、肺泡附近的局部病灶, 迅速发挥作用[15]。

联合布地奈德、异丙托溴铵、α糜蛋白酶氧气雾化吸入, 药物微粒滴随气流进入气管、支气管、肺泡, 减轻局部炎症反应, 消除黏膜充血水肿, 解除气道痉挛, 减少黏膜腺体分泌, 改善纤毛功能, 同时使稠厚的分泌物或坏死组织分解, 便于清除, 畅通净化气道改善呼吸功能, 促进炎症病灶吸收[16,17]。本研究显示治疗组在住院时间、肺部X线改善时间、喘憋消失时间和哮鸣音消失时间等方面均短于对照组, 临床疗效优于对照组, 两组比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。

综上所述, 氧气雾化吸入布地奈德、异丙托溴铵、α糜蛋白酶, 局部药物浓度高, 利用率好起效快, 副作用少, 减少口服或静脉使用激素造成的胃肠道及其他不良反应。且设备投入少, 操作方便, 非常适合基层医院推广使用。

摘要：目的:研究联合布地奈德、异丙托溴铵、α糜蛋白酶氧气雾化吸入治疗急性加重的慢性阻塞性肺疾病 (AECOPD) 的疗效。方法:40例AECOPD患者随机数字表法分为治疗组和对照组两组, 每组20例。对照组常规给予抗感染、止咳化痰、解痉平喘、吸氧等治疗, 治疗组在常规治疗基础上联合布地奈德、异丙托溴铵、α糜蛋白酶氧气雾化吸入治疗, 2次/d, 共7 d, 对比观察两组患者临床疗效, 喘憋消失时间、肺部哮鸣音消失时间、肺部X线改善时间、住院时间及治疗前后C反应蛋白 (CRP) 、白细胞计数 (WBC) 和脉搏血氧饱和度 (Sp O2) 水平和不良反应。结果:治疗组总有效率90%, 对照组总有效率65%, 两组比较有差异有统计学意义 (P<0.05) ;治疗组患者在喘憋消失时间、肺部哮鸣音消失时间、肺部X线改善时间、住院时间等方面, 均短于对照组, 两组比较差异有统计学意义 (P<0.05) ;两组患者治疗后CRP、WBC水平较治疗前均降低, 而Sp O2水平升高, 各组患者治疗前后的差异均有统计学意义 (P<0.05) , 且治疗后CRP、WBC、Sp O2水平比较, 治疗组较对照组改变更为明显。结论:联合布地奈德、异丙托溴铵、α糜蛋白酶氧气雾化吸入治疗AECOPD临床疗效好、安全可靠、副作用少。