单细胞分析范文

单细胞分析范文（精选11篇）

单细胞分析 第1篇

1980年发展起来的毛细管电泳分离的方法已成功应用于单细胞内多组分检测,但是毛细管的一维结构使单细胞进样与溶膜操作较为复杂[2,3]。

1990年微流控芯片开始兴起,由瑞士科学家Manz和Widmer[4]首次提出。微流控芯片,又称微全分析系统或芯片实验室,是把化学和生物等领域中所涉及的采样、样品预处理、反应、分离、检测及细胞培养、分选、裂解等基本操作单元集成一块几平方厘米的芯片上,微通道形成网络,可控流体贯穿整个系统,用以取代常规化学或生物实验室的各种功能的一种技术平台[5]。微流控芯片具有样品和试剂用量少、分析速度快、通道尺寸与细胞直径相当等优点,目前在单细胞研究方面[6,7,8]备受关注。

血细胞分析仪简介 第2篇

血细胞分析仪又叫血液细胞分析仪、血球仪、血球计数仪等，是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一，随着近几年计算机技术的日新月异的发展，血细胞分析的技术也从三分群转向五分群，从二维空间进而转向三维空间，而且我们也注意到现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了和当今非常先进的流式细胞仪相同的技术，如散射光检测技术、鞘流技术、激光技术等等。

一、发展历史

20世纪初期，莫尔德兰采用光电器进行血细胞计数；1947年拉格克兰茨采用高效光电倍增管加上光电扫描技术及暗视野照明法进行学习吧检测分析，克服了莫尔德兰光电法中存在的问题，可试用于临床；1958年，库尔特在前人的基础上，采用电阻率变化与电子技术相结合的方法，研制出性能比较稳定、操作比较方便的血液分析仪，称为库尔特电子血球计数器。20世纪60年代，以库尔特原理为基础的各种类型血液分析仪应运而生并广泛应用，逐步替代了传统的显微镜常规操作。70年代，在库尔特原理上开发出了以激光鞘流技术为基础的各类血液分析仪。80年代初推出了双通道仪器，除可直接计数血小板外，还能得到淋巴细胞总数和百分数等14个参数。90年代以来，有的学者根据幼稚细胞和成熟细胞膜的结构差异进行细胞分类，特别是对幼稚细胞的检测，为血细胞计数仪开创了新的领域。基本原理

根据血细胞信号的获取方式不同，其原理可以归纳为5种：光电式、电容式、电阻式、离心式和激光散射式。

二、检测方法

1.体积、电导、激光散射法（VCS）

这是Beckman－Coulter公司生产的血细胞分析仪所采用的经典分析方法，它集三种物理学检测技术于一体，在细胞处于自然原始的状态下对其进行多参数分析。该方法也称为体积、电导、激光散射血细胞分析法。此技术采用在标本中首先加入红细胞溶血剂溶解掉红细胞，然后加入稳定剂来中和红细胞溶解剂的作用，使白细胞表面、胞浆和细胞体积保持稳定不变。然后应用鞘流技术将细胞推进到流动细胞计数池（Flowcell）中，接受仪器VCS三种技术的检测。

V代表体积（Volume）测量法，是采用经典的库尔特专利技术，用低频电流准确分析细胞体积。体积是区分白细胞亚群的一个重要的参数，它可有效区分体积大小差异显著的淋巴细胞和单核细胞。

C代表高频电导性（Conductivity），采用高频电磁探针原理测量细胞内部结构间的差异，也是该公司的专利技术。细胞膜对高频电流具有传导性，当电流通过细胞时，细胞核的化学组份可使电流的传导性产生变化，其变化量可以反映出细胞内含物的信息。该参数可用来区分体积相近而内部性质不同的细胞群体，如淋巴细胞和嗜碱性粒细胞，由于它们的细胞核特性不同而在传导性参数上有所区别。

S代表激光散射（Scatter）测量技术，采用氦氖激光源发出的单色激光扫描每个细胞，收集细胞在10°～70°角度内出现的散射光(MALS）信号。该激光束可穿透细胞，探测细胞内核分叶状况和胞浆中的颗粒情况，提供有关细胞颗粒性的信息，可以区分出颗粒特性不同的细胞群体。例如细胞内颗粒粗的要比颗粒细的散射光更强，因此可以用于区分粒细胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜碱性三种细胞。

2.电阻抗、射频与细胞化学联合检测技术

典型机型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等。这类仪器共有四个不同的检测系统，将标本用特殊细胞染色技术处理后再应用RF和DC技术对白细胞进行分类和计数。其共采用如下四个检测系统：

嗜酸性粒细胞检测系统：该系统是利用电阻抗方式计数。血液经分血器分血后部分与嗜酸性粒细胞计数溶血剂混合，特异的溶血剂使嗜酸性粒细胞以外的所有细胞均溶解或萎缩，这种含完整嗜酸性粒细胞的液体经阻抗电路计数。

嗜碱性粒细胞系统：该系统检测原理与嗜酸性粒细胞相同，不同的是其溶血剂只能保留血液中的嗜碱性粒细胞。

淋巴、单核、粒细胞（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞）检测系统：该系统采用电阻抗与射频联合检测方式，使用作用较温和的溶血剂，对核及细胞型态影响不大。在内外电极上存在直流和高频两个发射器。由于直流电不能达到细胞质及核质，而射频电能透入胞内测量核大小和颗粒多少，因此这两种不同的脉冲信号的个数及高低综合反映了细胞数量、大小（DC）和核及颗粒密度（RF）。由于淋巴细胞、单核细胞及粒细胞的大小、细胞质含量、核形态与密度均有较大差异，故可通过扫描得出其比例。幼稚细胞检测系统：该系统也是利用电阻抗方式计数。其原理是由于幼稚细胞上的脂质较成熟细胞少，在细胞悬液中加入硫化氨基酸后，由于脂质占位不同，结合在幼稚细胞上的硫化氨基酸较成熟细胞多，且对溶血剂有抵抗作用，故能保持幼稚细胞的形态完整而溶解成熟细胞，即可通过阻抗法检测。3.激光散射和细胞化学染色技术

在白细胞分类上，仪器采用两个通道进行，一个为过氧化酶检测通道，另一个为嗜碱细胞检测通道。

过氧化酶反应（peroxidase，POX）是血涂片染色的一个常用细胞化学染色方法，用于鉴别原始细胞与成熟的粒细胞，鉴别粒细胞与非粒细胞。染色后的细胞内无蓝黑色颗粒出现为阴性反应，出现细小颗粒或稀疏样分布的黑色颗粒为弱阳性反应，出现黑色粗大而密集的颗粒为强阳性反应。过氧化物酶主要存在于粒细胞系和单核细胞系中，各类白细胞对过氧化物酶的反应是这样的：早期的原始粒细胞为阴性，早幼粒以后的各阶段都含有过氧化物酶，并随着细胞的成熟过氧化酶含量逐渐增强，中性分叶核粒细胞会出现强阳性反应，嗜酸性粒细胞具有最强的过氧化物酶反应，嗜碱粒细胞不含此酶呈阴性反应。在单核细胞系统，除早期原始阶段外，幼稚单核和单核细胞会出现较弱的过氧化物酶反应。淋巴细胞、幼稚红细胞、巨核细胞等都为过氧化物酶阴性反应。过氧化酶检测通道就是根据这个原理设计的，它检测每一个通过流动计数池中的白细胞，经过激光照射所产生的过氧化酶散射光吸收率，来当然试剂和辅助试剂均进行了改良。1）过氧化酶最强阳性的嗜酸性粒细胞； 2）过氧化酶强阳性的嗜中性分叶核粒细胞； 3）体积较大、过氧化酶弱阳性的单核细胞； 4）体积较小、过氧化物酶阴性的淋巴细胞；

5）体积大于淋巴细胞且过氧化物酶阴性的未染色大细胞，此类细胞增加提示幼稚或原始的各类细胞可能出现。

在嗜碱细胞通道中采用的检测原理是：专用的嗜碱细胞试剂将除了嗜碱细胞以外的白细胞除去细胞膜，使其裸核化并体积变小，仅将嗜碱性粒细胞保持原有状态，体积明显大于其他类的白细胞。4.多角度偏振光激光散射技术

美国雅培公司（ABBOTT）推出的血细胞分析仪，在白细胞分类中采用独特的多角度偏振光散射（MAPSS）技术，其所生产的血细胞计数仪从CELL-DYN 3000，3200，3500，3700，4000，以及Sapphire（蓝宝石），在白细胞分类上均采用了MAPSS技术。该技术基本原理是细胞在激光束的照射下，在多个角度都产生散射光，仪器在四个角度的四个检测器将接收到的相应的散射光信号，然后经过微处理器分析处理，将各类细胞安置在散点图上的相应位置，并计算出白细胞分类结果。

多角度偏振光散射白细胞分类技术（Multi—Angle Polatised Scatter Separation of white cell，MAPSS）其原理是一定体积的全血标本用鞘流液按适当比例稀释。其白细胞内部结构近似于自然状态，因嗜碱性粒细胞颗粒具有吸湿的特性，所以嗜碱性粒细胞的结构有轻微改变。红细胞内部的渗透压高于鞘液渗透压而发生改变，红细胞内的血红蛋白从细胞内游离出来，而鞘液内的水分进入红细胞中，细胞膜的结构仍然完整，但此时的红细胞折光指数与鞘液的相同，故红细胞不干扰白细胞检测。在鞘流系统的作用下，样本被集中为一个直径30μm的小股液流，该液流将稀释的血细胞单个排列，然后通过激光束，激光照射于细胞上，在各个方向都有其散射光出现。

1）0°为前向角散射光，可粗略地测定细胞大小；

2）10°为狭角散射光，可测细胞结构及其复杂性的相对特征； 3）90°垂直光散射，主要对细胞内部颗粒和细胞成分进行测量。4）90°为消偏振光散射，基于颗粒可以将垂直角度的偏振激光消偏振的特性，将嗜酸细胞从中性粒细胞和其它细胞中分离出来。

5）这四个角度同时对单个白细胞进行测量和分析后，即可将白细胞划分为嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞5种。ABBOTT的五分类法定量很有意思，不用传统的体积定量，而是采用数量定量，每次计数时完成10000个细胞测定即停止。

三、分类结构 1.分类

⒈）按自动化程度分：半自动血细胞分析仪、全自动血细胞分析仪和血细胞分析工作站、血细胞分析流水线；

⒉）按检测原理分：自动化血液细胞分析仪按其工作原理主要可分为电阻型、激光型和运用多项高新技术的综合运用型(应用流式细胞术，细胞化学染色，特殊细跑质去除法等)。电阻型血液分析仪

血液按一定比例稀释后经负压吸引通过仪器的一个微孔小管，由于血细胞与稀释液相比是相对不良导体，当每个血细跑通过微孔时均挤代等体积的稀释液在电路上形成一短暂的电阻而导致电压的变化，产生相应的脉冲信号并经放大、甄别后被累加记录。脉冲数被转换为细胞数量；脉冲的高低与细胞体积大小成正比，经计算机处理得出各种血细胞的数量、血细胞体积大小的平均数、变异系数、占全血体积的百分比和体积大小分布直方图等。一般仪器分为红细胞/血小板和白细胞/血红蛋白两个通道，白细胞/血红蛋白通道需加入溶血剂使红细胞破坏后测定血红蛋白、白细胞数量和粗略分类(按溶血后白细胞体积大小分出两类或三类白细胞)。

由于电阻型血液细胞分析仪操作简便、快速、分析参数较多、价格便宜，目前已在国内普遍使用。激光型血液分析仪

血液按一定比例稀释后形成一个极细的液流穿过激光束，每个血细胞被激光照射后产生光散射并被光电倍增管接收。细胞的前向角散射与细胞的体积大小有关、侧向角(或高角)散射与细胞的内部结构、颗粒性质等有关，细胞数量则与细胞通过激光束时光散射的脉冲次数相同。各种检测信号被放大、甄别后经计算机处理可得到各种血细胞的数量和体积大小的平均数、变异系数、占全血体积的百分比及体积大小分布直方图等.血红蛋白测定同电阻型仪器.白细胞可分为三类细胞。

激光型比电阻型仪器稳定，不易受外电场的干扰，但激光管寿命有限。

综合型血液分析仪

此类仪器是多种先进的细胞分析技术的高度综合应用，对血细胞的分析参数更多，结果也更准确。如Coulter VCS血细胞分析仪就采用了体积分析、高频传导和激光散射等多项技术，Technicon H*3血细胞分析仪则采用了激光流式细胞分析、细胞化学染色、细胞分光光度术等多项技术。Technicon H*3的分析参数可达四十余项，对红细胞除可作一般分析外尚可对单个细胞内血红蛋白含量、浓度、细胞大小不等、高低色素性变化做出定量描述，而且可测定网织红细胞的数量、形态、体积、血红蛋白含量及浓度等.对白细胞可分出三类5种并提示幼稚细胞数量，还可对核象左移、核象右移、过氧化物酶染色强度作定量描述，而且还能分析淋巴细胞亚群等。

此类综合型仪器的性能代表了当今血液细胞分析仪的最新发展趋势，但价格昂贯，在临床常规血液学检查方面尚难普及。

⒊按仪器分类白细胞的水平分：二分群、三分群、五分群、五分群+网织红血细胞分析仪。2.基本结构

各类型血细胞分析仪结构各不同。但大都由机械系统、电学系统、血细胞检测系统、血红蛋白测定系统、计算机和键盘控制系统等，以不同的形式组成。3.机械系统

各类型的血细胞分析仪虽结构各有差异，但均有机械装置（如全自动进样针、分血器、稀释器、混匀器、定量装置等）和真空泵，以完成样品的吸取、稀释、传送、混匀，以及将样品移入各种参数的检测区。此外，机械系统还发挥清洗管道和排除废液的功能。电学系统

电路中主电源、电压元器件、控温装置、自动真空泵电子控制系统以及仪器的自动监控、故障报警和排除等。4.血细胞检测系统

国内常用的血细胞分析仪，使用的检测技术可分为电阻抗检测和光散射检测两大类。

⑴电阻抗检测技术：由信号发生器、放大器、甄别器、阈值调节器、检测计数系统和自动补偿装置组成。这类主要用在二分类或三分类仪器中。

⑵光散射检测技术：主要由激光光源、检测区域装置和检测器组成。

⑶激光源：多采用氩离子激光器，以提供单色光。

⑷监测区域装置：主要由鞘流形式的装置构成，以保证细胞混悬液在检测液流中形成单个排列的细胞流。

⑸检测器：散射光检测器系光电二极管，用以收集激光照射细胞后产生的散射光信号；荧光检测器系光电倍增管，用以接受激光照射荧光染色后细胞产生的荧光信号。这类检测技术主要应用于“五分类、五分类+网织红”的仪器中。5.血红蛋白测定系统

由光源（一般为540nm波长）、透镜、滤光片、流动比色池和光电传感器组成。6.计算机和键盘控制系统

使检测过程更加快捷、方便。

四、注意事项

为了保证使用血细胞分析仪得出的结果能够尽量反映病人的真实情况，在使用时必须注意以下几方面：

1．血样：由于静脉血受外界因素影响较小，成份比较稳定，检测结果准确度高重复性好，因此除婴儿外，建议取血者均应采用静脉血。如果采集未梢血时，注意不可局部过度挤压，避免血液中混入大量的组织液，而且易激活凝血系统产生局部凝血，导致检测结果的误差；第一滴血由于细胞成分不稳定应弃掉，用第二滴血进行检测。

2．抗凝：使用拘橼酸盐抗凝剂时间过长易结晶，细胞形态易发生变化，影响计数结果的准确性；草酸盐易使血小板产生凝集，并可使白细胞形态发生变化，影响计数结果及分类；而肝素抗凝过量易引起白细胞凝集和血小板减少；EDTA-2Na较EDTA-2K的可溶性低，血小板凝集的可能性大。因此国际血液学标准委员会(ICSH)1993年发表的文件中建议使用EDTA-2K作为血细胞分析仪的抗凝剂，用量为1.5～2.2mg/ml血。

3．采血后用塞子密闭，室温保存不超过6小时。4．稀释：稀释器、吸样管要经过校准。吸血后吸样管外的血液要完全擦干净。血液稀释后要尽快测定，否则易引起“稀释性溶血”。

5．混匀：检测前混匀很重要，如果无旋转式混匀器应颠倒混匀至少8次。

6．试剂：血细胞分析仪对试剂的要求非常严格，要求有严格的渗透压标准、稳定的导电率、高标准的纯净度以及对仪器管道和阀路无腐蚀作用。因此溶血剂、稀释液及清洗剂等最好选用原厂配套产品。

7．白细胞分类：首先必须明确，迄今为止，世界上无论多先进的血细胞分析仪，进行的白细胞分类都只是一种过筛手段，并不能完全取代人工镜检分类。要坚决纠正有些单位用了血细胞分析仪就丢掉镜检的错误思想。

单细胞分析 第3篇

关键词：血细胞分析仪,白细胞计数

血细胞分析仪是临床实验室最常用的仪器, 可进行全血细胞计数及其相关参数的检测[1]。白细胞计数、分类在血液检验工作中是非常重要的一环, 是临床血液病诊断与治疗及临床医学检验的基础工作。现对应用血细胞分析仪对白细胞计数分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2009年至2010年收治的住院患者36例, 男30例, 女6例。年龄14~66岁。其中急性髓细胞白血病22例, 急性淋巴细胞白血病5例, 慢性粒细胞白血病4例, 再障3例, 多发性骨髓瘤1例, 血小板减少性紫癜1例。

1.2 仪器方法

全自动五分类血细胞分析仪;采取患者静脉标本2m L注入真空抗凝管中, 在25℃室温下3h内检测完毕。严格按照全自动血细胞分析仪的操作程序进行。使用AC-900全自动血球分析仪严格按照操作规范, 冲洗、调零、定标。

2 结果

白细胞分类计数, 白细胞在10109/L以下者分类计数100个白细胞, 白细胞在10109/L以上者分类计数200个白细胞, 取均值与仪器检测结果进行比较。36例检测对象中30例仪器检出的占89.3%。使用血球分析仪中性粒细胞均在80%~90%之间, 很少高于90%, 而白细胞总数在20109/L以下时, 差异不明显。

3 讨论

人体外周血中的白细胞包括粒细胞、淋巴细胞和单核细胞, 根据粒细胞胞浆中所含的特殊颗粒, 将粒细胞分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞, 它们通过不同的方式和机制消灭病原体, 消除过敏原及参与免疫反应、产生抗体, 是机体抵御病原微生物等异物的主要防线。白细胞的分类计数是血液分析检查的重要内容, 其结果的准确性对病人的诊断、治疗及疗效观察具有至关重要的作用[2]。当前白细胞分类计数主要使用血细胞分析仪进行。加稀释液将血液标本稀释一定倍数后加入溶血剂, 红细胞被溶解, 有的还可使白细胞的胞浆经细胞膜渗出, 细胞脱水, 细胞膜皱缩, 紧裹在细胞核和颗粒的周围, 因此这类溶血液中自细胞体积是由胞体内有形物质的多少决定的, 与其自然体积无关。在进行白细胞体积分析时, 仪器计算机部分可以将白细胞体积从35~450n分为256个通道, 每个通道为1.64fl, 细胞根据其大小被分别放在不同的通道中, 从而得到白细胞体积分布的直方图。经过溶血剂处理后的白细胞可以根据体积大小初步确认其相应的细胞群:第一群 (35~90fl) 是小细胞区, 主要是淋巴细胞;第二群 (90~160fl) 是单个核细胞区, 也被称为中间细胞 (MID) , 包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞, 当核左移或白血病时可有各阶段幼稚细胞及白血病细胞;第三群 (160n以上) 是大细胞区, 主要是中性粒细胞 (GRAN) 。仪器根据各亚群占总体的比例计算出各亚群的百分率, 如果与该标本的白细胞总数相乘, 即得到各类细胞的绝对值。可以看出, 电阻法只是根据细胞体积的大小, 将白细胞分成几个群体。在一个群体中, 可能以某种细胞为主 (如小细胞区主要是淋巴细胞) , 但由于细胞体积间的交叉, 可能还有其他细胞的存在。

中间细胞 (MID) 是三分群血液分析仪指标, 一般包括正常时的单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞;病理时的各种原始幼稚细胞、异型淋巴细胞、浆细胞等。故中间细胞群计数异常或报警, 需特别注意进行血涂片复查。因各种仪器使用的稀释液和溶血剂白细胞膜作用不一, 故中间细胞群的确切细胞组成并不明确。如MID异常, 必须进行复检。未成熟粒细胞 (I G) 主要包括杆状核粒细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞, 但不包括原始粒细胞[3]。有助于筛检和监测白血病反应、严重或慢性感染、炎症、肿瘤、骨髓异常增生性疾病、组织坏死。血培养阳性、IG高于血培养阴性者, 其价值高于白细胞计数和中性粒细胞绝对值计数, 反映了生物学和临床相关现象, 但灵敏度尚不足以用于预测感染或菌血症。IG超过3%, 对指示败血症非常特异, 有助于微生物检测评价。造血祖细胞是反映以CD34阳性的造血祖细胞为主的参数。造血祖细胞由造血干细胞分化而来, 定量检测外周血中造血干细胞的变化, 特别适合于外周造血干细胞移植过程, 监测供体在接受药物作用后外周血中造血干细胞的变化, 便于选择采集时机。血液分析仪HPC检测与流式细胞仪检测骨髓动员后的HPC具有较好的相关性。

血细胞分析仪是以大批量多参数检测标本, 完全由仪器按事先设定的程序自动进行测试, 因此要求必须具有高素质技术人员和建立严格的室内质量控制制度才能保证实验结果的准确性和精确性。

参考文献

[1]从玉隆.当代血液学分析技术与临床[M].北京:人民卫生出版社, 1997:12.

[2]丛玉隆.现代血细胞分析技术与临床[M].北京:人民军医出版社, 2005, 9 (6) :118.

血液细胞检验质量控制效果分析论文 第4篇

4小结

在实际的临床医学中血液细胞检验的结果会受到很多因素的影响，使得血液细胞的形态会产生变化，为了得到精准的检验结果，我们必须要对血液细胞检验过程的控制加以重视，要构建有效的质量控制系统，不断的规范检验的流程。在实施血液检验的过程中，对于标本分析前实施的质量控制主要包括：定期对工作人员进行相关内容的培训，工作质量要进行严格的把关[4]。在分析过程中的质量控制主要包括：在实施检测之前，要对试剂盒的抗凝剂稀释比例认真的检查[7]，检查仪器要确保其能够正常运行[6]。分析后的质量控制包括：在检验之后，要及时的对患者的疾病情况进行分析认定[8]，在这个过程中，要应用细胞直方图，对数据进行全面的分析[9]，最终的目标就是得到准确的检验结果。

参考文献

[1]徐晓嵘.浅析临床医学中血液细胞检验的质量控制[J].现代诊断与治疗，，23(9)：1378-1379.

[2]王宏书.临床医学中血液细胞检验的质量控制[J].医学美学美容，，55(14)：133.

[3]李璐.临床医学中血液细胞检验的质量控制分析[J].中国卫生产业，2014，78(1)：125-126.

[4]刘金朋，孙院红，罗冲，等.探讨临床医学血液细胞检验的质量控制措施[J].临床医药文献电子杂志，，14(23)：4772-4773.

[5]王天震.临床医学中血液细胞检验的质量控制分析[J].中国社区医师，2015，89(13)：115，117.

[6]宋庆欣.临床医学中血液细胞检验的质量控制分析[J].医学理论与实践，2014，8(23)：3196，3213.

[7]张瑜.临床医学中血液细胞检验的质量控制分析[J].医学信息，2014，41(4)：398.

[8]张娅娣.浅谈临床医学中血液细胞检验的质量控制[J].世界最新医学信息文摘，，16(76)：130.

嗜铬细胞瘤CT表现分析 第5篇

关键词：嗜铬细胞瘤；肾上腺；CT【中图分类号】R445.3【文献标识码】B【文章编号】1672-8602（2013）12-0105-01

嗜铬细胞瘤引起血内儿荼酚胺升高，嗜铬细胞瘤大部分发源于肾上腺髓质的嗜铬细胞，也可能来自肾上腺以外的交感神经节链或主动脉旁的嗜铬体。CT诊断可发现肾上腺肿块影，可鉴别肾上腺囊肿或髓性脂肪瘤，还可明确肿瘤与周围脏器的关系[1]。选取临床2012年1月～2013年4月收治的30例嗜铬细胞瘤患者CT诊断临床表现分析如下。

1临床资料

1.1一般资料： 本组30患者中，男17例，女13例；年龄22～70岁；右侧肾上腺15例，左侧13例，两侧2例。高血压13例，皮质醇增多症5例，周期性软瘫3例，外伤病史2例，体检中发现6例。

1.2方法： 检查前空腹12h，扫描前30min口服1%～2%泛影葡胺200～400ml，扫描前再服200ml，以充盈胃、十二指肠和小肠。患者取仰卧位，以剑突为标志，先扫定位像，以确定扫描范围。一般扫描范围定在第11胸椎至第1～2腰椎之间，包括两侧肾上极，最好至肾门。扫描层厚、层距常规为5mm，疑有嗜铬细胞瘤，而CT检查显示肾上腺正常者，可根据需要加扫胸、腹或盆腔，以发现异位嗜铬细胞瘤。

2结果

平扫常表现一侧肾上腺边缘清晰、密度均匀，圆形或类圆形的肿块，偶为双侧性肿块。CT值20～70HU，部分见钙化，瘤体较大，直径2～12cm，因中心常见坏死出血，有时像囊肿样改变；增强扫描肿瘤早期强化不明显，门脉期瘤体显著强化坏而、囊蛮区无强化。良性24例，恶性6例；肿瘤均位于肾上腺，单发28例，双侧2例。单侧或双侧肾上腺肿大，小者直径1cm，大者可达数厘米，多呈圆形、椭圆形，密度减低，如有坏死则局部密度减低。如发现淋巴结转移，或肿瘤外侵，可认为恶性。增强肿瘤因血管丰富，CECT有显著增强，与肾同密度增强，随时间增长，继续增强，然后逐渐降低。坏死部不增强，增强后瘤影更加清晰。

3讨论

嗜铬细胞瘤主要发生在肾上腺髓质，其次为交感神经系统和体内含有嗜铬细胞的任何部位。肿瘤细胞分泌大量肾上腺素和少量去甲肾上腺素，引起血内儿茶酚胺升高，临床出现高血压和代谢增高。临床上多见于20～40岁。绝大多数为单侧发病，右侧较左侧多，双侧者占10%。典型临床表现为阵发性高血压、头痛、心悸、面色苍白、发作数分钟后症状缓解[2]。有的患者表现为波动性或持续性高血压。嗜铬细胞瘤瘤体一般较大，直径多为3～5cm，常为球形，多呈分叶状。单侧较多见，10%为双侧；良性多见，10%为恶性。瘤体包膜多完整光滑，常有出血和囊性变。

CT表现肾上腺区见圆形或卵圆形软组织肿块，大小不等，直径多为3～5cm，质地较均匀或不均匀。CT值30～60Hu不等，较大肿瘤常有出血、坏死和囊性变，部分病例有散在不规则钙化，增强扫描仅见轻度强化。多发嗜铬细胞瘤可位于同侧或双侧，可发生在肾上腺或肾上腺外，多个瘤体可距离较近或甚至表现为一个大肿瘤，边缘有小结节或两个邻近的瘤体如葫芦状。多个瘤体又可较分散。这是诊断时应引起注意的。肾上腺外嗜铬细胞瘤绝大部分发生在腹部，脊椎旁沿腹主动脉及其分支的交感神经链，例如膈肌夹角内，肠系膜下动脉开口附近的嗜铬体，后腹膜，肾门附近，甚至可发生在肝的左叶，下腔静脉前方。膀胱嗜铬细胞瘤国内外均有报道，位于膀胱壁，突入膀胱腔内，呈软组织密度肿块，轮廓光滑，可导致无痛性血尿或排尿时，阵发性高血压发作等症状。

恶性嗜铬细胞瘤：CT表现瘤体大，不规则分叶状，密度不均匀。如发现肿瘤侵及邻近器官或包埋附近愎主动脉、下腔静脉、肾静脉等，以及肝转移，附近淋巴结转移等，就可确定为恶性[3]。值得注意的是，有的良性肾上腺嗜铬细胞瘤直径可达8～10厘米，因而虽然巨大者顺向于恶性，但仅靠大小并不能鉴别良恶性。

发现双侧肾上腺嗜铬细胞瘤时，需除外多发性内分泌腺肿瘤病Ⅱ、Ⅲ型、家族性嗜铬细胞瘤、神经纤维瘤病和von Hippellandau病，因这些病变易发生双侧肾上腺嗜铬细胞瘤，为此应进行相关部位和家族成员的相关部位影像学检查。恶性嗜铬细胞瘤本身的影像学检查并无明显特殊表现，仅有当发现转移征象时，才可确定为恶性，此外恶性嗜铬细胞瘤易见于肾上腺以外部位。

参考文献

[1]李国珍. 临床CT诊断学. 北京：中国科学技术出版社，1994.503～531.

[2]韦嘉瑚，施发表，陈海云，等.104例嗜铬细胞瘤的CT及其他影像学诊断的评价.中华放射学杂志，1993，27（1）：11.

单细胞分析 第6篇

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

日本Sysmex公司XE- 2100全自动血液分析仪及其配套试剂, 美国BD公司EDTA- K2抗凝管, 台湾贝索公司瑞- 吉氏染液, 日本奥林巴斯公司CH30光学显微镜。

1.2 标本来源

我院2010年3月至2010年7月间的60例住院病人, 血常规检测使用“CBC+DIFF”模式, 仪器有NRBC 提示报警。

1.3 方法

对有NRBC提示报警的标本制作血涂片, 经瑞- 吉氏染色后人工镜检, 并记录血片中观察到的异型淋巴细胞、原始细胞、小淋巴细胞等特殊细胞形态。同时使用Sysmex XE- 2100 全自动血细胞分析仪的NRBC绝对计数模式, 对标本做NRBC绝对计数。

1.4 质控

质控品为厂商配套使用的Sysmex e- CHECK (XE) , 每日两个水平的质控品测定。

1.5 统计学处理

按Q- Flags值的不同对标本进行分组, 并对Q- Flags值报警与人工镜检的符合率进行统计分析。

2 结果

根据有核红细胞Q- Flags判断值的不同, 将标本分为2组, 其中100 Q- Flags值<200为第一组, 200～300为第二组。血涂片人工镜检检出NRBC为阳性结果, 未检出NRBC为阴性结果。仪器阳性报警与血涂片镜检符合率见表1。血涂片镜检与仪器NRBC绝对计数结果的比较见表2。血涂片镜检的真阳性率为55.3%, 假阳性率为0。

3 讨论

Sysmex XE- 2100血液分析仪测定NRBC是利用荧光染料对细胞核进行染色, 通过测定荧光强度和侧向散射光强度, 将NRBC与白细胞、红细胞和血小板区别开, 并可通过NRBC通道对NRBC进行绝对计数[2]。该仪器对NRBC检测的性能较好[3], 已普遍应用于临床检测工作中。

本组60例仪器NRBC提示报警的标本中, 血涂片人工镜检只有21例查见NRBC。依据标本NRBC的Q- Flags值不同进行分组分析, 我们发现在100Q- Flags值<200的组别中, 血涂片人工镜检的阳性符合率为23%, 而Q- Flags值200～300的组别中, 血涂片人工镜检的阳性符合率为65%。我们在对血涂片镜检时发现其中10例有小淋巴细胞, 4例有异型淋巴细胞, 7例有巨大血小板, 1例有血小板黏附现象。分析原因可能是外周血出现的NRBC主要是晚幼红细胞, 其形态和淋巴细胞一样简单, 但核酸含量少于淋巴细胞, 荧光强度弱于淋巴细胞, 因此晚幼红细胞在DIFF散点图上处于淋巴细胞的正下方, 易与小淋巴细胞在DIFF散点图的位置相重叠。巨大血小板和血小板的黏附现象, 会使得血小板内残留的RNA更加集中, 因此聚集血小板的荧光强度比NRBC还高, 但体积一般略小于皱缩的NRBC。因此这些细胞群在DIFF散点图上出现的位置易与NRBC的区域重叠, 血液分析仪很难辨别。该现象与束国防、赵燕等[4,5]的研究结果一致。由于该仪器的NRBC报警信息来源于DIFF散点图, 当DIFF散点图淋巴细胞区域下方出现较多散点时, 仪器会有NRBC的提示报警, 出现仪器的假阳性报警。由于Q- Flags值的高低表示报警信息的严重程度, 因此在 Q- Flags值200～300组中的标本, 其NRBC存在的可能性要高于100Q- Flags值<200组, 血涂片人工镜检的阳性率也较高。将60例NRBC提示报警的标本通过NRBC通道进行NRBC绝对计数, 100Q- Flags值<200组的真阳性率为49%, 而Q- Flags值200～300组的真阳性率为100%, 该结果支持上述分析。

我们进一步将人工镜检结果与绝对计数结果比较结果显示, 血涂片镜检的真阳性率为55.3%, 分析原因为在NRBC绝对计数中, 有17例标本的结果很低 (<0.4109 L-1) , 人工镜检时会因NRBC数的过少、镜检的总细胞数不够多等原因而未检出, 导致假阴性结果的出现。血涂片镜检的假阳性率为0, 也同时证明作为传统的金标准方法, 镜检仍有其优点。

据文献报道心肺疾病患者 (如心功能、呼吸功能衰竭) 、菌血症、败血症、烧伤、胶原病、尿毒症、糖尿病性酸中毒、炎性肠病、心肌梗死、肝脏疾病和肾上腺增生等疾病, 造血因子等细胞因子治疗及新生儿、妊娠等均可在外周血中出现NRBC[6]。因此外周血中NRBC作为多种疾病过程中可出现的一种病理状态, 计数NRBC 有较为广泛的临床意义。由于血细胞分析仪在CBC通道计数白细胞时将NRBC包括在内, 当标本中出现NRBC时, 可影响白细胞计数的结果, 使白细胞数呈假性升高。我们在实际工作中曾遇到1例溶血性贫血患者的标本, 其外周血含有大量的NRBC, 外周血细胞计数NRBC高达9.6109 L-1, 其与白细胞总数之比达到0.8∶1。此时如不将白细胞总数进行校正, 其结果将直接影响临床诊疗工作。因此在日常血常规的检测工作中, 必须严格执行血细胞计数的复检规则[7,8,9], 同时对每份标本的散点图和直方图也应重视, 认真判读仪器的报警提示, 才能保证检测数据的真实可靠。

摘要：目的:评价Sysmex XE-2100血细胞分析仪有核红细胞 (NRBC) 报警提示的可靠性, 探讨其临床应用价值以及影响因素。方法:将NRBC提示报警的60份标本进行血涂片染色人工镜检, 同时检测每份标本NRBC的绝对值。结果:100≤NRBC Q-Flags值<200组中血涂片镜检符合率为23%;Q-Flags值200～300组中血涂片镜检符合率为65%。结论:NRBC提示报警信息存在干扰因素, 必须严格按照血细胞复检规则对标本进行复检。

关键词：有核红细胞,Q-Flags值,人工镜检

参考文献

[1]叶应妩, 王毓三, 申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社, 2006:128.

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[3]杜海珍, 束国防, 吴岚岚, 等.XE-2100血液分析仪测定有核红细胞的评估[J].现代医学, 2008, 36 (2) :112-114.

[4]束国防, 高茂馗, 芦慧霞.XE-2100血液分析仪对异常细胞报警的评估[J].东南大学学报:医学版, 2005, 24 (2) :98-100.

[5]赵燕, 蔡朝阳, 王雪迎, 等.XE-2100全自动血细胞分析仪计数有核红细胞的准确性评价[J].临床输血与检验, 2010, 12 (3) :221-224.

[6]WANG F S, ITOSE Y, TSUJI T, et al.Development andclinical application of nucleated red blood cell counting andstaging on the automated haematology analyzer XE-2100[J].Clin Lab Haem, 2003, 25 (1) :17-23.

[7]中华检验医学杂志编辑委员会.全国血液学复检专家小组工作会议纪要暨血细胞自动计数复检规则释义[J].中华检验医学杂志, 2007, 30:380-382.

[8]XE-2100血细胞分析复检标准制定协作组.Sysmex XE-2100自动血细胞分析和白细胞分类的复检规则探讨[J].中华检验医学杂志, 2008, 31 (7) :752-757.

单细胞分析 第7篇

关键词：急性髓细胞白血病,流式细胞术,免疫分型

FAB形态学分类主观性、急性白血病的多态性和异质性是导致急性白血病诊断符合率低的主要原因[1], 流式细胞术 (FCM) 采用多色单抗同时标记, 可以全面、特异及准确的检测出细胞抗原分布情况, 更准确、客观的显示白血病免疫分型的结果, 从而降低传统FAB形态学的误诊率, 对白血病诊断治疗及预后有重要意义。本研究就流式细胞术及急性髓细胞白血病免疫分型特点进行探讨, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2011年1-12月收治的急性髓细胞白血病患者56例, 其中, 男36例, 女20例, 年龄2～73岁, 平均40.5岁;均经骨髓形态学、细胞组织化学染色、免疫分型而确诊;FAB分型急性粒细胞白血病未分化型 (M1) 3例、急性粒细胞白血病部分分化型M2a型 (M2a) 17例、急性粒细胞白血病部分分化型M2b型 (M2b) 14例、急性早幼粒细胞白血病 (M3) 15例、急性粒单核细胞白血病 (M4) 6例、急性单核细胞白血病 (M5) 1例。

1.2 仪器与试剂

仪器为BECKMAN FC 500型流式细胞仪 (Beckman-Coulter公司, 美国) , 荧光标记单克隆抗体、破膜剂和溶血剂均为美国Beckman-Coulter公司生产, 单克隆抗体组合见表1。

1.3 方法

1.3.1 全血直接免疫荧光标记

分别向各试管中加入EDTA-K抗凝骨髓或血液2ml, 并分别加入相应抗体, 每管均首先加CD45[2], 室温避光15min后, 加溶血剂500μl, 待红细胞完全溶解后, PBS洗涤2次, 离心5min后 (转速1000r/min) , 去上清液, 加入PBS500μl, 充分混匀液体, 上机检测。

1.3.2 MP0和CD79a胞浆抗原检测

将CD45-PC5与细胞悬液混匀室温孵育15min, PBS洗涤1次, 用破膜剂前处理细胞悬液, 分别标记MPO-FITC和CD79a-PE。

1.3.3 流式细胞仪检测[3]

(1) 校准:用flow-check标准荧光微球校准仪器光路, 调节各参数变异系数<2%; (2) 调整荧光补偿:用淋巴细胞CD-FITC/CD8-PE调整荧光补偿; (3) 细胞检测分析:检测10000个圈定细胞, 利用前向散射/侧向散射 (FSC/SSC) 双参数散点图设门, 记录门内细胞抗原阳性率, 阳性判断标准为细胞群体表达某一抗原≥20%, 细胞质抗原则为≥10%。

2 结果

急性髓细胞白血病细胞抗原表达率以CD33为最高 (99.6%) , 其余依次为CD117 (98.7%) 、CD123 (97.5%) 、CD13 (92.2%) 、MPO (91.0%) 、CD34 (66.3%) 、HLA-DR (66.1%) 、CD7 (47.2%) 、CD38 (40.0%) 、CD56 (36.4%) 、CD64 (31.1%) 等, 其中CD14仅表达于M4、M5 (见表2) 。

3 讨论

急性髓细胞白血病细胞抗原常出现缺失、过表达、系列交叉、跨阶段表达等异质性, 有利于白血病正确免疫分型和诊断, AML最常见的抗原表达为CD33、MPO和CD13, 表明此3 类抗原对判断白血病细胞是否为髓系来源具有诊断价值, 此外MPO阳性细胞率高表明细胞分化较好[4], 患者预后较好。HLA-DR和CD34为干/祖细胞相关抗原, 可作为白血病低分化亚型的标志。AML伴淋系表达中以CD7、CD19较为常见, 亦可作为AML治疗后微小残留病变监测标志。CD14仅表达于M4、M5型, 特异性较好[5]。

总之, 流式细胞术可全面、特异、准确地检测出细胞抗原分布情况, 更准确、客观对白血病免疫分型, 对治疗、预后以及微小残留病变监测有重要意义。

参考文献

[1]刘艳荣, 于弘, 常艳, 等.四色荧光标记抗体在白血病免疫分型中的应用[J].中国实验血液学杂志, 2002, 10 (5) :423424.

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[3]王建中.临床流式细胞分析[M].上海:上海科学技术出版社, 2005:296-306.

[4]时昊, 张志璐, 肖爱琴, 等.e-kit受体与其他髓系膜抗原标志物对急性非淋巴细胞白血病诊断价值的比较[J].中华内科杂志, 2005, 44 (5) :384-385.

单细胞分析 第8篇

1 材料与方法

1.1 材料

来源于我院2010年1-12月门诊宫颈细胞学检查标本2 640例, 病人年龄20～70岁。

1.2 标本的采集

应用宫颈刷收集宫颈外口及宫颈管的脱落细胞, 洗入装有ThinPrip保存液的小瓶中, 经过ThinPrip系统的处理, 制成薄层细胞涂片, 95%的酒精固定, 巴氏染色。

1.3 细胞学分类方法

采用TBS分类法, 正常范围、不典型鳞状细胞 (ASCUS) 不典型腺细胞 (AGUS) 、低度鳞状上皮内病变 (LSIL) 、高度鳞状上皮内病变 (HSIL) 和鳞状上皮细胞癌腺癌 (CA) 。

1.4 阴道镜下活检及病理组织学对照

对细胞学结果ASCUS, AGUS, LSIL, HSIL, CA及人乳头瘤病毒HPV阳性者行阴道镜指引下多点活检, 阴道镜下见异常宫颈图像, 在病变部位取活检, 未见异常图像, 则在3、6、9、12点活检送病理。

2 结果

2.1 检查结果

2 640例液基细胞学检查中发现异常499例, 不满意5例, 细胞学异常179例;其中ASCUS改变75例 (年龄25～35岁, 占50例) , LSIL 40例, HSIL 20例, HPV 35例, AGUS 5例, CA 4例, 霉菌200例, 滴虫20例, 球菌40例, 线索细胞60例。

2.2 液基细胞学检查与病理检查比较

在179例细胞学涂片异常病例中, 有ASCUS+AGUS 40例做病理, LSIL、HSIL、HPV病例全部做病理活检, 结果见表1。

3 讨论

从宫颈癌前病变发展成宫颈癌是一个较长时间, 过程大约10年[1]。及早发现早期宫颈癌及时恰当的处理治愈率100%[1]。所以对健康妇女进行防癌普查是非常必要的。宫颈涂片除提供癌前病变癌变诊断外, 还能对多种微生物如滴虫, 念珠菌, 球菌, 病毒等感染提供诊断。使各种阴道炎症得到及时治疗, 同时可对年轻患者宫颈癌的流行病学研究提供参考。本组资料中25～35岁ASCUS 50例, HSIL 15例, 提示宫颈早期病变以25～35岁居多。霉菌200例反映霉菌在南方地区发病率高。

脱落细胞只能反映当时的细胞学形态, 与病理存在着差异。病理学更能够准确地表现整个上皮细胞的组织结构[2]。我院对细胞的异常都建议进行病理的检查, 以病理报告为准。

液基细胞学检查的应用较传统巴氏法相比, 有较高的异常细胞检出率[3], 尤其对SIL的检出率较传统巴氏法的检出率相比有明显提高, 对宫颈上皮内瘤变检出率较传统巴氏法的检出率要高[4]。同时液基细胞学检查不满意病例亦较传统巴氏法低, 避免了传统因涂片质量差、不均匀、过厚、过多的黏液、血液或炎症细胞而遮盖了异常细胞的检出率。本文ASCUS+AGUS的检出率为2.4%, 对LSIL的检出率为1.5%, HSIL的检出率为0.7%, CA 4例。HPV的检出率为1.3%, 同文献报道一致。

应用液基细胞学检查对宫颈癌前病变筛查, 可以筛查出危险性较高的宫颈癌前病变及宫颈癌, 从而做到早期诊断及治疗, 改善预后。

摘要：目的:应用液基细胞学检查进行防癌普查。方法:对2 640例宫颈细胞学检查病例中179例细胞学检查异常者进行阴道镜检查, 并多点活检, 并对照宫颈活检病理结果与宫颈液基细胞学相比较。结果:179例细胞异常病例中, 高度鳞状上皮内病变 (HSIL) 20例, 低度鳞状上皮内病变 (LSIL) 40例, 不典型鳞状细胞 (ASCUS) 75例, 不典型腺细胞5例, 癌4例, HPV感染35例。其中139例行病理检查, 宫颈癌及宫颈癌前病变阳性率HSIL 70%, CA 100%, LSIL 20%。结论:液基细胞学检查宫颈细胞异常病例结合阴道镜病理检查可以筛查出危险性较高的宫颈癌前病变及宫颈癌。从而做到早期诊断, 及时治疗, 改善预后。

关键词：子宫颈癌,癌前状态,宫颈细胞学筛查,病理诊断

参考文献

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[3]潘秦镜, 李凌, 乔有林, 等.液基细胞学筛查宫颈癌的研究 (J) .中华肿瘤杂志, 2001, 23 (4) :309-311.

单细胞分析 第9篇

关键词：UF-50全自动尿沉渣分析仪,H-500尿液分析仪,影响因素

UF-50全自动尿沉渣分析仪与H-500尿液分析仪使用方便、快速、准确率较高, 但在实际工作中发现它们有一定的误差, 现报道如下:

1 材料与方法

1.1 材料

收集我院住院患者晨尿20 ml于2 h内送检。2009年1~6月共收集尿液标本5 459例, 其中, 男3 026例, 女2 433例;年龄1 d~108岁。

1.2 仪器与试剂

日本Sysmax公司生产的UF-50全自动尿沉渣分析仪及其配套试剂和质控品;DIRUI生产的H-500尿液分析仪及配套试剂;日本欧林巴斯光学工业株式会社生产的Olympus显微镜, 普通离心机和带刻度试管。

1.3 方法

工作前做仪器的每日质控, 质控在控时方进行标本的检测。将10 ml尿液标本混匀后先在H-500尿液分析仪上测试, 再在UF-50尿沉渣分析仪上测试, 最后以相对离心力400 g离心5 min, 弃去上清液, 留取0.2 ml尿液并混匀尿沉渣, 取20μl涂片, 用18 mm×18 mm加盖玻片后镜检, 观察细胞成分为10个高倍视野取均值。三种试验均在2 h内完成, 超出H-500、UF-50分析仪报警限值和显微镜镜检的正常参考值范围的结果即分别为各自的阳性结果。

1.4 正常参考值

UF-50尿沉渣分析仪报警限值, 红细胞:男性0~12个/μl, 女性0~24个/μl, 白细胞:男性0~12个/μl, 女性0~25个/μl。显微镜镜检正常参考值范围:红细胞0~3个/HP, 白细胞0~5个/HP。

2 结果

UF-50的检测简称沉渣仪法, H-500的检测简称干化学法, 显微镜镜检简称镜检法, 三种方法的检测结果见表1。UF-50尿沉渣分析仪检测5 459例尿液标本假阳性结果 (以镜检法为“金标准”, 与之不符的阳性可视为假阳性) 分析见表2。UF-50尿沉渣分析仪检测5 459例尿液标本假阳性结果影响因素分析见表3。

3 讨论

H-500尿液分析仪及其配套使用的H系列尿液分析试纸条检测白细胞的原理是吡咯酚酯在中性粒细胞中酯酶的水解作用下, 产生游离酚, 游离酚与苯基重氮盐偶联, 生成紫色染料, 根据试纸条紫色的有无和深浅来定性或定量白细胞的有无和多少, 但这受到一定因素的影响:淋巴细胞和单核细胞不含酯酶, 不能产生游离酚而呈假阴性;高比重尿、淋巴细胞尿、高葡萄糖尿及室温20℃以下均可造成白细胞结果偏低或呈假阴性[1];另外, 某些大剂量的药物, 如头孢霉素和庆大霉素可抑制显色反应而致假阴性[2]。检测红细胞的原理是血红蛋白具有过氧化物酶样活性, 可使过氧化物分解新生态氧, 新生态氧氧化指示剂, 使指示剂出现颜色变化, 根据试纸条颜色的有无和深浅来定性或定量红细胞的有无和多少。红细胞破碎和溶解及血红蛋白释放入尿中引起阳性反应 (镜下看不到完整的红细胞) ;肌红蛋白也具有过氧化物酶活性而呈假阳性;尿中含有的对热不稳定的酶或细菌 (白色念珠菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌) 释放的过氧化物酶活性物质或由于细菌代谢繁殖过程中合成的触酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶而产生假阳性结果[3];某些氧化性污染物, 例如次氯酸盐会导致假阳性;大量的维生素C可致假阴性, 某些药物, 如利福平可降低红细胞的反应性而出现假阴性。本研究显示白细胞检测镜检法比干化学法有更高的阳性率, 红细胞检测干化学法比镜检法有更高的阳性率, 这与有关报道基本一致[4,5]。

UF-50全自动尿沉渣分析仪是使用全自动流式细胞技术和电阻抗原理, 通过对前向散射光波形 (散射光强度和散射光脉冲宽度) 、荧光波形 (荧光强度和荧光脉冲宽度) 和电阻抗值的大小综合分析, 得出细胞的形态、细胞横截面积、染色片段的长度、细胞容积等信息并绘出直方图和散射图。仪器通过分析每个细胞信号波形的特性来对其进行分类[6]。但各检测项目和其相应影响因素在形态、大小、染色性方面有相似之处。因此, 该机器还不能严格区分各类成分。本结果表2中反映尿中红细胞假阳性率较高, 而白细胞假阳性率较低;表3表明红细胞的假阳性主要由结晶 (哑铃形草酸钙结晶居多) 、酵母样菌、细菌和精子 (男性尿中) 引起。草酸钙结晶、酵母样菌、精子和成团的细菌与尿中红细胞具有相似的荧光和前向散射光特性, 造成仪器误判。本市地处南方, 天气炎热而潮湿, 尿液久置易生菌, 酵母样菌引起的假阳性有相当高的比率, 达到37.8%。尿中白细胞假阳性主要由结晶、小圆上皮细胞、细菌和红细胞过多引起, 分别达到34.5%、33.6%、22.7%和9.2%, 原理和红细胞相似。

综上所述, H-500尿液分析仪与UF-50尿沉渣分析仪作为自动化仪器, 与传统手工法相比, 具有操作规范化、检测自动化、总体准确性、重复性好, 同时检测多个项目、高效快速等优点, 但在检测红细胞和白细胞的项目中, 由于各自检测原理技术的原因, 分别存在一定数量的假阳性和 (或) 假阴性, 必要时应结合手工显微镜镜检以保证尿液分析的检验质量。

参考文献

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单细胞分析 第10篇

关键词：克隆 核移植 异常发育

中图分类号：Q132 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2013）14-0036-03

1997年2月27日，英国《自然》杂志公布了一项爱丁堡罗斯林研究所威尔莫特等人的研究成果：经历了247次失败之后，终于在1996年他们得到了一只克隆雌性小绵羊，取名“多利”。自从多利产生国内外生物科学工作者在克隆动物技术上取得了显著的成绩。在畜牧业中，克隆动物具有提高动物生产性能、繁育优良品种、改善畜产品质量等优势；在医药方面，克隆动物在研究人类疾病模型、异种器官移植和生产生物医药产品方面都显示出了巨大的研究潜力。但是目前生产的克隆动物普遍出现死亡率高，个体发育不正常的现象。通过研究发现这一现象与许多细胞因素有关，包括：核供体的重编程、卵母细胞的成熟发育、X染色体活性和基因表达、线粒体的变化、细胞因子的效应等。

1 核供体重编程和卵母细胞成熟

核移植一大目的就是获得多产的后代，但是要成功的获得后代还需要许多事件能够正常发生。首先就是核供体需处在一种能够被重塑，基因组能够被逐渐的重编程的状态；其次就是受体卵母细胞必须成熟，能够启动重组胚的发育；再者，就是体外培养体系必须适应这种胚胎的生长需求。代孕动物的生理状态对核移植后代的成功繁育也有着十分重要的影响，例如，处于排卵前或是排卵后的状态，不同的季节等对应的胚胎的妊娠率和分娩率都有所不同。

核移植过程中，目前不仅囊胚发育率和妊娠率较低，而且产生的后代个体也多有异常问题而出现新生胎儿出生不久就死亡的现象。主要表现在胎儿个头大，心脏肥大、卵圆孔闭合不全、瓣膜发育不全，肝脏肿大和充血、肝组织发育不全、脂肪沉积严重，肺不能正常充气、形态畸形，脾脏较小、出血，肾脏不成形、伴有大量脂肪沉积，脑组织发育不全、含量少，等。1-7究其原因，除了上面提到的，估计得追溯到表观修饰异常和发育相关基因表达异常等细胞内深入的活动机制上来。8-10

2 X染色体

由于剂量补偿效应，哺乳动物的雌性胚胎中的一条X染色体会发生失活。Xist基因的表达决定了这一效应的发生，而且Xist在二细胞时期就开始表达。其表达还引起了子代细胞中X染色体复制不同步，特别是在胚胎致密化之后，这种不同步X复制的细胞比例逐渐增加。

体外生产的胚胎在培养过程中，雄性胚的生长状况要优于雌性胚，特别是在培养液中含有高浓度的葡萄糖、血清以及相对较高的温度都会给雌性胚的生长带来不利影响。这种发育的二态现象，很可能是由于培养环境引起了基因的差异表达。但让人迷惑的是，有一研究发现，有384个基因在正常胚与体外形成胚里表达有差异，其中85%基因在IVP胚胎中表达下调；而与X染色体相关的基因表达却上调11，而且这一情况在雄性胚和雌性胚中相同。Xist与二态现象之间究竟有什么样的关系人需要进一步探索。

在研究X相关基因在存活和死亡克隆牛中的表达时，发现很多基因出现异常表达。有意思的是，Xist基因在雄性克隆牛的组织中呈高度甲基化，而在雌性克隆牛组织内Xist普遍处于低甲基化水平，而且出生后死亡的克隆牛比围产期死亡的还要低。这与核重编程不完全有很大的关系，而且与X染色体选择性随机失活受到干扰有关。尽管Xist基因的甲基化和Xist的转录都有是组织差异的，但是Xist基因DNA甲基化程度高的样品的Xist转录水平也高，这似乎暗示着还存在其他因素在调控Xist转录上起着更大的作用。总之，X染色体的剂量效应及其印记修饰状况与胚胎的正常发育有着重要的作用。

3 线粒体

线粒体在机体里发挥重要作用，它不仅给细胞直接提供能量，而且能维持细胞稳态，介导了信号转导和凋亡等生理活动。线粒体在细胞内的数量，形态和分布状态都影响着细胞的生理功能。线粒体内部基因功能不全，其分离、融合等过程都受到核基因的协作。在成熟的卵母细胞中线粒体的拷贝数约为105个，当其受精后，胚胎发育到囊胚的这段时期，线粒体都不重新合成，都是使用卵母细胞遗传而来的线粒体。近来，研究发现含有高拷贝线粒体的卵母细胞其受精率更高，而且对胚胎发育更有利。Wai等发现含有4000个拷贝的线粒体能够发育到胚胎附植前，而要能够完成完成附植后发育线粒体的数量至少要40000-50000个12。对附植前的胚胎进行研究，发现体外培养条件能引起胚胎内线粒体过早的开始复制，线粒体的形态与定位模式也有所改变。但是目前线粒体影响细胞功能的详细机理还不太清楚。

4 细胞因子

目前，由体细胞核移植或体外受精生产的胚胎成功发育为个体的成率要低于10%。高达70%的核移植胚胎在妊娠的前三个月就会发生流产。而胎盘发育异常是这一现象的主要原因，表现为胎盘子叶重量增加，胎盘子叶数量减少。即使部分胚胎幸运地发育到个体，不少个体也会出现巨大综合症。这些克隆带来的非正常现象，主要与基因不能按照正常的模式表达有关。其中，与细胞分裂增殖和个体生长发育密切相关的类胰岛素生长因子，及其对应的受体和结合蛋白的正常表达对维持胚胎的正常发育有重要的意义。

IGFs有两种类型，IGF-I和IGF-II。IGF-I既有促进生物合成代谢的功能，又有促生长的功能。IGF-II可以介导酶和生物大分子的降解。结合蛋白除了能运输IGFs帮助其定位外，还能延长其半衰期以及调节其活性。它们在胚胎发育期的一个重要的作用就是可以调节出生个体的大小。

研究发现：在25日龄牛胚中，体外受精产生的胚胎表达的IGF-I的水平要显著高于正常发育的胚胎组织；核移植形成的胚胎表达的IGF-II的水平又要显著高于体外受精形成的胚胎；核移植产生的胚盘组织中表达的IGF-II的水平也要显著高于正常的胚盘13。研究还发现：看似正常的克隆牛在出生时血浆中IGF-II的浓度明显高于人工受精的正常对照牛，而出生15天后的IGF-II浓度明显降低； IGF-I在妊娠150天胎儿血浆中的浓度明显高于IVP的正常对照；核移植胎盘尿囊液中IGFBP-l的水平也明显升高14。

5 结语

当前动物克隆技术作为一项新技术，由于其巨大的科研价值和应用价值而发展迅速，但是克隆动物成活率低成为此项技术的制约瓶颈，在克隆动物技术中还存在许多科学问题仍尚待解决。克隆动物的异常发育原因可能与细胞内活动的许多因素都相关，除了上诉提到的因素以外，还有组蛋白的修饰、其他类型的细胞因子、体外培养条件等方面的因素。时下较为流行的重编程理论和表观遗传学理论还不能在微观层面深入对异常发育现象作出合理的解释，新的研究方法和技术以及新发现急需出现。

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12 Wai， T.，Ao， A.， Zhang， X.， Cyr， D.， Dufort， D.， Shoubridge， E.A.. The role of mitochondrial DNA copy number in mammalian fertility.Biol.Reprod. （2010） 83 52 62.

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单细胞分析 第11篇

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年12月～2014年12月在我院住院治疗的1080例患者,其中男580例,女500例,年龄19～68岁,平均40.06±4.52岁。

1.2 仪器与试剂

日本希森美康公司生产的SysmexUF-1000i全自动尿沉渣分析仪及配套的质控品、试剂;Olympus CX31显微镜;标准离心机。

1.3 方法

校准仪器,尿液标本检测前先用配套的质控品预先质控,以确保检测结果准确、可靠;严格遵循仪器操作说明完成各项操作[2],检测时间不能超过2小时。显微镜检测则根据操作规范执行,将患者尿液标本混匀后,取10mL置入玻璃管内,400g离心5min后除去上清液,留取0.2mL沉淀液,混匀后吸取20μL沉淀物,滴于载玻片上,然后加盖玻片进行显微镜检。

1.4 评价标准

UF-1000i尿液分析检测标准[3]:红细胞为男性0～12个/μL,女性0～24个/μL;白细胞为男性0～12个/μL,女性0～26个/μL。显微镜检测标准:红细胞为0～3/个HP,白细胞,0～5/个HP。超过以上范围即呈阳性。

1.5 统计方法

计量资料以均值加减标准差()表示,两组间均值比较采用独立样本t/t'检验;计数资料以频数(f)和率值或构成比(P)表示,无序分类资料采用Pearsonχ2检验,四格表资料改用Fisher确切概率法,均由SPSS 17.0统计软件进行统计分析。α=0.05。

2 结果

UF-1000i尿液分析相比显微镜检测:红细胞灵敏度为92.86%,特异度为85.0%;白细胞灵敏度为92.68%,特异度为88.06%;两种检测方法的灵敏度和特异度差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

注:两组灵敏度、特异度比较,P>0.05

3讨论

20世纪中期以来,流式细胞术应用于尿液检测的尿液沉渣分析仪被作为专用型流式细胞仪,其主要优点包括可报告多项参数、重复性良好、检测速度较快、操作简便,能够达到尿沉渣检验的标准化、自动化,尿液标本不需要离心处理,互污染率较低,重复精度较好等[4]。但由于UF-1000i基础工作原理为结合尿液中有形成分的大小实施非形态分析,检测作用以筛选为主,与以往干化学筛选法相比,明显降低了假阴性率、假阳性率,对于形态异常的白细胞、红细胞及具有临床诊断意义的各种管型、肿瘤细胞等[5],UF-1000i尿液分析仪报警提示仪器无法计数并准确辨认细胞类型。本试验通过UF-1000i尿液分析仪对1080例患者的尿液标本进行检测,与显微镜检测结果差异无统计学意义(P>0.05),符合率较好。据表1可知,UF-1000i检测过程中受到诸多因素影响,检测红细胞过程中有120例患者出现假阳性结果,经显微镜检显示50例患者尿液标本出现大量结晶,40例患者尿液标本发现大量细菌,20例患者尿液标本出现大量霉菌,10例男性患者尿液标本中有精子,这些因素均有可能被仪器错误判断为红细胞;在红细胞检测20例假阴性结果中,通过显微镜检查发现存在少量破坏的红细胞,其释放的荧光较弱,很容易被漏检,产生假阴性结果。UF-1000i尿液分析仪检测白细胞过程中有80例患者尿液标本结果为假阳性,经显微镜检查显示50例患者尿液标本中存在大量上皮细胞,20例患者尿液标本中发现大量小圆上皮细胞,10例患者尿液标本中发现大量非结晶型尿酸盐,这些因素均容易被检测仪器错误判断为白细胞;在30例患者尿液标本白细胞检测假阴性结果中,10例患者尿液标本通过显微镜检查显示脓细胞聚集成团,10例患者尿液标本中白细胞形态遭到破坏,10例患者因为用药而受到干扰,这些均是导致仪器出现假阴性结果的因素。通过本试验得知,UF-1000i尿液分析仪与显微镜检测结果存在良好的符合率,为临床工作带来了诸多方便,并使工作效率得到明显提高,减少了人为误差;但UF-1000i尿沉渣分析仪的检测结果会受到诸多因素影响,从而出现假阴性、假阳性结果。因此,在实际检验工作中,可将UF-1000i作为大批量尿液标本有形成分的筛选手段,同时对尿液中白细胞、红细胞的阳性标本进行显微镜复查,综合分析检测结果,尽可能降低假阴性率、假阳性率,更加准确、可靠地为临床检验、诊断提供有力数据。

摘要：目的:分析UF-1000i尿液分析与显微镜检测尿液中白细胞、红细胞的符合情况及影响因素。方法:采集1080例患者的尿液样本分别进行UF-1000i尿液分析、显微镜检测。结果:UF-1000i尿液分析相比显微镜检测:红细胞灵敏度为92.86%,特异度为85.0%;白细胞灵敏度为92.68%,特异度为88.06%;两种检测方法的灵敏度和特异度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:UF-1000i尿液分析的符合率较高,但存在较多干扰因素,因此对结果异常的患者应进行显微镜复查,保证检测结果的准确性。

关键词：UF-1000i尿液分析仪,显微镜,红细胞,白细胞,尿液,符合情况

参考文献

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