耐药细胞生物学论文范文

耐药细胞生物学论文范文第1篇

LPS诱导肝细胞L02释放HMGB1蛋白的研究

人单核巨噬细胞系u937细胞购自中科院上海细胞生物学研究所细胞库，非致瘤性人源性肝细胞系L02细胞由本室保存。

作者：戴霞红 赵树山 萧梅芳等

耐药细胞生物学论文范文第2篇

一、高校细胞生物学教学改革实践分析

(一) 适当取舍, 合理突出教学重点

随着科学文化的不断发展, 细胞生物学与不同学科之间的教学内容在不断充实完善的同时也出现了一定程度的重叠, 由于不同学科在教学安排上有先后之分, 因此, 教师如何有效避免与先行课程的教学内容重复, 又能为后续课程留有余地, 合理突出教学重点, 成为每个细胞生物学教师必须解决的重要问题。针对此, 教师必须科学制定教学大纲, 合理划分与其他学科的教学内容, 根据教学内容的难易程度制定教学计划。

例如, 细胞周期调控的遗传基础内容是现今细胞生物学的研究热点内容, 学生对这方面的内容也较为感兴趣, 但由于学校之前已经开设过遗传学、生物化学等课程, 为了避免教学内容重复累赘, 提高教学成效, 本人在授课时侧重讲解CAD基因的实验操作、原癌基因的发现和基本调节功能、常见抑癌基因的调节等内容, 便于学生对生物细胞的功能及其内部关系有一个系统而全面的认识。

(二) 优化教学, 采用多种教学方法

为进一步培养学生的问题分析和解决能力, 本人在细胞生物学课程教学过程中会采用多种教学方法来激发学生的学习热情, 促使学生主动投入到学习中, 有效提升教学质量。

1. 多媒体教学法。

细胞生物学中涉及较多知识繁杂的抽象理论, 学生在学习时难免会觉得抽象难懂, 甚至会感到很大的学习压力。为更好地让学生学习掌握各个知识点, 本人在教学中会借助多媒体设备辅助教学, 制作和编辑大量的多媒体图片和动画, 帮助学生梳理各个知识点。例如, 在讲到“细胞信号转导”的相关内容时, 本人制作了关于细胞信号通路与分子间作用的教学PPT, 使复杂的知识点更为简化, 学生也容易归纳知识重点难点, 达到良好的教学效果。

2. 讨论式教学法。

个体生物的遗传到变异、生理到病理都与细胞的生长发育情况密切相关, 为加深学生对细胞生物学课程的兴趣, 本人在教学课程中增加了6个课时的讨论课, 要求学生根据教师给的议题分组进行讨论, 最后统一结论后在课堂上总结展示各组的讨论成果。例如学生曾经参与过“光合作用对人类未来粮食影响的问题探讨”、“探究细胞信号传导与环境的适应性”、“生物克隆对人体遗传及生物伦理的影响”等讨论议题, 学生通过分组协作讨论能充分调动学生的积极性, 各组自主查阅文献资料、制作PPT展示成果、课堂成果汇报等工作, 最后由教师作出综合评价, 不仅能有效培养学生的口头表达能力和问题探索能力, 还能培养学生的团队协作精神, 促进学生综合素质的有效提高。

3. 探究式教学法。

细胞生物学的理论思想是建立在无数的实验探索之上的, 因此, 教材中也列举了许多经典实验。在细胞生物学教学过程中, 本人注重讲解探究性实验的设计原理和操作过程, 进而引导学生自主分析、总结和归纳实验的意义, 培养学生的探究能力和逻辑思维能力。课后本人会积极鼓励学生参与到本人的植物细胞组织培养科研项目中, 引导学生自主完成一些基本的探究实验环节, 并将科研问题带到课堂上进行深入探究和分析, 全面激发学生的自主学习兴趣, 加深学生对理论知识的理解。

(三) 围绕重点, 推进实验教学改革

细胞生物学是一门注重理论与实践相结合的应用型学科, 因此, 本人在教学课程中会适当增加实验环节, 一方面能激发学生的学习兴趣, 满足学生对新知识的探索需求, 另一方面又能加深学生对知识点的认识和理解。

例如, 在进行免疫荧光法显示细胞骨架实验时, 本人不仅在实验过程中引导学生掌握细胞骨架在细胞的分布情况, 同时也让学生巩固了荧光显微镜的作用原理和使用方法, 让学生在动手操作中加深知识印象。为充分培养学生的科研探索精神, 本人在细胞骨架显示实验中, 要求学生细心观察细胞的生长发育情况和培养基的颜色变化特征, 同时要求学生要仔细观察被污染的细胞培养情况, 加强学生对“无菌培养”的认识。此外, 本人还要求学生分组合作, 共同完成一份细菌培养观察报告, 要求学生详细记录细胞从单个悬浮状态至贴壁的形态变化, 并根据这个过程提出自己的疑问, 逐步培养学生的科研严谨思维和求真务实的科研态度。

二、结束语

总而言之, 细胞生物学已成为生物学、医药学、农林业学、畜牧学等专业的基础课程, 为有效提高教学质量, 教师必须结合学生的专业特色和学科发展要求, 认真研究教学内容, 根据教学实践不断改进教学方法, 逐步优化教学评价手段, 同时充分培养学生的创新思维能力, 将学生培养成为综合性应用型专业人才。

摘要：作为一门研究生物细胞生命活动规律的综合应用型学科, 细胞生物学与遗传学、分子生物学等学科相互融合, 综合反映生物科学发展的新进展。科学技术发展的日新月异, 促使细胞生物学教学内容更新迅速, 传统的教学方式已无法满足当今人才培养的要求。本文主要阐述高校细胞生物学的教学改革实践, 以达到更好的教学效果, 同时为类似研究提供一些参考。

关键词：高校,细胞生物学,教学,改革

参考文献

[1] 金朝霞, 肖萍, 曹芳, 张宗申.以培养创新人才为目标的细胞生物学教学模式探索[J].教育教学论坛, 2015 (29) :114-115.

耐药细胞生物学论文范文第3篇

【摘要】医学细胞生物学是高等院校生物和医学类专业主要的基础学科之一。它是21世纪自然科学的四大前沿学科之一，既是生命科学的基础学科，又是现代生命科学发展的重要支柱。根据医学细胞生物学课程在高等院校教学中的局限性及其重要性，探讨教学过程中存在的问题及改革。

【关键词】医学细胞生物学 教学改革

医学细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学，细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学。随着21世纪生命科学的发展和分子生物学技术和新方法的不断更新，要培养21世纪的高级医学人才，细胞生物学作为必修课在高等医学院校开设是非常必要的。细胞是机体组织器官的基本单位，在细胞亚细胞及分子水平掌握细胞各部的结构与功能又是医学教育的基本要求。可见细胞生物学在现代医学教育中充当着前沿与基础双重作用。因此在国内许多医学院校都为本科生硕士生开设了此课程。

在临床医学、麻醉、影像、检验、口腔和预防等专业开设了医学细胞生物学课程，虽然代课教师遵循教学大纲进行了系统地、充分地准备，但由于现代自然学科内容研究水平深入，微观的结构，抽象的理论，不能引起学生的学习热情，教学效果始终不理想。我校医学细胞生物学开设在大学第一年第一学期，就是为了让新生慢慢适应大学的授课进度和在已有的高中理论知识基础上拓展知識内容。但是，医学细胞生物学总学时为32学时，其中理论为24学时，试验为8学时。为了解决高等医学院校对低年级开设的基础学科的掌握及临床上更好的运用，我教研室对此进行了一些改革。

1.教学方面：

理论学时少，因此在第五章内膜系统授课结束后，进行一次网络（无纸化）考试。以选择题和填空题为主进行网络考试，对已学过知识内容进行一次总结。同学们对此也很赞同，从中看出自己对前几章节的知识内容到底掌握了多少有一个了解。

对于一些重要掌握内容布置作业，让学生看教科书以及课堂的授课内容相结合完成作业。有的学生按照教科书上内容来找答案，有的学生按照课堂上授课时所讲知识内容找答案，还有一部分学生就按照课件上内容来绘图并解释，这样可启发学生的自学能力。

本教研室实行课前十分钟讲课活动，这样可激发学生对于学过内容总结并讲解的能力。从第四章细胞膜与物质的穿模运输开始，给学习委员安排任务，把班里学生分小组，每次开课前安排一个学生来讲解上节课讲的重要内容。每小组由4-5个学生组成，一起讨论制作小课件或绘图的方式也可总结出重点内容。既可培养团队合作能力也可培养学生的讲解能力。

2.教师的评价和考核方面：

通过课前提问形式，了解学生的复习情况并给予一定评分。另外，对于课前十分钟内容进行评价，给学生鼓励和支持，强化学生的自学、总结和思考能力。对于网络考试结果进行分析和总结，找出学生学习中的难点并进行解释和更正。这样对大一的学生提供一个了解和掌握大学教材的理解和学习方法的把握，也可以渐渐提高学生的思考、分析、总结等方面的基础能力。

3.教师授课及培育学生方面：

授课时，不仅要讲清楚重难点还要带领学生一起讨论相关内容的病例。分析病例时，让学生清楚所举病例与所学内容的哪个部分有联系等问题，以免发生错误的理解。作为高校医学院校教师要注重医德教育，应贯穿渗透于整个专业教育中。在医学细胞生物学课中，时刻加强学生医德医风的教育。教育学生认真细致，因为将来他们面对的是鲜活的生命，他们对病人的诊断不容许一点失误，否则将会造成无法弥补的后果。不善于总结分析的学生，要提醒学生在未来的工作中出现错误或者没有对病人的病情进行认真的分析都可能导致严重的医疗纠纷。通过发现的问题教育培养学生一丝不苟、严谨细致的工作态度，培养高素质的医学人才。

参考文献：

[1]刘庆平，王仁军，宋梅 .细胞生物学教学模式的优化与实现.大连大学学报，2005，25（6），38-40.

[2]韩彦龙，宋洁，卜晓波.医学细胞生物学教学改革.医学信息，2010，23（10），308.

[3]刘岚，陈绍坤，税青林，于红，田强，赵矫，赵小平.医学细胞生物学实验教学及考核方法改革.山西医科大学学报，2009，8（11），422-423.

耐药细胞生物学论文范文第4篇

【关键词】 干细胞； 神经干细胞； 胶质瘤

脑胶质瘤是医学治疗的难点之一，手术切除肿瘤不仅难度大，而且容易复发［1,2］。放疗和化疗对术后残存的肿瘤细胞虽有一定的清除作用，但疗效均不理想。神经干细胞的出现，为胶质瘤的治疗带来了新的希望。意大利米兰神经科学家Finocchiaro博士的最新研究证实，中枢神经系统的神经干细胞是治疗脑神经胶质瘤的有效手段［3］。

1 干细胞

干细胞的研究始于60年代，由加拿大科学家恩尼斯特•莫科洛克和詹姆士•堤尔提出的［4］。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称之为“万用细胞”。干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。

2 干细胞分类

2.1 根据来源不同分类 干细胞根据来源不同分为胚胎干细胞和成体干细胞。

2.2 按能力分类 干细胞按能力可以分为以下四类：全能干细胞、万能干细胞、多能干细胞和专一性干细胞。

2.3 人体干细胞分类 全功能干细胞和多功能干细胞。

2.4 神经干细胞 关于神经干细胞的研究起步较晚，直至90年代初，Reynolds等才从成年小鼠脑纹状体分离出能在体外不断分裂增殖、具有多种分化潜能的细胞群，并正式提出了“神经干细胞(neural stem cells，NSCs)”的概念［5］。神经干细胞是干细胞的一种，是一种具有终身自我更新能力的细胞，其子细胞能分化产生神经系统的各类细胞，干细胞经过不对称分裂产生一个祖细胞和另一个干细胞，祖细胞具有有限的自我更新能力，并自发分化产生成神经元细胞和成胶质细胞等，从而生成神经元及神经胶质细胞。由于分离神经干细胞所需的胎儿脑组织较难取材，加之胚胎细胞研究的争议尚未平息，因此神经干细胞的研究仍处于初级阶段。

2.4.1 神经干细胞的特征

2.4.1.1 有增殖能力 即在一定的条件下能够不断分裂增殖，使得在体外能够大量扩增培养。

2.4.1.2 在整个生命过程中能自我维持或自我更新 所谓自我维持是指将干细胞的属性从亲代细胞传递到子代细胞，即在分裂增殖过程中子代细胞仍然维持干细胞的属性。

2.4.1.3 能通过扩增祖细胞而产生大量的后代

2.4.1.4 具有向神经组织多细胞系分化的能力 即具有分化为神经系统大部分类型细胞的能力。

2.4.1.5 损伤或疾病能刺激神经干细胞的分化 正常情况下，成年哺乳动物脑内的神经干细胞处于静息状态，在一定的信号刺激下，神经干细胞开始分裂增殖并分化为神经元或神经胶质细胞。

2.4.2 神经干细胞的获得

2.4.2.1 用逆转录病毒为载体向神经细胞内导入原癌基因 用逆转录病毒为载体向神经细胞内导入V-myc等原癌基因，使部分细胞获得持续分裂的能力。但这种方法转染率较低且获得的细胞也不稳定。

2.4.2.2 通过诱导胚胎干细胞使其分裂成神经干细胞 目前，定向诱导分化的条件还不确定。

2.4.2.3 从胎脑或成年脑中分离出神经干细胞 用特殊的无血清培养基结合一些细胞因子的作用进行体外培养。这是目前大多数研究所采用的方法。

2.4.2.4 在一定的条件下，使胶质细胞的前体细胞逆分化为神经干细胞。

2.4.2.5 脂肪组织 来自于美国Duke大学的Kristine Safford博士指出，脂肪组织中有一族细胞基质可分化成不同类型的神经细胞，且这些细胞具有中枢神经细胞和胶质神经细胞的特性［6］。该发现将有助于更多的研究人员致力于开发脂肪组织，使之成为基于细胞治疗的可靠来源。

3 胶质瘤

胶质瘤是颅内最为常见的恶性肿瘤，约占颅内肿瘤的45％～50％。但临床治疗效果却不尽人意［7~10］。近来随着对神经干细胞的分离、鉴定及其在体外培养等方面的研究不断取得进展，神经干细胞由于其独特的特性，为中枢神经系统疾病的治疗提供了新的途径。

3.1 概述 胶质瘤是发生于神经外胚层的肿瘤，故亦称神经外胚层肿瘤或神经上皮肿瘤。肿瘤起源于神经间质细胞，即神经胶质、室管膜、脉络丛上皮和神经实质细胞，即神经元。大多数肿瘤起源于不同类型的神经胶质，但由于其组织发生学来源及生物学特征类似，对发生于神经外胚层的各种肿瘤，一般都称为神经胶质瘤。

3.2 分型

3.2.1 星形细胞瘤 是发生于星形细胞的肿瘤，占胶质瘤中的半数以上。星形细胞瘤可分为纤维型和原浆型两类肿瘤，在脑内呈浸润性生长，大小不一，可以侵犯1个或2个以上的脑叶，甚至经胼胝体侵入对侧大脑半球。

3.2.2 多形性胶质母细胞瘤 多发生在大脑半球，很少发生在小脑，是成年人比较多见的恶性胶质瘤，发生率仅次于星形细胞瘤。肿瘤浸润范围比较大，可以侵犯几个脑叶，或经胼胝体侵犯对侧大脑半球。瘤组织周围显著水肿，甚至液化，出现假性分界，其实质瘤细胞浸润范围远较肉眼所见广泛得多。

3.2.3 少突胶质细胞瘤和少突胶质母细胞瘤 发生于少突胶质细胞的肿瘤。患者多是中年人，也可见于儿童，主要发生在大脑半球白质内。

3.2.4 室管膜瘤和室管膜母细胞瘤 常和脑室壁和中央管有联系，多见于第四脑室、侧脑室和脊髓内，患者多为幼儿和青年人。

3.2.5 混合性胶质瘤 肿瘤是由两种或者两种以上的胶质瘤类型所组成，各占相当的分量，这种胶质瘤多见于小儿，可见于小脑及大脑内。

3.2.6 髓母细胞瘤 主要发生在小脑蚓部，可突入第四脑室内，亦可侵入周围组织，是小儿颅内较常见的恶性肿瘤。常沿脑脊液呈种植性播散。

3.2.7 脉络丛乳头状瘤 发生在脑室内脉络丛，好发于第四脑室和侧脑室，可经第四脑室侧孔突入小脑桥脑角内生长。多发生在青年人，比较少见。

3.3 神经干细胞治疗胶质瘤的现状 脑胶质瘤高增殖和侵袭行为是当今的治疗难点，以至于能有效地“逃避”外科手术、放疗、化疗及免疫治疗等方案，导致患者最终的不可治和死亡。目前显微手术只能做到肉眼切除，而不少呈“树根状”生长的脑胶质瘤细胞浸润到正常脑组织内，成为无法全切的根源；放疗副反应大，常引起骨髓抑制［11,12］；化疗的毒性反应大、难以跨越血脑屏障及“多药耐药”尚无法解决［13］。脑胶质瘤的神经干细胞治疗是近年最令人瞩目的研究领域。

体内、外的神经干细胞对胶质瘤细胞均有强烈的追踪能力，同时能够稳定表达外源基因的产物；用神经干细胞作载体基因治疗胶质瘤，有可能成为治疗胶质瘤的一种新的有效方法。

3.3.1 NSC治疗胶质瘤的途径

3.3.1.1 将NSC注射植入荷瘤鼠脑内 植入的神经干细胞向胶质瘤部位迁移，将肿瘤包围起来使其增长、发展局限化，并可能分泌某些因子，致使大块肿瘤缩小。Aboody等［14］研究發现，当神经干细胞植入荷瘤鼠体内肿瘤后，它们会遍布整个肿瘤，并随肿瘤向其他部位迁移。如果植入脑内远离肿瘤的部位，神经干细胞也会穿过正常组织向肿瘤部位迁移。神经干细胞在迁移的过程中一旦发生不对称分裂，会产生一个祖细胞和一个神经干细胞，祖细胞会不断分化成熟，到达目的地后分化为一个功能细胞。目前对神经干细胞具有向肿瘤趋向性迁移的机制还不十分清楚，可能与肿瘤细胞所释放的某些因子或被肿瘤所破坏的脑组织释放的某些因子有关。

3.3.1.2 作为载体运送治疗基因 神经干细胞具有很强的分裂、增殖、自我更新及与正常脑组织整合的能力，可作为运送治疗基因的理想载体，利用神经干细胞具有向胶质瘤迁移的特性对胶质瘤进行基因治疗。应用神经干细胞作为载体介导基因治疗可采用多种目的基因，如肿瘤信号传导因子、细胞周期调节因子、促凋亡基因、血管生成移植因子免疫增强基因及肿瘤坏死因子等。

3.3.2 NSC治疗胶质瘤的优势 理论上讲，任何一种中枢神经系统疾病都可归结为神经干细胞功能的紊乱。脑和脊髓由于血脑屏障的存在，使之在干细胞移植到中枢神经系统后不会产生免疫排斥反应。神经干细胞在神经发育和修复受损神经组织中发挥着重要的作用。

神经干细胞治疗胶质瘤有两大优势：一是直接采用神经干细胞移植可以修复和代替受损的脑组织，能够重建部分环路和功能。二是利用神经干细胞作为基因治疗载体，用于颅内肿瘤和其它神经疾病的基因治疗，可弥补病毒载体的一些不足。

神经干细胞作为胶质瘤基因治疗的载体有以下好处：一是可以稳定表达外源的杀伤基因，对肿瘤细胞起到持续的杀伤作用。二是神经干细胞可以和正常脑组织整合，修复由于肿瘤的侵袭作用所受损的脑组织。这可能与脑内的神经干细胞具有向胶质瘤迁移的特性有关。

3.3.3 神经干细胞应用于基因治疗存在的问题

3.3.3.1 神经干细胞数量少，体外培养时易分化 如何获得大量的保持其分化潜能的神经干细胞，还需要进一步研究。

3.3.3.2 建立永生化的神经干细胞系 虽可提供细胞数量上的保证，但存在潜在的致瘤性问题。

3.3.3.3 加强人神经干细胞的研究迫在眉睫 目前神经干细胞的研究对象绝大多数为大鼠和小鼠，而鼠与人之间的种属差异是显而易见的。

3.3.3.4 转染目的基因的长期稳定表达及调节问题

3.3.3.5 神经干细胞迁移的机制及调控仍不十分清楚

3.4 神经干细胞治疗胶质瘤的前景 脑胶质瘤是医学治疗的难点之一，手术切除肿瘤困难，且术后容易复发。由于神经干细胞具有迁移的特性，利用神经干细胞的这种特性，可以通过神经干细胞携带并向脑部释放药物以达到治疗胶质瘤的目的。但目前对神经干细胞自身所具有的诸如增殖、分化以及对胶质瘤细胞的追踪能力等调控机制仍不清楚，对移植后神经干细胞的迁移速度、分化方向等尚缺乏有效的调控手段，使移植治疗的效果受到一定的限制。此外，神经干细胞的来源、分离、培养及鉴定等还有许多工作要深入开展，如果能从自体中分离诱导出神经干细胞，有可能解决神经干细胞的来源问题。

4 结论

不管怎样，神经干细胞的出现毕竟为胶质瘤的治疗树立了一个新的里程碑，相信随着人们对神经干细胞和胶质瘤了解的不断深入，最终一定会利用神经干细胞达到控制并最终治愈胶质瘤的目的。

参考文献

［1］ Fan S,Sun Z,Jiang D,et al.BmKCT toxin inhibits glioma proliferation and tumor metastasis.Cancer Letters,2010, 291(2):158-166.

［2］ Chen HY,Shao CJ,Chen FR,et al.Role of ERCC1 promoter hypermethylation in drug resistance to cisplatin in human gliomas.Int J Cancer,2010,126 (8):1944-1954.

［3］ Tunici P,Bulte JW,Bruzzone MG,et al.Brain engraftment and therapeutic potential of stem/progenitor cells derived from mouse skin.J Gene Med,2006,8(4):506-513.

［4］ Anastassea-Vlachou C,Cassimos C,Messaritakis J,et al.A case of stem cell leukemia occurring in an infant 38 days old.Ann Paediatr,1961,196:310-315.

［5］ Morshead CM,Reynolds BA,Craig CG,et al.Neural stem cells in the adult mammalian forebrain:a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells.Neuron,1994,13(5):1071-1082.

［6］ Safford KM, Rice HE. Stem cell therapy for neurologic disorders: therapeutic potential of adipose-derived stem cells. Curr Drug Targets, 2005, 6(1):57-62.

［7］ Hwang JM, Cheon JE, Wang KC. Visual prognosis of optic glioma. Childs Nerv Syst, 2008, 24(6):693-698.

［8］ Burnet NG, Lynch AG, Jefferies SJ, et al. High grade glioma: imaging combined with pathological grade defines management and predicts prognosis. Radiother Oncol, 2007, 85(3):371-378.

［9］ Donato V, Monaco A, Rollo A, et al. Elderly and poor prognosis patients with high grade glioma: hypofractionated radiotherapy. Clin Ter, 2007, 158(3):227-230.

［10］ Strojnik T, R sland GV, Sakariassen PO, et al. Neural stem cell markers, nestin and musashi proteins, in the progression of human glioma: correlation of nestin with prognosis of patient survival. Surg Neurol, 2007, 68(2):133-143.

［11］ Poleck-Dehlin B, Duell T, Bartl R, et al. Genetic analyses permit the differentiation between reactive malfunctions (‘promyelocyte arrest’) and arising promyelocyte leukemia in a pregnant patient with a history of a medulloblastoma. Leuk Lymphoma, 2004, 45(9):1905-1911.

［12］ Miralbell R, Lomax A, Russo M. Potential role of proton therapy in the treatment of pediatric medulloblastoma/primitive neuro-ectodermal tumors: spinal theca irradiation. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 1997, 38(4):805-811.

［13］ Zhang JP, Shi HL, Sai K, et al. Individualized chemotherapy based on drug sensitivity and resistance assay and MGMT protein expression for patients with m alignant glioma——analysis of 42 cases. Ai Zheng, 2006, 25(12):1533-1537.

［14］ Kendall SE, Najbauer J, Johnston HF, et al. Neural Stem Cell Targeting of Glioma is Dependent on PI3K Signaling. Stem Cells, 2008, 26(6):1575 -1586.

（收稿日期：2010-11-09）

（本文編辑：陈丹云）

耐药细胞生物学论文范文第5篇

[关键词] 薯蓣皂苷元;宫颈癌;细胞增殖;细胞周期

Influence of Diosgenin on Cell Proliferation in Human Cervical Cancer

ZHANG Wenxiu

Department of Obstetrics and Gynecology， the First People's Hospital of Jining City， Jining 272100， China

[Key words] Diosgenin; Cervical cancer; Cell proliferation; Cell cycle

现代药理研究表明薯蓣皂苷及其衍生物具有免疫调节、降血脂、抗衰老、抗氧化、抗关节炎、保护胃黏膜、祛痰、溶血、脱敏、灭钉螺、抗肿瘤、抗艾滋病、抗血小板聚集、增强心脏收缩力、减慢心率、抗动脉硬化、改善微循环等多种药理活性[1，2]。宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，发病率呈逐年上升和年轻化趋势;近年来，国内外对化疗在宫颈癌的应用进行基础和临床方面研究，取得较大进展。本研究观察薯蓣皂苷元对人宫颈癌Hela细胞株增殖和细胞周期的影响，探讨其对治疗宫颈癌的可能作用。

1 材料与方法

1.1 细胞培养

人宫颈癌细胞株购自上海瑞齐生物科技有限公司，用含10%新生牛血清(NBS，Gibco，USA)、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素、2mmol/L谷氨酰胺的DMEM培养基(Gibco，USA)培养;细胞培养孵箱内培养条件：5%CO2，95%空气，温度37℃，湿度98%。细胞在培养皿中密度达到70%～80%时，进入实验干预。

1.2 薯蓣皂苷元贮存液配制

原粉为美国Sigma公司产品，按照说明书要求，溶于酒精配制100mM贮存液，无菌分装-80℃保存备用。工作液酒精浓度0.5%。分组实验，无菌吸取贮存液加入饥饿培养液中，稀释为15μM、20μM、25μM、30μM。

1.3 细胞活力的测定

细胞密度培养至70%～80%，消化后转至96孔板(每孔细胞数约1104)，含10% NBS的DMEM培养基培养2～3d，含0.2% NBS的DMEM培养基培养(同步化)24h，之后进入实验干预阶段。对照组与薯蓣皂苷元15μM组、20μM组、25μM组、30μM组，分别作用24h、48h和72h;采用MTT方法检测细胞活力(中国凯基，MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒)。Dilution Buffer将5MTT稀释成1MTT;每孔加1MTT 50μL，37℃孵育4h，MTT还原为甲臜;吸出上清液，每孔加DMSO 150μL溶解甲臜，平板摇床摇匀;酶标仪在550nm波长处检测每孔的光密度。

1.4 细胞增殖的检测

取对数生长期细胞，以每孔6000～10000细胞接种于96孔板，置培养箱培养过夜;根据实验需要进行药物处理，对照组与25μM薯蓣皂苷元作用6h、12h;采用EdU试剂盒(中国锐博，C00031 Apollo®567)检测细胞增殖，荧光显微镜下所有细胞核显示蓝色(Hoechst染色)，增殖中的细胞核显示红色(EdU染色)。

1.5 细胞周期检测

对照组与25μM薯蓣皂苷元作用24h、48h;细胞干预消化结束，PBS洗后离心，0.4mL PBS重悬细胞转至Tube中轻轻吹打(防止细胞破碎)，加50μL PI至终浓度为65μg/mL，冰浴中避光染色30min;300目(孔径40～50μm)尼龙网过滤，流式细胞仪检测细胞周期。

1.6 Cyclin D1、Cyclin B1蛋白表达水平检测

对照组与25μM薯蓣皂苷元作用6h、12h;细胞贴壁生长于直径4cm的培养皿，分组培养不同时间后提取蛋白，测定蛋白浓度，采用Western Blot检测Cyclin D1、Cyclin B1蛋白表达水平。抗体：小鼠单克隆β-actin一抗(Abcam，6926)，小鼠抗人Cyclin D1单克隆抗体(sc-8396)，兔抗人Cyclin B1单克隆抗体(Abcam，4138)，山羊抗小鼠-HRP标记抗体(ZB2305)购自北京中杉公司，小鼠抗兔-HRP标记抗体购自Cell Signaling公司。

1.7 统计学处理

所有实验重复3次以上，采用SPSS13.0统计软件包进行统计分析，计量资料用均数±标准差(χ±s)表示，组间均数比较采用方差分析与t检验。检验水平α=0.05。

2 结果

2.1 MTT结果

20μmol/L薯蓣皂苷元作用24h后，开始明显抑制宫颈癌Hela的细胞活力(P<0.05)，呈现量效和时效的影响，随着薯蓣皂苷元浓度增加和作用时间的延长，抑制效果明显增强。根据MTT结果和参考文献，选用25μmol/L浓度的薯蓣皂苷元进行以下实验。见图1。

图1 不同浓度薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞株Hela细胞活力的影响

2.2 EdU结果

EdU阳性细胞数(即增殖期细胞)在薯蓣皂苷元处理6h和12h后明显减少;作用12h EdU阳性细胞数减少更明显。见图2。

2.3 流式细胞仪检测细胞周期

25μmol/L薯蓣皂苷元阻滞细胞在G0/G1期，S期细胞减少(P<0.05);G2/M期细胞没有明显变化。作用24h和48h，两者之间无明显差异。见表1。

2.4 Western blot检测结果

25μmol/L薯蓣皂苷元作用6h后对Cyclin D1蛋白水平无明显影响;作用12h后降低Cyclin D1蛋白的水平;Cyclin B1蛋白水平无明显变化。见图3。

图3 薯蓣皂苷元对细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1的影响

3 讨论

子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，传统的治疗方案认为宫颈癌对化疗药物不敏感，仅在晚期和复发患者中将化疗作为综合治疗一部分。近年来大量基础和临床研究表明，化疗在宫颈癌的治疗中，对局部治疗手段不能控制的肿瘤周围、肉眼看不到的微小转移灶以及可能存在的全身亚临床转移有一定疗效，进而确定化疗在治疗宫颈癌的地位。化疗药物通过抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡起到抗肿瘤作用，因此寻找新的抑制宫颈癌细胞增殖或诱导凋亡的药物，成为治疗宫颈癌的新策略。

国外研究表明薯蓣皂苷元具有显著抗增殖和诱导凋亡作用。体内抗肿瘤的效用方面，Malisetty等[3]报道在啮齿动物结肠癌模型中，薯蓣皂苷元在起始、始发、进程中能够抑制结肠癌前病变，表明它可以有效推迟和终止结肠癌前病变的出现和发展。Raju等[4]研究也证实，薯蓣皂苷元阻止结肠癌变早期阶段的进程。此外，体外抗肿瘤效用方面，Shishodia等[5]检测体外的薯蓣皂苷元对60种人类肿瘤细胞系/株的细胞毒作用，结果显示薯蓣皂苷元的细胞毒作用可对抗NCI人类肿瘤的白血病、实体瘤等大多数细胞株。MTT结果提示薯蓣皂苷元抑制宫颈癌Hela细胞活力，15μmol/L薯蓣皂苷元作用24h后不能明显抑制细胞活力，20μmol/L薯蓣皂苷元作用24h开始明显抑制宫颈癌Hela的细胞活力，随着浓度增加抑制作用更加明显，呈现量效和时效作用;根据MTT和其他文献结果，采用25μM薯蓣皂苷元进行EdU实验及下一步实验，进一步证明其抑制宫颈癌Hela细胞株增殖的作用。

Cyclin D1在G1/S期转换过程中起重要作用，是细胞DNA合成以及通过G1/S期检测点的正向调控因子;Cyclin B1是典型G2/M期周期蛋白，促进细胞从G2期进入M期完成有丝分裂。研究结果表明薯蓣皂苷元阻滞细胞G0/G1期，减少S期细胞;25μmol/L薯蓣皂苷元作用6h对Cyclin D1蛋白水平无明显影响，作用12h和48h后Cyclin D1蛋白水平降低;薯蓣皂苷元对Cyclin B1蛋白水平影响无明显差异，与相关文献报道一致。

综上所述，薯蓣皂苷元能抑制宫颈癌Hela细胞株增殖，通过降低Cyclin D1蛋白表达而引起G0/G1期细胞阻滞，薯蓣皂苷元抑制增殖作用有明显的量效和时效影响。遗憾的是，由于时间所限制没有进行相关细胞信号通路的研究，我们将在下一步实验，重点研究薯蓣皂苷元影响宫颈癌Hela细胞株的信号通路。

[参考文献]

[1] McAnuff MA，Harding WW，Omoruyi FO，et al. Hypoglycemic effects of steroidal sapogenins isolated from Jamaican bitter yam. Dioscorea polygonoides[J]. Food Chem Toxicol，2005，43(11)：1667-1672.

[2] Turchan-Cholewo J，Liu Y，Gartner S，et al. Increased vulnerability of ApoE4 neurons to HIV proteins and opiates： protection by diosgenin and L-deprenyl[J]. Neurobiol Dis，2006，23(1)：109-119.

[3] Malisetty VS，Patlolla JMR，Raju J，et al. Chemoprevention of colon cancer by diosgenin， a steroidal saponin constituent of fenugreek[J]. Proc Amer Assoc Cancer Res，2005，46：2473.

[4] Raju J，Patlolla JM，Swamy MV，et al. Diosgenin， a steroid saponin of Trigonella foenum graecum (Fenugreek)， inhibits azoxymethane-induced aberrant crypt foci formation in F344 rats and induces apoptosis in HT-29 human colon cancer cells[J]. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2004，13(8)：1392-1398.

[5] Shishodia S，Aggarwal BB. Diosgenin inhibits osteoclastogenesis， invasion， and proliferation through the downregulation of Akt， I kappa B kinase activation and NF-kappa B-regulated gene expression[J]. Oncogene，2006，25(10)：1463-1473.

(收稿日期：2011-08-01)

耐药细胞生物学论文范文第6篇

为加强多重耐药菌(MDRO)的医院感染管理，有效预防和控制多重耐药菌在医院内的传播，保障患者安全，特制定如下措施：

一、监测范围

包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐碳青霉烯类肠杆菌(CRE)、耐万古霉素肠球菌(VRE)、耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(CRABA)、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌(CRPAE)等。微生物实验室应加强对多重耐药菌的检测及其对抗菌药物敏感性的监测，根据监测结果指导临床对多重耐药菌医院感染的控制工作。

二、 建立多重耐药菌的监测、报告

1、临床科室 应及时送检相应的病原学标本(有样必采)并追踪检验结果，接到“多重耐药菌株”的报告后，立即报告科主任、护士长，采取相应的预防控制措施。如诊断为医院感染的，填写“医院感染报告卡”，报感染管理科。

2、微生物实验室检测到多重耐药菌株，应立即电话通知所在科室，并及时发出书面报告，在报告单上签写“多重耐药菌株，请隔离”的字样，同时电话通知医院感染管理科。

3、医院感染管理科 接到微生物实验室的报告后，立即到科室进行流行病学调查，指导科室做好接触隔离和预防控制措施。

4、感染耐药菌株的病人如需手术，应在《手术通知单》及《麻醉通知单》上标注“多重耐药菌感染”字样，提前一天通知手术室，并在指定手术间实施手术，术后严格消毒;

5、可疑发生医院感染暴发或严重后果的医院感染时，感染管理科应立即向分管院长报告。

三、控制措施

临床科室对MDRO患者应做好病人一览表、病历卡及床旁标记，由科主任和护士长共同负责病区内的MDRO患者的接触隔离措施的落实情况，相关医务人员应积极配合，并做好病人及家属的相关知识的健康宣教工作。

1、临床医生下达隔离医嘱，护士执行隔离医嘱并填写多重耐药菌消毒隔离实施记录表。

2、应对多重耐药菌感染患者和定植患者实施隔离措施，首选单间隔离，也可以将同类多重耐药菌感染者或定植者安置在同一房间。隔离病房不足时才考虑进行床边隔离，不能与气管插管、深静脉留置导管、有开放伤口或者免疫功能抑制患者安置在同一房间。当感染者较多时，应保护性隔离未感染者。

3、设置隔离病房时，应在门上挂接触隔离标识牌，防止无关人员进入。

4、进行床边隔离时，在床栏上挂接触隔离标识牌，以提醒医务人员及家属。当实施床边隔离时，应先诊疗护理其他病人，MDRO感染病人安排在最后进行。

5、严格执行手卫生，离开隔离病房前，接触污染物品后，摘除手套后洗手和/或手消毒。

6、在实施诊疗护理操作中，有可能接触患者的伤口、溃烂面、黏膜、体液、引流液、 分泌物、排泄物时，应当戴手套。预计与病人或其环境如床栏杆有明显接触时，需要加穿隔离衣。当可能产生气溶胶的操作(如吸痰或雾化治疗等),医务人员还应当戴上标准外科口罩和防护眼镜。并在离开病人床旁或房间前脱去手套和隔离衣至黄色垃圾袋中。脱去手套后必须进行洗手和(或)使用速干手消毒剂。

7、对于非急诊用仪器(如血压计、听诊器、体温表、输液架)等应专用。其他不能专人专用的物品(如轮椅、担架)，在每次使用后必须消毒。

8、进行床旁诊断(如拍片、心电图)的仪器必须在检查完成后用消毒剂进行擦拭。

9、如病人需离开隔离室进行诊断、治疗，都应先电话通知相关科室，以便他们做好准备， 防止感染的扩散。在把该病人转送去其他科室时，必须由一名工作人员陪同，并向接收方说明对该病人应使用接触传播预防措施。接收部门的器械设备在病人使用或污染后同样应该进行清洁消毒。

10、病房应当固定使用保洁用具进行清洁和消毒，对患者经常接触的物体表面、设备设施表面，应当每天进行清洁和擦拭消毒。使用过的抹布、拖布必须消毒处理。

11、注意抗生素的合理使用，认真落实《抗菌药物临床应用指导原则》，根据细菌培养和药敏试验结果正确、合理使用抗感染药物，减少和延缓耐药菌的产生。