刺五加繁殖及栽培技术

刺五加繁殖及栽培技术（精选4篇）

刺五加繁殖及栽培技术 第1篇

关键词：黑腹果蝇,短柄五加,多糖,冷/热胁,寿命,死亡率,繁殖力

短柄五加 (Acanthopanax brachypus) 为五加科五加属药食两用植物, 世界仅中国西北部黄土高原区有分布, 属我国特有濒危珍稀灌木[1]。短柄五加具有健脾益气、补肾宁心、舒筋活络之功效, 用于治疗体虚乏力、腰膝酸软、阳痿、失眠多梦、健忘、风寒湿痹等疾病。其根、茎和叶已用于多种疾病治疗[2], 可作刺五加替代品。目前, 对其根茎化学成分[3,4,5,6]、生殖生物学和生态学方面已有相关研究报道[7]。

多糖是五加属植物重要药效成分之一[8]。多糖是通过糖苷键连接成的高分子聚合物, 在生物体内具有重要和特殊的生理活性。近年, 逐渐发现多糖具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗病毒、抗氧化、抗突变、抗衰老等药理活性, 且安全低毒, 现其已为开发药品和保健品的研究重点和热点之一[9]。目前, 短柄五加果实多糖相关研究在国内外报道较少, 其药理活性不明。黄土高原子午岭林区为短柄五加天然原产地, 野生资源丰富, 果实产量高, 但其开发利用较少。因此, 本研究以果蝇为动物模型研究短柄五加果实多糖对果蝇寿命、生殖力和冷/热胁迫耐受力的影响, 为短柄五加果实多糖药理活性和应用开发提供理论指导和基础数据。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂

短柄五加果实多糖 (本实验室自制) 、野生型黑腹果蝇 (Drosophila melanogaster) (取自陇东学院生命科学与技术学院遗传与分子生物学教学实验室) 、丙酸、乙醚为分析纯。玉米粉、酵母膏、琼脂、白砂糖为食品级。

1.2 仪器与设备

MGC-300A型智能型光照培养箱, 北京中科浩宇科技发展有限公司;DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱, 上海一恒科技有限公司;BS-223S电子精密天平, 北京塞多利斯仪器系统有限公司。

1.3 果蝇实验

1.3.1 基本培养基和多糖培养基配制

基本培养基采用琼脂玉米培养基[10]:玉米粉28g、白砂糖22g、水150ml, 混匀加热至糊状;琼脂2.5g加入100ml水中, 加热溶解, 倒入玉米糊中, 搅匀冷却至室温, 加酵母粉2.5g, 丙酸2ml, 搅拌混匀, 分装至奶瓶中即可。

多糖培养基:在基本培养基中用短柄五加果实多糖溶液, 制成0.01%、0.05%、0.2%、1%四个浓度多糖培养基[11]。

1.3.2 果蝇生殖力测定

果蝇在羽化后8h内收集, 用乙醚麻醉后区分雌雄。将果蝇分5组, 每组5支试管, 每支试管5对亲本果蝇, 分别置于基本培养基 (对照) 和多糖培养基 (多糖浓度为0.01%、0.05%、0.2%、1%) 。在温度25℃, 相对湿度50%~65%, 光照时间为12h/d条件下培养。待培养果蝇瓶内有蛹出现时, 即将亲本果蝇转至新鲜培养基, 统计子代果蝇数目, 直至亲本果蝇无子代产生。

1.3.3 果蝇耐冷/热胁迫能力测定

将果蝇分别在普通培养基 (对照) 和多糖培养基 (多糖浓度为0.01%、0.05%、0.2%、1%) 中培养7d。将5组果蝇按每组5支试管, 每支试管分装50只, 将其放入培养箱, 在38℃条件下处理2h, 取出置室温, 将另一只试管用软管口对口连接 (软管用针扎孔通气) , 水平放置, 一端置日光灯下, 一端用黑布遮盖, 12h后统计黑布遮盖试管中果蝇死亡数目, 计算死亡率。

将果蝇分别在普通培养基 (对照) 和多糖培养基 (多糖浓度为0.01%、0.05%、0.2%、1%) 中培养7d。将5组果蝇按每组5支试管, 每支试管分装50只, 将其放入冰箱, 在0℃条件下恒温培养3h, 取出置室温, 将另一支试管用软管口对口连接 (软管用针扎孔通气) , 水平放置, 一端置日光灯下, 一端用黑布遮盖, 12h后统计黑布遮盖试管中果蝇死亡数目, 计算死亡率。

1.3.4 果蝇寿命测定

收集8h内羽化果蝇, 乙醚麻醉后区分雌雄各1500只, 分别在基本培养基上培养35d。然后将果蝇转入基本培养基 (对照) 和多糖培养基 (多糖浓度为0.01%、0.05%、0.2%、1%) 中培养, 每个浓度组雌、雄果蝇各200只, 分装在10支试管中, 每管20只。在温度25℃, 相对湿度50%~65%, 光照时间为12h/d条件下培养。果蝇放入培养基后实验即正式开始, 每2d记录果蝇存活数、死亡数, 每4d更换一次培养基, 一直观察到果蝇全部死亡。统计时将粘死、逃逸等意外造成死亡的果蝇数去除。达到半数果蝇死亡天数即为半数死亡天数, 全部果蝇存活总天数的均数为平均寿命, 最后20只果蝇寿命均值为平均最高寿命。

2 实验结果

2.1 短柄五加多糖对果蝇寿命影响

表1可知, 处理组果蝇半数死亡时间均高于对照组, 经统计学检验, 0.1%~1%多糖处理有显著性差异 (P<0.05) , 其中1%多糖处理雌果蝇组半数死亡时间比对照高出5d, 提高9.26% (P<0.01) ;雄果蝇组半数死亡时间比对照高出4d, 提高8.7% (P<0.01) 。平均寿命随多糖浓度逐渐升高而增加;1%组雌雄果蝇平均寿命比对照组长且差异显著 (P<0.05) 。雌蝇和雄蝇的最高寿命, 随多糖浓度的增加而逐渐升高;0.05%~0.1%组雌雄果蝇的最高寿命约比对照组 (最高寿命约为83.6d) 稍长, 且无显著性差异;0.2%~1%组雌雄果蝇最高寿命比对照组长且差异显著 (P<0.05) ;多糖处理组果蝇平均寿命和最高寿命均比对照组显著延长, 各组中雌蝇寿命均比雄蝇长;高浓度处理组雌雄蝇平均寿命和最高寿命均比低处理长, 其中1%组雌雄蝇寿命最长。

2.2 短柄五加果实多糖对果蝇繁殖力的影响

由图1可知, 不同浓度果实多糖处理果蝇, 其生殖力均增强, 其变化趋势呈类抛物线形。对照组子代总数为1579只;0.01%处理组子代总数为1718只, 比对照增加8.8%;0.05%处理组子代总数为2173只, 比对照增加37.6%;0.2%处理组子代总数为2127只, 比对照增加34.7%;1%处理组子代总数为1863只, 比对照增加17.9%。其中0.05%处理组子代数目最高, 再随多糖浓度增加, 子代果蝇数目的增加率呈下降趋势。表明在多糖浓度0.01%~1%, 果实多糖均可提高果蝇繁殖力, 其中0.05%为果蝇繁殖力增强的最适浓度。

注:与对照组比较, *P<0.05, **<0.01;每组果蝇雌雄各200只。

2.3 短柄五加果实多糖对高温胁迫下果蝇死亡率的影响

由图2可知, 在38℃条件下处理2h, 不同浓度果实多糖饲养后的果蝇, 随处理浓度逐渐增加, 果蝇死亡率变化趋势呈先低后高走势。对照组果蝇死亡率为72%。0.01%处理组果蝇死亡率为64%, 比对照降低11.1%;0.05%处理组为56%, 比对照降低22.2%;0.2%处理组为64%, 比对照降低11.1%;1%处理组为68%, 比对照降低5.7%。其中0.05%处理组死亡率最低 (56%) , 再随多糖浓度增加, 果蝇死亡率降幅变缓。表明在果实多糖浓度0.01%~1%, 果实多糖可以提高果蝇耐高温能力, 其中0.05%为果蝇耐高温最适浓度。

2.4 短柄五加果实多糖对低温胁迫下果蝇死亡率的影响

由图3可知, 在0℃恒温处理3h条件下, 随多糖浓度增加, 果蝇死亡率变化呈先低后高趋势。对照组果蝇死亡率72%。0.01%处理组果蝇死亡率50%, 比对照降低30.6%;0.05%处理组果蝇死亡率46%, 比对照降低36.1%;0.2%处理组为64%, 比对照降低11.1%;1%处理组66%, 比对照降低8.3%。其中0.05%处理组死亡率最低 (46%) , 再随多糖浓度增加, 果蝇死亡率呈上升趋势, 但比对照低。表明在果实多糖浓度0.01%~1%, 果实多糖可以提高果蝇的耐低温能力, 其中0.05%为果蝇耐低温最适浓度。

3 讨论

短柄五加果实无毒, 口感好, 营养丰富, 极具开发价值, 但因野生数量和分布少等原因, 其基础研究和产业开发相对滞后。本文以果蝇为实验模型研究短柄五加果实多糖药理活性, 为后续哺乳动物实验研究提供研究资料。果蝇作为模式生物已有百年研究历史, 因其体型小, 易饲养, 繁殖率高, 世代短, 基因组小, 突变性状多, 实验处理方便等优点, 广泛用于遗传学、分子生物学、发育生物学等领域。果蝇在生长发育、生理功能、代谢途径等与哺乳动物基本相似。超过60%人类疾病基因在果蝇中具有同源基因。因此, 果蝇作为肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病等人类疾病机制研究重要模型及药物开发与靶药筛选中将发挥重要作用[12]。

果蝇是变温动物, 其体温维持依赖环境温度, 为适应异常高/低温, 果蝇体内形成了一整套适应机制。非生理高/低温会诱导果蝇产生热休克反应[13]。一般HSPs (热休克蛋白质家族) 与胁迫环境下产生蛋白结合, 防止其错误折叠;同时维持变性蛋白可溶状态, 并促使其复性, 使果蝇具耐热/寒性[14]。邱璐等[15]研究发现维生素B1、B2、C增加果蝇体内HSPs含量, 使其具有耐高温能力。本研究表明:随短柄五加果实多糖浓度增加 (0~0.05%) , 果蝇耐高/低温能力逐渐增强, 但随浓度继续增高, 果蝇死亡率降幅变缓。推测可能为低浓度多糖诱导提高其HSPs含量, 增强果蝇耐胁迫能力, 而高浓度可能因口感、多糖杂质等原因导致其死亡率降幅变缓, 其原因有待进一步研究。

准确评价延缓衰老效果最好的方法是动物生存试验, 而果蝇是研究抗衰重要模式动物[16]。在果蝇寿命试验几个指标中, 平均寿命是最重要指标, 为综合药效的反映;半数死亡天数反映药物对体弱果蝇延寿效果;最高寿命反映药物对强壮果蝇延寿效果。多糖对果蝇寿命影响研究较多, 王菊凤等发现蛹虫草多糖能显著提高果蝇种群期望寿命[17], 郑亚凤等发现灰树花多糖能延缓果蝇衰老, 增加寿命[18]。由于生物衰老原因和过程十分复杂, 多糖延缓衰老主要和其清除自由基, 提高超氧化物酶岐化酶 (SOD) 活性, 有效降低蛋白质氧化损伤有关[19]。本研究表明随多糖浓度增加果蝇半数死亡天数, 平均寿命, 平均最高寿命逐渐增加, 同时结合其能增加果蝇耐高/低温能力, 推测短柄五加果实多糖可通过提高果蝇体内抗氧化水平和HSPs含量来延缓衰老。

繁殖力强弱是衡量动物繁殖能力高低的指标。研究表明果实多糖能增强果蝇繁殖力, 其增强效果与剂量之间呈非线性关系。当多糖浓度增加到0.05%, 子代果蝇数量较对照极显著增加 (比对照增加37.6%) , 后随剂量升高, 增殖幅度逐渐减小, 当浓度1%时, 子代果蝇数量增幅降低 (比对照增加17.9%) , 其具体原因尚待进一步研究。

紫花苜蓿的栽培技术及繁殖方式 第2篇

分为春播、秋播。温泉县春播一般在3月下旬歹5月初，地温稳定在5℃以上即可播种。秋播一般在8月底9月初，使苜蓿在冬季来临前有60天左右的生长时间。秋季播种后土壤墒情好，杂草危害轻，出苗率和成活率较高，是比较理想的播种时间。

2、播种方式方法

播种方式：可单播，也可套播(一般在小麦浇两遍水后立即套播)，也可混播(与其他禾草品种混播)。

播种方法：

一是人工撒播，撒播是常用的一种简便播种方法，多用于小块地、草地补播、水土保持的坡地上，在作物间套种苜蓿时也用撒播。人工撒播时加细沙进行，种子与细沙比例1：68，先灌水后撒播，一般将种子撒在地面后，用钉耙或树枝在地面上搂一遍，起到浅覆土的作用，在雨水多的条件下出苗良好。撒播的缺点是深浅不一致，撒种不均匀，出苗不整齐，而且无行距，难以进行中耕锄草等管理;

刺五加育苗及造林技术 第3篇

1特征特性

落叶乔木,多分枝,通常高1~3m;一至二年生枝常密生向下的针状刺,老枝或花序附近的枝生刺较少或近五刺。叶为掌状复叶,互生;小叶椭圆状倒卵形,长5~15cm,宽3~8cm边缘有锐利的重锯齿,上面深绿色,散生微小粗毛或无毛, 下面淡绿色,被糙伏毛,脉上显著;小叶柄及叶柄均生有淡褐色糙毛或有细刺。伞形花序,具多花, 排列成球形,一簇或多簇生于枝端;花瓣5枚,紫黄色;果为浆果状 核果,近球形,紫黑色,径6~ 9mm,6至7月为开花期,9月为果熟期。性耐阴,喜湿润和较肥沃的土壤,多散生于针阔叶混交林或阔叶杂木林下。光照过强、空气干燥不利于其生长与结实。

2育苗技术

2.1实生苗

2.1.1种子处理及催芽于9月中、下旬采集果实,调制出种子,与2~3倍细沙拌匀,温度以手握成团撒开即散为宜,装入编织袋,放于17℃ 左右环境,保持湿润,经30d后降温到10℃左右,每隔10~15d在阳光下晒1次,增温、保湿,然后再放置原处。当室外温度降到零下时,连同口袋一起埋入室外沙堆中,翌年4月初取回,放在5℃条件下保存[2]。 进入5月,经常日晒,喷水保湿,待20%~30%种子有裂口即可播种。

2.1.2整地苗床秋季耕翻深度在25~30cm, 耙平;床土消毒,施2.25kg·hm-2甲拌磷颗粒;次年春季作床,规格1m×(10~20)m×0.1m[3]。

2.1.3播种育苗播种采用高床精细条播,播种量6~10g·m-2,混细沙播种,细沙与泥炭土混合覆盖。苗木出土后要搭设遮荫棚防止日灼,或采用遮阳网日覆。当苗高5~10cm,第2年可换床移栽,再培育1a成为S1-1级苗(地径0.5cm,苗高35cm,根长15cm),苗高30~40cm可上山定植。

2.2无性繁殖

2.2.1扦插繁殖1硬枝扦插:用一至二年生枝条作插穗。于3月以前采集一至二年生茎干、枝条,捆好后埋于雪中或苗木窖内,保持湿润,待4月中旬扦插。2插床:采用沙基或直接插于苗床上。插前插床要灌足底水,用地膜覆盖增温保湿, 土温高于空气2~3℃是生根的有利条件。在插前2d完成做床并覆膜。3扦插:将窖藏的枝条取出,用清水洗净,剪成10cm长度要整齐一致, 用ABT生根粉一号100mg·kg-1,浓度溶液蘸根, 浸蘸深度2~3cm,时间4~6h,取出后即可扦插。扦插株距为5cm,行距为8cm。扦插深度为9cm,芽萌发后要及时遮荫,并每天喷水2~3次。 4嫩枝扦插:用当年萌条作插穗,在6月底至7月初扦插。插穗必须早晨采,当日上午剪段处理后即扦插。插床用洁净河沙或河沙加泥炭土,并配有全光喷雾设备,在全光下扦插。穗长10cm,上部保留一片叶。插前用1 000μg·g-1浓度的一号ABT生根粉蘸根30s。经40d后插穗生根,移植到大地,并遮荫、浇水,加快根系生长。嫩枝扦插当年只能生根, 需培育2a才能上山造林,且成本较高[4]。

2.2.2分株繁殖刺五加根蘖力强,每年从母株根部萌发出许多萌条,将这些苗挖出定植,比扦插苗简单易行,而且成活率高、生长快、结实早。挖根蘖苗时,尽可能多采远离母株的苗,少伤母株根系。

2.3压条繁殖

春季选用刺五加母株的旺盛萌条,在节间靠近芽的下方,用利刀刻一斜舌状缺口,将萌条全弯曲压伏于地面,用土将刻伤处理好踏实,固定好母条,再将全条埋土,土厚5cm左右,经50~60d可长成健壮根系。当年9月中、下旬与母株分离定植。此法简便易行,适用于天然刺五加林的补植与扩建。

3人工林栽培技术

3.1林地选择与整地

应选用针阔混交林的过伐林地、疏林地,上层林冠郁闭度0.3~0.5最佳;坡向以半阳坡、阴坡、 半阴坡均可,土壤肥沃,排水良好。造林方式可采用带状双行,即在林地 上割2 m宽的带,保留1m,在2 m宽带内栽 植双行,行间1 m,株距1m,栽植密度6 600株·hm-2。采用穴状整地,穴面50cm×50cm,疏松土壤,清除杂物。植苗要精心,深浅适宜,培土细,踩实。

3.2抚育

黄鲷的生物学特性及人工繁殖技术 第4篇

综述了黄鲷的形态、生态、生长及繁殖等生物学特征,报道了黄鲷亲鱼选择培养及人工促熟催产技术,胚胎发育、仔鱼的.生长发育情况和苗种培育等有关技术.研究结果表明:注射LHRH-A,和LHRH-A2+DOM催产后,经营养强化培育的野生黄鲷可有规律地连续产卵.产卵一般在10:00～16:00时进行,产卵期长达45～57 d.在培育水温20～22 ℃、盐度28～30时,受精卵经35～37 h完成胚胎发育,孵出仔鱼,孵化率为89%,孵出的仔鱼活泼健壮.

作 者：陆建学 夏连军 辛俭 钟俊生 作者单位：陆建学,夏连军(中国水产科学研究院东海水产研究所,农业部海洋与河口渔业重点开放实验室,上海,90)

辛俭(浙江省海洋水产研究所,浙江舟山,316100)

钟俊生(上海水产大学生命科学与技术学院,上海,200090)