控制病原范文

控制病原范文（精选11篇）

控制病原 第1篇

1 典型病例

1.1 病例1

河套某养鸡户, 15日龄的蛋鸡稀便, 粪便颜色如常, 鸡群整体精神萎靡, 吃食量减少, 并且有死亡, 死亡的鸡脱水严重, 剖检没发现严重病变, 肠道有卡他性炎症。取肝脏, 血作细菌培养, 37℃24h普通琼脂培养无细菌生长, 用恩诺沙星和抗病毒的药物治疗无效。经调查该鸡场自己配料, 添加了3%的盐, 饮用自己的地下水, 因靠海边, 因而比较咸, 造成盐分吸收过多, 引起稀便。

1.2 病例2

胶州某养鸡场, 140日龄蛋鸡, 开产20多天, 产蛋率20%左右, 水样稀粪呈现喷射状, 无绿色或黄色异常表现。粪便中混有未消化的饲料颗粒, 鸡群精神良好, 采食量未见减少, 产蛋率也在缓慢上升, 控制给水量, 稀便症状有所缓解。饮水中添加乳酸诺氟沙星治疗3d, 没见效果。经调查, 为了使鸡群早到产蛋高峰, 在120日龄时, 改用高产鸡料后就陆续发现有稀便症状。采取从高产料调成过渡料, 水中添加肾肿解毒药, 料中添加0.2%的土霉素粉4d, 几天后粪便逐渐恢复正常, 没有造成大的损失。

1.3 病例3

胶州某养鸡场, 2010年8月份, 一群300日龄左右的产蛋鸡, 发现稀便现象, 粪便发绿, 随即产蛋率下降, 从92%下降到84%, 采食量下降, 精神萎靡。经调查, 发现饲料中的玉米, 因天热潮湿而出现了霉变, 养殖户没有舍弃, 粉碎后掺和到好玉米里使用, 不几天, 鸡群就发生了稀便症状。后换料, 停喂霉变的玉米, 为了防止出现类似情况, 饲料中添加1000g/t诺霉脱, 饮水中添加电解多维, 几天后鸡群好转。

2 病理剖检和实验室诊断

2.1 病理剖检

取稀便严重的鸡, 宰杀后剖检见肠道有较轻的卡他性炎症, 肾脏肿大有尿酸盐沉积, 卵巢发育迟缓, 输卵管发育不良;肝脏正常, 无腹膜炎及肝周炎等细菌性感染的症状。

2.2 实验室诊断

无菌取肝脏、脾脏进行营养琼脂麦康凯琼脂培养, 温箱中培养24h无细菌生长;取发病鸡血清进行新城疫、减蛋综合征、禽流感等血凝抑制抗体检测, 凡是正常免疫的鸡群其抗体水平都在正常保护范围以内;取肠道、气管、卵巢、肝脏、脑等组织经处理后, 通过鸡胚进行病毒 (新城疫、传支、流感等) 分离, 尿囊液盲传2代以上都未出现鸡胚出血死亡, 卷曲胚及尿囊液的血凝性现象, 说明鸡群无上述所怀疑的病毒病发生;进行水质化验或饲料中盐分含量化验, 病例1表现水质太咸, 钙、镁等超标、饲料中盐分含量超标;病例2饮水和饲料都没有发现异常;病例3明显发现饲料原料出现霉变。

2.3 综合诊断

病例1稀便的原因是鸡群由于饲料和饮水供给的盐分过高, 为了维持身体的盐分的平衡, 鸡体被动需要多饮水来稀释, 从而水分吸收过多, 造成鸡只稀便。病例2是蛋鸡在开产阶段, 由于换料不合适, 造成鸡群蛋白质、贝壳粉等添加过多, 鸡群不能充分利用, 并且鸡群从不下蛋到开始下蛋是一个生理变化过程, 有很强的应急, 多方面原因引起稀便, 也称为生理性稀便。该病的发生往往是由于过早使用蛋鸡高产期饲料, 过量的钙质损害了鸡的肾脏或加重肾脏的负担, 引起尿酸盐代谢失调造成的。自配料的养鸡场和使用小型饲料加工厂生产的饲料更容易发生该病。目前开放式鸡舍蛋鸡开产普遍较早, 一般在120日龄前后开始产蛋, 一些养鸡场为了让鸡群尽快达到产蛋高峰, 没使用育成鸡到蛋鸡阶段的过渡饲料, 而是开产后或达到10%产蛋率时就供给蛋鸡高峰饲料。在这个阶段鸡群有90%以上的鸡仍未开产, 饲料中的钙质以较高的吸收率吸收进入血液, 随后过量的钙质通过肾脏排泄。当超过鸡肾脏的排泄能力时, 形成了尿酸盐沉积。这时肾脏将通过加快水的排泄来缓解肾脏的尿酸盐沉积, 此时发生的水样粪便实际上是尿液聚集在泄殖腔与粪便混合后的排泄物。随着鸡成熟后开始产蛋钙的需求量增大, 鸡体对钙的吸收和消化代谢逐渐适应, 此时症状才得以缓解。这一病理过程形成后影响鸡的正常生产性能。水是鸡体代谢的重要溶剂, 因为产蛋鸡产蛋需要加大贝壳粉或石粉的添加量, 以满足蛋壳形成所必需, 在钙磷的吸收过程中, 需要大量的溶剂特别是水溶剂, 为了更多地吸收钙磷等使鸡代偿性地增大了水的摄入量, 在其它季节水的摄入量小, 而夏季为了防暑降温鸡的饮水量更大, 双重因素则导致鸡的饮水量更多。鸡饮过多的水, 不能正常吸收, 则直接由肠排出或通过肾脏代谢排出, 出现生理性稀便。在开产时贝壳粉和石粉的量增加及颗粒太大, 会机械性刺激肠道的蠕动加快, 也能导致生理性稀便。

3 综合防治措施

对不同发病的地区及不同的养鸡场要找到病因, 对因和对症治疗。

3.1 生理性稀便

夏季适量控制饮水, 由于缺水可影响产蛋量, 譬如缺水可使产蛋量下降, 所以必须供给蛋鸡充足的饮水, 但要有限度, 不可任鸡狂饮, 以免加重稀便发生。刚开产时喂一段时间的育成至高产蛋期的过渡饲料, 一般从产蛋率10%开始至产蛋率30%期间喂过渡饲料;产蛋率达到30%以上喂高产期饲料, 使钙磷等慢慢增加, 让鸡体对其有一个适应的过程。刚开产时贝壳粉或石粉粒不要太大, 以免加重对肠道的剌激, 使其蠕动加快, 出现稀便。在用药物控制方面可采用土霉素粉拌料, 水中加肾肿解毒药, 饲料中加微生态制剂如益生素, 在饲料中加腐植酸钠健胃、收敛或活性炭粉、或矽碳银等对水分进行物理性吸附, 直到止泻。尽量降低开产时的应激, 减轻发病症状, 减少损失。

3.2 盐碱地地区咸水所致的稀便

特别是夏季, 稀便会更严重。因此有条件的要给鸡饮用自来水, 若不能供给自来水, 可在水中添加有机酸复合制剂, 添加多加电解多维, 并且减少饲料中贝壳粉、盐的含量。

3.3 饲料中高盐因素引起的稀便

一般是因为饲料中使用了劣质高盐鱼粉, 高盐配方引起鸡的过量饮水所致, 所以要立即停用劣质高盐鱼粉。根据化验饲料中盐分的量决定添加盐分的比例, 一般添加3%, 但若发生高盐所致稀便时, 要适当减少盐分添加量, 更换优质低盐进口鱼粉。

3.4 霉菌性稀便

停用发霉玉米及豆粕、豆饼或骨粉等劣质饲料原料, 同时在饲料中添加硫酸铜或制霉菌素等进行处理会收到良好效果。

病原菌分离培养总结 第2篇

一、基本原理

植物病原菌的分离培养，是植物病理实验室工作中的基本技能。为了获得某微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条件要求不同，而供给它们适宜的生活条件，即让病原菌生活在适宜的培养基上，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而得到纯菌株。

植物病原真菌的分离方法主要有组织分离法和稀释分离法两种。最常用的方法是组织分离法，而稀释分离法主要用于病组织上产生大量孢子的病原真菌的分离。

为了获得分离菌的纯培养，必须要进行分离菌的纯化，纯化的方法类似于分离工作中采用的稀释分离法或划线分离法。

二． 病原真菌的分离培养（花生褐斑病为例）

1.分离的准备工作

（1）分离材料准备：花生褐斑病叶片：病斑圆形或近圆形暗褐色、黑褐色，淡黄色晕圈。背面有许多黑色小点，呈同心轮纹状排列。

（2）培养基的准备: PDA培养基,加热熔化，紫外灭菌后倒板； （3）分离工作仪器与用品：超镜工作台、培养箱、无菌培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、接种铲(针)、70％酒精、0．1％升汞、酒精灯、火机、记号笔、橡皮筋套、可调式电炉等。（升汞是剧毒药物，在操作时应特别小心）。

2.组织分离法

（1）工作前用肥皂洗手，无菌操作前还要用70％酒精擦拭双手；在使用无菌操作间时，呼吸要轻，不要说话。

（2）酒精灯放入中间合适位置，点燃后不要在移动，保证火焰周围无菌环境；

（3）取花生褐斑病的症状典型病叶(或其他分离材料)，选择典型的单个病斑，用剪刀或解剖刀从病斑边缘(病健交界处)切取小块病组织数块。（选择新患病的组织作为分离的材料，可以减少腐生菌混入的机会。腐生菌一般在发病很久而已经枯死或腐败的部分滋生，因此，一般斑点病害应在临近健全组织的部分分离。）（4）表面消毒：用菌培养皿一次准备流程（75%酒精—0.1%升汞—无菌水—无菌水—无菌水），将病组织放人70％酒精中浸3—5s后，按无菌操作法将病组织移人0．1％升汞液中分别表面消毒1 min左右（如植物组织柔嫩，则表面消毒时间宜短；反之则可长些），然后放入灭菌水中连续漂洗三次，除去残留的消毒剂。

（5）用无菌操作法将病组织移至平板培养基上，每皿内放3-5块。（在将病组织小块移放到平板表面之前，应将其在无菌吸水纸上吸去多余的水，以大大减少病组织附近出现细菌污染）。

（6）将培养皿倒置放人25 ℃左右恒温箱内培养。一般3—4d后观察待分离菌生长结果；若病组织小块上均长出较为一致的菌落，则多半为要分离的病原菌。

（7）除根据菌落的一致性初步确定长出的菌落是否目标菌外，还要在显微镜下检查，并且根据保湿培养的结果进一步确定；

（8）在无菌条件下，用打孔菌落边缘挑取小块移入培养基上，在25℃左右恒温箱内培养，数日后，观察菌落生长情况，如无杂菌生长，即得该分离病菌纯菌种，便可保存。

三． 病原细菌的分离培养（萝卜黑腐病为例）

1.分离的准备工作

（1）分离材料准备：萝卜黑腐病俗称黑心、烂心，该病是由细菌引起的病害。主要危害叶和根。幼苗期发病子叶呈水浸状，根髓变黑腐烂。叶片发病，叶缘多处产生黄色斑，后变“V”字形向内发展，叶脉变黑呈网纹状，逐渐整叶变黄干枯。病菌沿叶脉和维管束向短缩茎和根部发展，最后使全株叶片变黄枯死。萝卜肉质根受浸染后，透过日光可看到暗灰色病变；横切萝卜可看到维管束呈放射线状、黑褐色；重者呈干缩空洞，维管束溢出菌脓，这一点与缺硼引起的生理性变黑不同。

（2）培养基的准备:PDA，后划线纯化NB；

（3）分离工作仪器与用品：超镜工作台、培养箱、无菌培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、70％酒精、酒精灯、火机、记号笔、橡皮筋套、可调式电炉等。

2.黑腐病菌分离（1）工作前用肥皂洗手，无菌操作前还要用70％酒精擦拭双手；在使用无菌操作间时，呼吸要轻，不要说话。

（2）酒精灯放入中间合适位置，点燃后不要在移动，保证火焰周围无菌环境；

（3）取萝卜黑腐病块茎，用75 %酒精进行表面消毒；用灭菌解剖刀切去表面，并向内切取病组织，切成长条小块（2mm*3mm），用无菌操作法将病组织移至平板培养基上，每皿内放3-5块。（在将病组织小块移放到平板表面之前，应将其在无菌吸水纸上吸去多余的水，以大大减少病组织附近出现细菌污染）。

（4）将培养皿倒置放人28 ℃左右恒温箱内培养。一般3—4d后观察待分离菌生长结果；若病组织小块上均长出较为一致的菌落，则多半为要分离的病原菌。

（5）根据菌落的一致性初步确定长出的菌落，选择长出的三种菌落（黄、红、生防），分别在无菌条件下在NB培养基进行划线；在28℃左右恒温箱内培养，数经培养后出现的菌落在形态特征都趋于一致，并与典型描述的特征相一致时，即表明已获得纯培养；最好要经过连续三次单菌落的分离，才能确保纯化。（6）观察到的菌落特征：萝卜黑腐病菌，圆形，同心环状，内环呈金黄色，外围白色菌脓，湿润，随环隆起、凹陷，半透明，边缘不整齐。

四．资料查询其他分离培养方法

1.病原真菌 稀释分离法

(1)取灭菌培养皿三个，平放在湿纱布上，编号，并注明日期、分离材料及分离人姓名。

(2)用灭菌吸管吸取灭菌水，在每一皿中分别注入0．5～1．0ml。

(3)用移植环蘸一滴孢子悬浮液，与第一个培养皿中的灭菌水混合，再从第一个培养皿移三环到第二个培养皿中，混合后再移三环到第三个培养皿中。

(4)将熔化开冷却到45～50C的培养基，分别倒在三个培养皿中(为防止细菌污染，也可以向每个培养皿中事先加入1-2滴25％乳酸)，摇匀，凝固，要使培养基与稀释的菌液充分混匀。

提示：倒平板时的培养基温度一定要掌握好，过热易将病原菌烫死而使分离失败，过冷则倒入培养皿中后难以形成平板，而成为起伏不平的表面，不利于分离。为大体估计培养基温度，可将盛培养基的器皿靠在人手背上，如果手背感到烫但尚可以忍耐，则大体为45~50C。

(5)将培养皿翻转后置恒温箱(25℃)中培养，数日后观察菌落生长情况。

(6)挑菌。将培养后长出较为整齐一致的单个菌落分别挑取，接种到斜面培养基上，置25℃左右培养。待菌长出后，检查菌是否单纯，若有其他菌混杂，就要再一次进行分离纯化，直到获得纯株培养。

2.病原细菌

病原细菌的分离方法以稀释分离法和划线分离法为最常用。在进行分离之前，首先应对病组织材料进行细菌学初步诊断，即经过镜检确认有喷菌现象以后，才对该病组织作分离工作。稀释分离法是最经典的标准分离法，方法同上述真菌分离。

除去上述稀释分离法以外，较为方便的是划线分离法：

(1)预先把熔化好的肉膏蛋白胨培养基倒在培养皿中，凝成平板后，翻转放在30C恒温箱中2—4h，使表面无水滴凝结。也可凝成平板后直接使用。

(2)将病组织先用0．1％升汞表面消毒0．5--2min，再用无菌水换洗3次后，放在灭菌培养皿中的灭菌水中，用灭菌玻棒研碎，并让组织碎块在水中浸泡20—60min，让细菌释放到灭菌水中。

(3)用灭菌的接种铒(接种环)蘸取浸泡液在干燥的培养基平板表面划线，尽量不要把平板表面划破。划过第一批线后的接种环应放在火焰上烧灼．冷却后直接在第一批划线的末端向另一方向划线。灭菌后再划第三次线。

提示：划过第一批线后接种铒放在火焰上烧过这一步骤非常重要，这样做可以使第一批线和第二批线上的细菌数量相差很大。

(4)用玻璃铅笔在培养皿上写上分离材料、日期和分离者姓名后，翻转培养皿，放在26～28C恒温箱中培养。1—3d后观察有无细菌生长，在哪些地方有单菌落生长出来?其中的优势单菌落应为待分离菌形成的。

(5)仔细挑取病原菌的单菌落，并移植到斜面培养基上。同时，再把单菌落用灭菌水稀释成悬浮液作第二次划线分离，经培养后出现的菌落在形态特征都趋于一致，并与典型描述的特征相一致时，即表明已获得纯培养。最好要经过连续三次单菌落的分离，才能确保纯化。

五． 常用的几种典型的病原菌分离方法

1．斑点病原菌的分离。从病斑部分切取每边3—5mm的小块组织，在70％酒精中浸数秒钟后，移人0．1％的升汞水溶液中处理3—5rain，以灭菌水冲洗3次，移置培养皿的培养基中，然后培养。

2．维管束组织内病原菌的分离。从根茎维管束组织分离病菌，可先将寄主病部表面用70％酒精擦拭消毒，将表皮组织用灭菌的解剖刀削去，然后切取其中小块变色的维管束组织，用升汞或漂白粉液消毒后，用灭菌水冲洗几次，移置培养基面上。

3．根腐病病原菌的分离。根腐或基腐病的分离，由材料的大小决定。材料小的可仿照斑点病的分离法，材料大的则可以用维管束组织内病原的分离法。

4．肉质组织中病原菌的分离。多肉的根、茎及果实等，可以采用维管束组织内病菌分离法除去表面组织，切取小块病组织分离。如有杂菌感染可采用“直接接种”法，待出现症状后，用此法再行分离。

5．种子内病原菌分离。将整个种子或者种子的一部分进行表面消毒(升汞或漂白粉)，用灭菌水洗涤后，移置培养基上。

6．孢子分离法。能产生大量孢子的病菌如青霉素、链格孢等，则可配制成孢子悬浮液以稀释法或划线法分离之。

与病原体共存 第3篇

基因变异的存在，使生物有机会产生新的适应能力来参与竞争。变动的环境与变异的基因，使生命舞台上不断演出新的剧情，这场戏在自然选择和生存斗争两项规则支配下就能继续下去，无须假手神灵，也不需要生物本身具有明确的意识。为了行文的方便，人们会说生物“为了自己的利益如何如何变异”，必须注意这种有点人格化的表述只是对斗争与选择过程的一个简略说法，并不表示进化历程包含着生物的主观意愿。选择是自然的规律，生物个体不过混混沌沌、身不由己地卷入其中罢了。

病菌和病毒是人类的敌人。我们的国家正处于战争状态，对手是某种冠状病毒，我们必须赢得胜利。不过，病原体何以成为病原体?外伤、衰老、基因缺陷直接损坏我们机体的零件，由此产生的疾病比较容易理解。但某些微生物为什么要使我们生病?对付这些显微镜下才看得见的敌人，孙子兵法“知己知彼”的战术仍然是有用的。研究它们需要从这场战争中获得利益，进而分析其战略战术。有助于我们更好地对付它。

对微生物来说，我们的身体是居所、食物和传播中转站。它们并不是为毁灭我们或使我们痛苦而生的。只是自然选择偏爱那些善于生存、繁衍并尽可能广地传播的微生物，促使它们演化出了种种手段，我们也被牵连了进来。有时候人体本来不是某种微生物必须的宿主和传播媒介，却在它偶尔捞过界时做了牺牲品。比如历史上总共杀死了约2亿人、一次大发作就能抹去欧洲1/3的人口、在人类对中世纪的记忆中留下“黑死病”恐怖回忆的鼠疫，它的病原体鼠疫杆菌主要生活在老鼠身上，通过跳蚤在老鼠之间传播。不幸的是跳蚤还要咬人，人染上病之后，又有新的跳蚤来帮助传播，肺炎型鼠疫更可以通过人咳嗽的飞沫传播给其他人，于是灾难开始了。

有一个令人啼笑皆非的事实：传染病给我们带来的生理痛苦，并不是病原微生物的目的，只是无心的结果。在这些痛苦中，有的是微生物为了增强自身传播能力而采取的手段的副产品，比如拉肚子；有的是机体自身的防卫措施，比如发热(为了把微生物烤死)；有的对微生物和人体双方都有好处，比如咳嗽和打喷嚏；还有的对双方都没有好处，比如机体组织的损坏。至于导致寄生的宿主死亡，一般说来对微生物本身并没有好处，甚至是一种自拆墙脚的行为，除非这种微生物本来就是靠宿主死后被别的动物吃掉而传播的。

除了母婴垂直感染这样恶劣的做法，微生物想要从一个人传染给另一个人，通常要利用中间渠道。就像花粉借助蜜蜂的翅膀，微生物也借助翅膀来传播，比如蚊子和苍蝇，当然还有跳蚤的腿。更主动的做法是使人体发生一些变化，产生有利于微生物传播的因素，这些变化表现为“症状”。比如皮肤溃烂增加了接触传染的机会；拉肚子使大量微生物有机会通过排泄物进入公用水源；咳嗽和喷嚏是人体驱逐微生物的防御反应，却也使微生物有机会乘坐飞沫在空气中散播，这真是一种让人吃惊的“双赢”——当然，以这种方式驱逐病原体只对特定人类个体而言是有利的，对整个人群是非常不利的。因此，大家要戴口罩。在北京的SARS危机中，有朋友说：“原本认为5米左右就很安全，今天路上见到一位，一个喷嚏飞溅七八米……决定把安全距离扩展到方圆10米……”

面对外来入侵者，我们的机体拥有一套强大的化学武器系统——免疫机制。免疫细胞四处巡查，核对细胞的“身份证”(表面的某种标志物质)，搜索一切可疑的外来蛋白质，发起攻击。病原微生物演化出欺骗、逃避和反攻的手段，对抗免疫机制。而我们再演化出对付这些手段的手段，这是一场不是你死就是我亡的拉锯战。对于致命的急性传染病，我们中间的幸运者，在免疫系统产生了针对某种传染病的抗体后，很长时间甚至一辈子都不必担心复发；不幸者则被夺去生命。

原始社会是不会有大型急性传染病的——这决不表示更安全，事实上那时候人类更容易因为与动物接触过多而传染上多种疾病。只不过原始时代是人口稀少、居住分散、交通极其不发达的社会，不足以“支持”急性传染病的流行。如果某种致病微生物能够迅速传播并很快致人于死地，那么它可能彻底把一个部落从地球上抹去，或者杀死部落中的大多数人，只留下极少数拥有免疫力的幸运儿，然后自己也消失了，因为力所能及的范围内不再有传播的对象。

农业使土地能支持比狩猎和采集时代大得多的人口密度。密集的定居人口，使微生物有更多机会通过接触、垃圾，尤其是被排泄物污染的水源等途径进行传播。在现代卫生意识未曾诞生而人口已稠密到一定程度、不同地区贸易接触频繁的时代，人类社会——特别是城市——简直可以看做是一个大型的病菌培养皿，传染病的发酵池。有了足够多的人，病原体就能在把所有能感染的人都感染了，到了被感染人群快要消失的时候，病原体及时地找到一批新的对象——下一代人。

非致命的传染病如麻风病对人口密度的要求较低，它们可能伴随我们很久了。大多数我们熟悉的烈性传染病如天花、鼠疫，都只有几千年的历史，它们是文明的产物。大规模群居的动物可能在野生状态时已经携带了一些致病微生物，我们的祖先驯养它们，在生活中与之有密切接触，给了微生物演化到适应人体环境，发生物种间转移的机会。牛带来天花(这可以从牛痘疫苗的名称中窥见端倪)、麻疹和肺结核；流感是猪和家禽的赠品。当然还有一些疾病的来源并非人类喜爱的动物，比如因为丰富的粮食储备而主动接近我们的某种人人喊打的小型啮齿动物。

由于基因的差异，一些人对某种传染病天生拥有更强的抵御能力，更有机会存活并繁殖后代。因此，一场传染病的袭击，会使劫后余生的人群中拥有抗病基因的人比例增加，这就是进化。文明延续已久的社会，经历过多次劫难，人群对部分疾病的抵抗力多少会增强一些。16世纪，西班牙人科蒂斯带着几百名士兵毁灭了拥有几百万人的美洲阿兹台克文明。起决定因素的不是他的火枪或计谋，而是无意中带来的天花病毒。城市文明起源较迟、驯养群居动物较少的美洲人，在旧大陆传来的疾病面前异常脆弱。哥伦布之

后的两个世纪里，新大陆人口减少了95％。当然，反过来欧洲人所未曾遭遇过的疾病也对其殖民历程造成障碍，例如疟疾和黄热病。

以上所说的，是残酷的自然法则支配下残酷的历史。考虑到人类与微生物繁衍周期的巨大差异，如果人类只是被动地依靠淘汰和选择来与微生物进行这场无休止的战争，那就永远只能忍受这种残酷。当然，宿主的过快死亡对病原体也是不利的。因此，微生物也在经受淘汰，在演化中削弱自己的毒性。但是这样还不够，我们是一种特殊的生物，是第一种主动反抗自然选择的生物。我们虽在荒唐的战争中彼此杀戮，却也在努力活下去，并努力让自己所爱的人活下去，不肯认命地被淘汰。进化最奇特的产物——人类的大脑，在痛苦和恐惧中不断寻求对抗疾病的办法。我们祈求各路神明，举行古怪的仪式，在想象力驱使下用荒谬错误的方法治病，或把怒气发作在无辜的替罪羊身上。在文明起源数千年之后——太慢了，真是太慢了——人类终于开始正确地追究疾病的原因，找到一些真正有效的办法。

我们容易想到青霉素和异烟肼，还容易想到牛痘和脊髓灰质炎疫苗。是的，伟大的琴纳、巴斯德、弗莱明和他们的同行!在漫长的岁月里，人类对着看不见的敌人束手无策，一次次被屠戮却完全不知道为什么。细菌学说之后的现代医学终于使我们有可能做到知己知彼。不过，除了特效药和疫苗，控制传染病另一个同样重要(或许更重要)的因素，经常被我们遗忘的就是下水道、厕所、卫生习惯。这些东西已经太深地渗入我们的生活，很难让人觉得有什么特别。但事实上，考虑到这些问题的公共卫生事业，是19世纪才开始的。

虽然考古学家在中国一座西汉墓葬中发现了有水冲马桶装置的厕所，但在那个时代及其后相当长的时间，这东西显然不是普遍存在的。16世纪～17世纪的花都巴黎，人们把有排泄物的污水倒在街上，其他大城市也好不了多少(顺便说一句，据说路易十四国王一辈子只洗两次澡；宫廷贵族扑满了香粉的华丽假发中长着虱子。王公贵族尚且如此，平民的卫生习惯就更不用提了)。致病微生物容易在水源中生存和传播，洪水过后往往瘟疫流行就是一个例证。排泄物污染公用水源，是烈性传染病在人口密集区——尤其是卫生状况差的城市——中容易传播的一个关键原因。19世纪上半叶，英国人埃德温·查德威克在参与修订贫民法时，认识到贫困与疾病的关系，于1842年出版了一本研究公共卫生的著作。受其启发，加上伦敦霍乱大流行带来的困扰，英国于1848年通过公共卫生法案，开始大规模建设下水道系统，设立垃圾回收制度。这大大降低了平民的死亡率，此后其他国家相继跟进。细菌学说的问世，使这类措施有了理论基础，得以进一步推广。普遍的个人卫生教育也产生了。

将SARS与历史上的传染病对比一下，就可以看到，药物和疫苗并不是我们对抗传染病唯一的工具，甚至不是最重要的工具。在这类战争的最前线，是看起来极为平常的公共卫生系统，再加上病例的迅速甄别和隔离机制。是的，没有特效药，就会有死亡，会有悲痛。但是，只要这个社会还维持着正常运转，公共卫生系统和防疫隔离机制没有崩溃，我们就可以把传染病控制在小范围内，使万户萧疏鬼唱歌的地狱惨景不至于出现，使绝大多数人免于失去亲人的悲痛。

死亡使人恐惧，生长在现代医学保护伞下的我们更易产生非理性的恐惧，但是我们必须坚强起来。回顾人类与病菌斗争的历史，必须看到，健康、安全不是人类生存的默认状态。自然界充满了危险，我们的祖先曾经生活得那样悲惨，忘记历史是危险的。人类与微生物不断升级的战争没有停止，可能永远也不会停止。SARS一定会消失，不管是因为特效药和疫苗而消失，还是仅仅因为传播被阻断，生存下来的感染者都有了免疫力。但是，以后一定还会有新的传染病出现，放松警惕是危险的。

控制病原 第4篇

国内有关猪高热病的报告很多, 不少作者提出非常有见地的观点和处理方案[2,3,4]。通过两年来对广东省内规模化养猪场 (100头以上能繁母猪) 的数十例“高热病”的现场处理和追踪调查, 笔者认为, 所谓“高热病”其实存在多种病原, 各场病原往往有所不同。只要抓住主要病原, 处理措施及时、得当, 所谓“高热病”大部分是可以预防、可以控制的。

1 主要病原

高热病病因复杂, 已有很多相关的分析研究。本文仅就传染性病原方面进行探讨。从已有病例的检测结果来看, 绝大多数是已知的病原, 包括细菌、病毒、附红体、弓形体等。这些病原的存在和猖獗, 主要和各场平时的防疫措施包括消毒措施、免疫程序等的疏漏密切相关。概括起来主要有以下三类:

1.1 病原菌感染是我省高热病的最容易忽视的原因

1.1.1 最常见的引起高热病的病原菌有多杀性巴氏杆菌、链球菌、猪副嗜血杆菌等:

(1) 巴氏杆菌:是引起猪肺疫的病原菌。多杀性巴氏杆菌是革兰氏阴性球杆菌, 有5个囊膜血清型:A, B, C, D及E, 其中A, B和D型已在猪中发现。在我省, A型和B型是最常从猪肺炎病例中分离到的血清型。

(2) 猪链球菌:按其荚膜抗原的差异, 可分为35个血清型 (1~34及1/2) , 猪链球菌荚膜2型是其中致病力最强、最常见的一种。此外猪链球菌1型与仔猪脑膜炎有关, 7型、9型、14型也可引起仔猪的关节炎、脑膜炎和败血症。值得注意的是, 同1头猪中可能存在几个荚膜型菌株。

(3) 猪副嗜血杆菌:猪副嗜血杆菌有12个以上的血清型, 我国主要有5, 4, 13, 12和1型等致病血清型, 型之间有的有一定交叉抗原型。主要引起多发性浆膜炎, 包括心胞炎、胸膜炎、腹膜炎以及脑膜炎、关节炎等。

1.1.2 猪场普遍存在抗菌药滥用现象, 细菌耐药性日益严重:

近年来, 由于养猪密度加大、疾病复杂, 为应付这种局面, 有猪场开始采用一种在饲料中定期添加抗菌药的“脉冲加药法”, 使用该法在一定程度上降低了猪场发病率, 提高了存活率、生长速度, 因而广受欢迎。

然而, 一方面, 由于大部分猪场缺乏兽医专业技术人员, 不懂合理配伍和轮换用药, 另一方面, 由于很少猪场定期分离致病菌, 进行药敏试验, 对本场致病菌的耐药性不清楚, 一旦感觉药效下降往往随意加大剂量和延长用药时间。有的猪场甚至因为用药期间发病少、猪好养, 停药发病又增加, 干脆长期加药。猪场普遍存在抗菌药滥用现象, 导致猪场致病菌耐药性日趋严重。近年我们分离猪场致病菌的药敏试验结果显示, 多数细菌对常用药物存在非常严重的耐药性, 多重耐药极为普遍。

1.1.3 细菌性感染的免疫常被忽视:

一方面, 由于普遍采用加药程序, 使不少猪场存在这样一种认识, 那就是:在这种情况下, 细菌没有生存和大量繁殖的可能, 因而没有必要对细菌性疾病做免疫预防。据我们了解, 这种认识在中小型猪场普遍存在, 因而也就出现了不做细菌性疫苗的现象。

另一方面, 对致病性细菌存在多个血清型的情况缺乏了解, 往往有漏免。如猪肺疫在我省有增多趋势, 就和多数猪场只做B型猪肺疫疫苗有关。

1.2 主要病毒性疾病控制方法不当、效果达不到要求

目前广东省猪场与高热病相关的主要的病毒性疾病有猪瘟、伪狂犬病、蓝耳病、园环病毒感染等。这些病毒不但是高热病的主要病因, 同时其他原因引起的高热病也往往因这些病毒的并发感染和继发感染而变得更为复杂。

这些病毒性疾病主要依靠免疫预防。免疫效果不佳的一个重要原因是多数猪场并未进行定期的免疫监测工作, 不清楚母猪的抗体水平和整齐度。而只有在清楚母猪的抗体水平, 同时母猪总体抗体水平较为一致的情况下, 制定统一的免疫程序才有较好的免疫效果。

猪瘟历来是猪场防疫的重点。除少数新加入养猪行业的猪场老板, 多数猪场对猪瘟都相当重视。但是, 血清学调查显示, 猪瘟抗体不整齐、抗体水平合格率低的猪场仍有很多, 在发生高热病的猪场中这种现象更为突出。

这和猪瘟疫苗、免疫程序、免疫操作、猪群总体健康水平等密切相关。目前我省主要采用细胞苗, 和脾淋苗 (兔源) 。但由于各种原因, 细胞苗的效果不如人意。脾淋苗 (兔源) 虽然从理论上讲是目前效果最好的疫苗, 有关部门也推荐使用, 但是由于存在清洁级兔供应的瓶颈等目前难以解决的问题, 市面产品的实际免疫效果差异很大。

肉猪猪瘟的免疫程序主要以20日龄、60日龄二次免疫为主, 有些猪场使用0时、30日龄、60日龄的程序。不同猪场, 采用相同的免疫程序, 效果往往不同。这主要和母源抗体水平有关。而由于疾病感染和霉菌毒素中毒造成的猪群免疫力低下, 也可以造成各种疫苗的免疫失败, 这是近年免疫失败的主要原因之一。

蓝耳病在高热病发病猪场也都有不同程度的存在。血清学调查发现, 蓝耳病抗体水平高低不齐是普遍现象, 这往往提示猪场存在蓝耳病病毒活动。这些猪场中, 猪副嗜血杆菌感染大多较为严重, 特别是断奶仔猪。值得注意的是, 采用PCR检测高热病发病猪场样本, 高致病性蓝耳病病毒抗原的阳性率并不高。这提示我们, 蓝耳病在高热病中的作用应特别重视, 但不宜盲目将我省猪群发性高热病的病原统统归因于高致病性蓝耳病变异株。

伪狂犬病野毒感染在高热病猪场也有不同程度的存在, 而母猪群感染伪狂犬病野毒往往令高热病的临床症状更复杂, 常出现反复发作, 使用抗生素没有效果。伪狂犬病的免疫程序的制定依母源抗体水平而定, 母猪抗体水平的高低和整齐程度直接影响疫苗的免疫效果。

在高热病猪群中也普遍检测到园环病毒。顺便提一下, 有研究表明, 在近年广泛用作断奶乳猪料原料的猪血浆粉中已鉴定出PRRSV、PCVⅡ, 这些病毒可能经饲料中使用的同源生物产品广泛传播, 成为高热病的幕后黑手以猪场的免疫监测和病原监测为核心, 因场而异, 制定相应综合性预防控制措施。

2.1平时做足各种防疫措施

平时加强以消毒工作为核心的综合性防疫措施, 其中包括诸如加强饲养管理、自繁自养、全进全出, 饲喂优质高效的饲料保持营养, 增强猪群的抗病能力等等。

2.2 坚持以猪场经常性的免疫监测和病原监测为核心, 制定相应综合性预防控制措施

定期对猪群采样, 监测抗体水平和野毒感染情况, 有助于把握本场猪群健康状态、抗体水平、病原存在情况, 是制定免疫程序的基础工作, 只有充分掌握了这些资料, 才有可能制定出一个适宜本场的免疫程序。同时, 定期的抗体监测又可以了解免疫效果, 便于及时修正免疫程序。

平时多送检有代表性发病猪, 进行病原分离鉴定工作, 分离致病菌, 进行药敏试验。这使我们对本场细菌的耐药性心中有数, 一旦发病, 药物使用更准确。因为分离细菌、做药敏试验正常需要2~3 d时间, 到发病时才做就会错过了控制疾病爆发的最佳时机。

在疫苗选择上, 注意选用信誉好的GMP厂家生产的产品, 在注重病毒性疾病预防的同时, 牢记细菌性疾病的免疫预防。

目前已有猪瘟疫苗生产厂家进行技术革新、改进生产工艺, 研究出应激小、滴度高的高标准的猪瘟细胞苗, 如广东永顺生物制药有限公司的“零免牌”猪瘟细胞苗等。

加强免疫是目前控制蓝耳病的核心手段。国外对蓝耳病控制主要用弱毒活疫苗免疫。国内已有蓝耳病弱毒苗上市, 经过生产实际的检验, 其效果也逐渐获得认可。

使用细菌性疫苗时, 一定要特别注意接种弱毒菌苗前后7 d不可以使用抗菌药物, 因为这样可能会杀灭疫苗中的活菌, 直接导致免疫失败。同时要留意疫苗的血清型, 临床上存在多个血清型的细菌性疾病, 尽可能使用多价苗来预防。

在免疫程序的制定上, 切不可盲目照搬, 要以猪场免疫监测和病原监测为依据, 有的放矢, 同时注意及时调整, 防止出现疏漏。

2.3 采用适当的处理程序可以尽快控制疾病

爆发高热病时, 不可盲目用药, 更不可盲目使用疫苗作“紧急免疫”。除立即做好隔离消毒工作外, 应及时将发病猪送有关部门检测, 由有关技术人员会同猪场兽医技术人员一起根据该场平时的免疫监测资料、免疫程序、用药情况, 结合流行病、临床症状、解剖病变等资料判断病因、提出紧急处理方案。待实验室结果出来后, 结合病情发展, 再进一步对紧急处理方案进行修改和补充。经过这样的程序来处理, 可以达到在最短时间控制疾病的目标。

摘要：对广东省猪群发性高热病的病原进行了分析并提出了相应对策。作者认为病原菌感染是广东省高热病的最容易忽视的原因, 而主要病毒性疾病控制方法不当、效果达不到要求。这些病原不但是高热病的主要病因, 同时其他原因引起的高热病也往往因这些病原的并发感染和继发感染而变得更为复杂。文章提出应以各个猪场的免疫监测和病原监测为核心, 因场而异, 制定相应措施, 这样可以有效地预防和控制猪群发性高热病的流行。采取适当的处理程序有助于尽快控制疾病爆发。

关键词：猪,高热病,病原,对策

参考文献

[1]万遂如。“猪高热病”的流行特点、发病原因及防控对策。畜牧市场, 2007, 4:63～66

[2]张魁华, 张小云, 彭小亮。关于“猪无名高热病”的思考。兽医导刊, 2007, 2:30～31

[3]梁浩仪, 梁柱林。近年猪病发病特点、病因分析与预防控制措施。中国畜牧兽医, 2007, 34 (1) :126～129

病原微生物实验室 第5篇

为进一步加强病原微生物实验室生物安全的监督管理，特别是病原微生物菌（毒）种及样本的保藏管理工作，预防生物安全事故的发生，近日医疗卫生监督科对全市设置病原微生物实验室的7家医疗机构（4家市级医院、3家中心卫生院）的生物安全进行监督检查。检查内容包括实验室基本情况、组织制度、建筑设计和设施、防护设备、人员培训和上岗情况、病原微生物菌（毒）种和样本的管理等，并抽查了相关台账资料。

本次共检查医疗机构微生物实验7家，仅第一人民医院1家是备案实验室。抽查从事实验室业务的卫生技术人员29人，其中中级职称12人，初级职称17人。7家病原微生物实验室均按要求划分清洁区、半污染区、污染区，配备有BSC1000-II生物安全柜，并能出示实验室生物安全手册、感染应急预案及工作人员生物安全培训记录。

检查中发现主要存在以下问题：

一、大部分实验室未经嘉兴市卫生局备案；

二、大部分实验室门非自动关闭，可开启窗户无纱窗；

三、未配备洗眼设施或应急喷淋装置；

四、在实验室内直接使用外排式高压蒸汽锅灭菌等。

对存在的问题当场均提出了整改意见，接下来我所将对存在问题的医疗机构进行复查，督促整改到位，有效预防生物安全事故发现。

桐乡市卫生监督所

MeMed：快速鉴别传染病原系统 第6篇

MeMed公司的产品是基于人体免疫系统反应的新型检测系统，只要一滴血，就可以快速速检测病人支原体、衣原体、病毒、细菌等病原体，以便医生对症下药，正确合理选用抗生素，让患者免于滥用抗生素，这样不仅可帮助患者每年节约数百亿药费，还能保护患者和医院的公共环境。

抗生素的滥用问题日益严重

抗生素在一定浓度下可抑制及杀灭病原体，为临床中应用最广泛的药物之一。长期大量使用抗生素可使细菌产生耐药性，导致感染者找不到合适的抗菌药物进行抗感染治疗，即无药可用。目前，应用抗生素产生的费用占到医疗药物总费用的30%～40%，临床滥用抗生素问题已相当严重，全球滥用率约为40%-70%;少用或错用率也达15%-40%。

细菌对目前广泛使用抗生素，大多有较高的耐药率。根据我国细菌耐药检测网的数据，在国内一百余家医院内检出的细菌中，葡萄球菌（金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌），对甲氧西林、大环内酯类、喹诺酮类等多种常见抗生素均有超过50%的耐药率，大肠杆菌对喹诺酮及第三代头孢菌素的耐药率也都在50%以上，且有66.2%的大肠杆菌可以产生超广谱β-内酰胺酶。以往，人们通过开发新的抗生素来解决耐药问题，但现在开发新抗生素的速度已经远远赶不上细菌耐药的脚步了，因此，通过控制抗生素使用减慢耐药细菌的蔓延就变得非常必要。

更为可怕的是，因为抗生素滥用而导致的多重耐药菌（MDRO）已经在多个国家流行，特别是在中国，这种对临床使用的三类或三类以上抗菌药物同时呈现耐药的细菌正在吞噬越来越多人的健康。记者查到的资料显示，早在2011年，中国政府为了控制MDRO就颁布了《多重耐药菌医院感染预防与控制技术指南（试行）》，之后MDRO的危险性和抗生素滥用已经受到了医学界的广泛关注，如何控制抗生素的滥用问题，已成为医学界的焦点问题。

但正如MeMed的公司创始人Eran Eden所言，超级细菌或者超级病毒的出现，肯定是源于抗生素的滥用，这也给世界造成每年数十亿、上百亿美元的损失。但是其中还有一个重要的原因，就是目前的检测手段无法快速和准确地进行病原学诊断和抗菌药物敏感性的测试。

Eran Eden是微生物检验领域顶级的科学家。他对记者表示，目前病原学常规检测方法是对标本进行常规鉴定、乳胶凝集、PCR鉴定、测序等，同时对菌株进行药敏试验。鉴定程序包括标本制备——标本接种——免疫荧光染色——传代培养——血清学试验——特异性核酸PCR检测等过程。不过这个过程也很耗时，目前从采集标本到给临床以明确的细菌学检验结果（病原学诊断和抗菌药物敏感试验），一般需要2～3d，有些需时更长。几天后细菌室给临床确实提供了一份准确、可靠的病原学检验报告，而此时病人的病情可能已发生变化。即使是目前最快的PCR检测，也需要4-5小时才可发出报告。

所以，Eran Eden要做的，就是找到一种快速鉴定感染源的方法，这样就可以根据感染源的种类，比如是细菌、病毒还是寄生虫，如果是细菌是哪种细菌，感染性是不是强烈等。这样就可以对症来使用抗生素，避免在未知情况下滥用这些可能对人体造成伤害的药物。

填补病原学监测诊断空白

MeMed的公司的创办人是Eran Eden，他是一位了不起的科学家，曾经获得以色列理工学院生物学学士学位，计算机工程硕士学位，魏茨曼科学研究所系统生物学博士学位。在科技及科学研究上斩获多项殊荣，包括GE &《Science》青年生命科学家奖。

Eran Eden介绍说，MeMed的新方法，是从“人体免疫系统”的反应去分析病原体，而不是从病原体本身去进行识别。他的方法的独特性，意在从人体免疫系统的不同反应来分析究竟是何种病原体在“捣鬼”。 Eran Eden知道，人类的免疫系统已经进化了数百万年的差异以应对病毒和细菌，不同的病原体可以激活特殊的的生理途径。所以，只要知道人体的反应，那么经过统计分析，那么确定病原体就不成问题了。

但是这里就出现了一个极难解决的问题，Eran Eden发现，人体内有那么多的蛋白质（超过），如果每个都在实验室进行测试，是非常昂贵的。Eran Eden预先想通过人体的抗体来对病原体进行分析，但是由于抗体种类太多，这样的试验最终失败了。

但是Eran Eden经过对比后发现，血液中有很多特殊的蛋白质类型在不同的病原体感染时免疫系统会做出精细的反应，所以他的研究团队从网上搜索了这样的大型数据库，不断地对比、筛选、确定，最后他们把长长的蛋白质名单减少为600个蛋白质的侯选项。Eran Eden知道，如果采用筛选后的蛋白质进行实际检测是正确的，那么他们离成功就不远了。为了保险起见，他们首先用他们家人和朋友的血液进行了测试，后来逐渐进行了病毒和细菌的感染测试，结果发现试验的结果是非常可靠的。之后又经过长达四年的临床实验，包括在不同医院和进行的中型和非常大型的临床实验，在这个过程中，Eran Eden及其团队发展了对目标蛋白质分析的独特算法，编写了相关计算机的软件，可以在短时间内确定病原体的类型，并能确定病菌是感染性的，还是普通的菌群。

在上海兰心剧院的舞台上，Eran Eden第一次向中国介绍了其产品——ImmunoXpert ？对超过1000病人的测试结果。据悉，ImmunoXpert ？的开发和临床验证正在大规模进行中，其中1000例患者的观察研究已经在2009年和2013年间完成。ImmunoXpert ？已批准在欧盟（ CE- IVD认证）、瑞士和以色列的使用。

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在临床验证中，这种产品的敏感性、精确性和具体性都得到了验证。其中ImmunoXpert ？对于细菌和病毒的监测可靠性得到了95%以上，在监测敏感性方面，已经达到了90%以上，这也是目前病原体检测方法中最高的结果。Eran Eden表示，原有的检测手段最高敏感性只有80%，也就是说有20%的病人虽然有病菌感染，但并没有得到抗生素治疗，但是我们以把这20%的比例降到5%，为正确应用抗生素提供了可靠的依据。此外，还有将近40%的病人可以从被应用抗生素治疗的范围内分离出来，应用MeMed公司的检测方法，可以讲40%应用抗生素治疗的病人比例降低到8%，大大降低抗生素的滥用水平，为人类的健康提供了福音。

Eran Eden表示，经过了这么长的过程，目前其技术已经从另外一个角度上突破了目前医学检验领域的困难，也填补了病原学监测诊断空白。正因为如此，Eran Eden也获得了多项科学研究奖项，比如GE &《Science》青年生命科学家奖等。

引导新的IVD革命

MeMed公司的产品ImmunoXpert ？对应的是一个巨大的产业——IVD产业。

IVD产业世界上发展最快的产业之一。主要涉及临床生化、临床免疫、临床分子、血球、微生物检测等。面对IVD行业正在呈现出来的“五化”趋势，即系统化、集成化、自动化、信息化和一体化，MeMed公司正在研发系统化和集成化的多种检测系统，包括便携式检测仪器（ImmunoPoc ？），高通量检测仪器（ImmunoDx ？）和个人定制检测产品（Immuno-personalized products）。

据悉，相比其他测试手段，MeMed的新方法——ImmunoXpert ？迅速又准确，其可以在98分钟内获取准确可靠的诊断结果。此外，目前正在开发用于检测手持设备immunoPoc ？也开始打算在今后几年进行全球范围的销售。

而其首先推向市场的产品Immuno Xpert ？作为体外快速鉴别传染病原系统，在具备高度的行业技术优势的同时，也具备了引导新的IVD革命的潜力。

仅以中国为例，就可以看出其巨大的市场潜力和价值。笔者调查发现，目前中国很多医院都引进了自动化细菌鉴定和药敏试验仪器，如果这些仪器正确使用并与医院信息系统联网，可使临床医生在工作站随时掌握病原学检测情况，及时调整抗感染治疗方案，最大限度地减少经验用药的盲目性。但是由于工作时间较长，如果经过一天再取到结果，此时的诊断对于用药已经不具备参考价值，所以长期以来，这些仪器的工作效率依然很低。正因为不能快速诊断病原体，导致目前我国每年有8 万人直接、间接死于滥用抗生素。卫生部的结果则显示，目前我国真正需要使用抗生素的病人不到20%，80%以上属于滥用抗生素。医院病原学检测缺陷是导致抗生素滥用的主要原因之一。因此提高病原检测水平才能杜绝抗生素滥用。

Eran Eden也举例说明抗生素滥用的危害性。特别是由于细菌感染性疾病是一种涉及众多病原菌的临床疾病，多数情况下一种细菌性感染可涉及多个部位感染或多种临床类型，缺少病原学检查的支持容易造成误诊与误治。我国很多医院细菌感染性疾病的抗感染治疗仍以经验用药为主，病原学送检率和阳性率普遍偏低。所以，业内更加需要Immuno Xpert ？系统。

根据统计，目前中国IVD市场已超过45亿美元，并正以每三年翻一番的速度迅速扩大，预计将在未来的10到15年内超过美国，成为世界上最大的IVD市场。因此，世界上很多大型跨国公司都在积极寻找适合合作的中国公司，以抢占中国市场。Immuno Xpert ？系统进入中国，那是肯定的。

核心优势在于生物信息数据分析

最近一段时间，由于细菌或者病毒造成的流行性疾病成为人们关注的焦点。传染性疾病包括许多种类，比较严重的有鼠疫、霍乱、非典型肺炎、艾滋病、病毒性肝炎、禽流感、狂犬病、登革热、流行性乙型脑炎、肺结核等，较轻的有流行性感冒、流行性腮腺炎等。无论是普通的感冒发烧，还是肠炎，亦或是令人人色变H7N9病毒，甲型H1N1流感，准确而快速的诊断和用药对于社会和个人的安全都是必须的。

Eran Eden能够拥有这样一项重大的科研发现，其实与目前的科研领域新的思维方式是非常相关的。这种思维其实就是“大数据”思维。当然，Eran Eden用的数据经过算法精简后已经“非常小”，但是这种从数据之间联系去确定事物是否存在的方法已经在慢慢改变人们对待这个世界观测的角度。Immuno Xpert ？系统平台能够获得世界的瞩目并成功登陆欧洲市场，也与其搭上了生物大数据的“快车”有关。

当前，大数据正在成为人类科学研究的战略高地。在经济建设、社会发展等非科研领域也获广泛应用，大数据离老百姓越来越近，互联网上，大数据应用更是无处不在。可以说，“人类已进入大数据时代”。而在生物学和医学领域，生物信息数据的迷人魅力和震撼力量，正在成为人类解决医疗、健康、医药、环境、能源等相关领域问题的创新的源泉，对这些数据创新性的管理和应用，正在为生命科学及相关产业领域带来一次新的革命。

最近一段时间，我们看到生物信息数据的应用市场如雨后春笋般出现，例如，谷歌投资DNANexus公司，提供生物大数据管理和分析服务，并于2011年接管NCBI数据;美国23AndMe公司（23代表人类的23对染色体）早在5年前就开始提供个人基因组数据分析服务，目前其受益者总数已超过50万人;英国卫生部于2013年专门建立了Gel公司，管理和分析英国十万人基因组计划产生的基因组数据。而在我国，最近也出现了诸如诺禾致源、贝瑞和康、安诺优达、未来组、百迈客、苏州众信、上海派森诺等应用生物信息数据进行创业的公司。

正如MeMed公司的产品不仅涉及生物数据，其实更深层的商业应用端还涉及计算机科学和精密仪器制造，因此，这个行业能够聚集生物化学、分子生物学、免疫学、临床检验、医学、嵌入式软件及硬件、算法、生物医学工程、精密仪器、测控技术、光电工程、机械电子等一串长长的专业，需要的是非常聪明的尖端人才来组成团队。

作为新兴交叉学科，要将生物信息数据进行产业化开发，其一是要对相关数据进行海量数据的收集、整理与服务，也就是管好这些数据;其二则是从中发现新的规律，也就是用好这些数据。我国对生物信息数据的研究和应用还处于发展的初期阶段，特别是对应用生物信息数据进行IVD产业的拓展研发领域。如何以最快的速度赶上世界这一潮流，如何从国家层面对生物信息数据所延伸的领域进行有效的开发和管理，如何在基础研究和技术市场应用上与世界同步，已成为不可回避且值得深入思考的话题。

[ 对 话 ]

《新经济导刊》：由于滥用抗生素导致的问题有哪些？

Eran Eden：相关数据显示，在世界范围内，不分发达国家和发展中国家，由抗生素滥用为主导原因的细菌院内感染状况日益严重。以美国难辨梭菌感染为例，每年难辨梭菌感染的人数超过30万人，由难辨梭菌引起的死亡人数在1万5千至3万人之间。目前难辨梭菌感染造成的医疗费用增加、住院时间延长，在美国每年用于难辨梭菌感染的医疗费用在20～ 40 亿美元。为控制难辨梭菌引起的感染、死亡以及昂贵的医疗费用。

我们掌握的数据显示，在中国由于滥用抗生素导致的问题也十分突出。中国滥用抗生素已经对医疗与经济的发展形成了制约和挑战，目前中国每年都会出现一千五百多起不良反应的案例，8-15万人死亡，经济损失约800亿人民币。

医疗行业为何需要快速进行病原学诊断？

更加快速和准确地进行病原学诊断和抗菌药物敏感性的报告，可以为临床诊断、治疗和预防提供科学依据，更好地用药和治疗。

比如对于病毒性疾病（如腮腺炎、病毒性感冒、麻疹）引起的发热，抗生素都是没有用的。对于肠道感染，首先应该明确其原因，如果是细菌引起的，则仍应考虑使用抗菌药物治疗;但是如果是其他原因（如药物性或病毒性）则不需使用抗生素，可选用收敛性药物、对症治疗药物、抗病毒药物，根据病情到医院进行治疗。

在流感流行季节，流感病毒快速抗原检测能够帮助临床医生区别病毒感染还是细菌感染，对于流感病毒抗原检测阳性的患者，医生可以仅应用抗病毒药物，而不应用广谱抗菌药物。

控制病原 第7篇

1 资料与方法

1.1 一般资料

抽取我院收治的140例呼吸道感染患者作为研究对象。依据抽签法将其随机分为试验组与对照组,每组70例。试验组男34例,女36例,年龄32~65岁,平均(48.6±3.7)岁;住院时间5~22 d,平均(14.5±2.3)d。对照组男41例,女29例,年龄31~66岁,平均(47.25±3.5)岁;住院时间6~23 d,平均(15.2±2.4)d。所有患者均知悉本研究目的,同意参与试验,并签署知情同意书。两组一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

对照组选取标本时,取患者痰液放入无菌器皿中,然后对样本进行检验。试验组在此基础上给予控制。一般患者对痰培养存在错误认识,会拒绝痰培养[3],此时应正确、积极地引导患者及其家属了解检验项目的目的,并且签署知情同意项目书,根据患者呼吸道感染情况,采用不同的标本采集手段。为了避免口腔中事物残留引起细菌感染,应该在取样之前,先指导患者刷牙清理,并于深呼吸之后,在呼气时,患者用力咳出的痰作为样本,护士协助拍背排痰。拍背方法:手指合拢,向掌心微弯,空心拳,放松肌肉,轻轻拍打患者背部,从肺底到、肺尖,从肺外侧向内,每次拍打3~5 min,使附在气管、支气管以及肺泡壁上的痰液咳出,咳入器皿中,然后送检。痰液黏稠或无痰患者,应该采用雾化取痰方法,使用雾化液(45℃+0.9%氯化钠注射液)吸入,帮助排痰。病情严重者,应该用吸引器取痰。取痰后即刻送检,提高检验结果的准确性。

1.3 检验标准

检验样本时培养基的选择主要有9种,分别为十六烷基三甲钱琼脂培养基、杆菌肤多粘菌素氧化发酵培养基、粘菌素蔡陡脂培养基、绵羊血琼脂培养基、巧克力杆菌肤琼脂培养基、巧克力琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、甘露醇高盐琼脂培养基、bm m cresol琼脂培养基。

1.4 统计学处理

采用SPSS 19.0统计软件进行分析,计量资料以±s表示,采用t检验;计数资料以率表示,采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

在9种不同的培养基下,两组患者病原性细菌的阳性检出率均有差异(P<0.05)。见表1。

3 讨论

在临床检验时,通过加强质量控制可以有效提高检测的准确性。临床进行呼吸道感染的病原性细菌检验时,为了降低诊断时的差错率,需要保证患者在足够的认知下进行痰液取样检验,做好各项清洁及消毒工作,避免出现二次污染,导致检验结果出现误差。同时,在进行标本分析时,需要严格控制菌株的量取过程,通常采用的标准即将肉眼可见存在明显生长区边缘处错位测量起止点。本研究中,试验组在对患者进行痰液取样时分别进行了检验前的健康教育,检验时的针对性处理等措施,并取得了较为满意的结果。可见在检验样本的采集、运送、处理及标本分析等过程中,质量控制措施均可有效减少各项客观因素的干扰,大大提高了检验的准确性。

摘要：目的 探讨呼吸道感染患者病原性细菌的临床检验方法,并找出其质量控制的要点。方法 抽取2014年5月至2015年5月医院收治的140例呼吸道感染患者作为研究对象,依据抽签法将其随机分为试验组与对照组,每组70例,对两组患者临床检验的准确性进行比较。结果 在9种不同的培养基下,两组患者病原性细菌的阳性检出率均有所差异,试验组的阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在对呼吸道感染患者进行病原性细菌检验时,加强各项质量控制,有助于提高检验的准确率,临床意义显著。

关键词：呼吸道感染,病原性细菌,临床检验,质量控制

参考文献

[1]穆德慧.呼吸道感染患者病原性细菌的临床检验与质量控制分析[J].当代医学,2015,21(16):31-32.

[2]马坤.呼吸道感染患者病原性细菌的检验临床观察[J].中国社区医师,2014,30(17):112,114.

兽药与病原 第8篇

1 细菌

广义的细菌即为原核生物, 是指一大类细胞核无核膜包裹, 只存在称作拟核区 (nuclear region) (或拟核) 的裸露DNA的原始单细胞生物, 细菌主要由细胞膜、细胞质和核糖体等部分构成, 有的细菌还有荚膜、鞭毛和菌毛等特殊结构。绝大多数细菌的直径大小为0.2~5μm。并可根据形状分为三类, 即球菌、杆菌和螺旋菌 (包括弧菌、螺菌、螺杆菌) 。按细菌的生活方式来分类, 分为自养菌和异养菌两大类, 其中异养菌包括腐生菌和寄生菌。按细菌对氧气的需求来分类, 可分为需氧 (完全需氧和微需氧) 和厌氧 (不完全厌氧、有氧耐受和完全厌氧) 细菌。按细菌生存温度分类, 可分为喜冷、常温和喜高温三类。细菌广泛分布于土壤和水中, 或者与其他生物共生。细菌的种类很多, 科学家研究过并命名的种类只占其中的小部分。细菌域下所有门中, 只有约一半能在实验室培养的种类, 然而大多数类型的细菌不是致病的, 而是非常有用的。例如, 土壤的肥沃在很大程度上取决于存活于土壤中细菌的活性。

2 病毒

(1) 病毒的概述。是颗粒很小、以纳米为测量单位、结构简单、寄生性严格、以复制进行繁殖的一类非细胞型微生物。病毒是比细菌还小、没有细胞结构、只能在细胞中增殖的微生物。其主要特点是既无产能酶系, 也无蛋白质和核酸合成酶系, 只能利用宿主活细胞内现成代谢系统合成自身的核酸和蛋白质成分;对一般抗生素不敏感, 但对干扰素敏感;有些病毒的核酸还能整合到宿主的基因组中, 并诱发潜伏性感染。由蛋白质和一种核酸 (DNA或者RNA) 组成。多数病毒直径100nm (20~200nm) , 较大的病毒直径为300~450nm, 较小的病毒直径仅为18~22nm, 多数要用电子显微镜才能观察到。病毒同所有生物一样, 具有遗传、变异和进化的能力, 是介于生物与非生物的一种原始的生命体。病毒主要由内部的遗传物质和蛋白质外壳组成。由于病毒是一类非细胞生物体, 故单个病毒个体不能称作“单细胞”, 这样就产生了病毒粒或病毒体 (virion) 。病毒粒有时也称病毒颗粒或病毒粒子 (virus particle) , 专指成熟的、结构完整的和有感染性的单个病毒。核酸位于它的中心, 称为核心 (core) 或基因组 (genome) , 蛋白质包围在核心周围, 形成了衣壳 (capsid) 。衣壳是病毒粒的主要支架结构和抗原成分, 有保护核酸等作用。有些较复杂的病毒, (一般为动物病毒, 如流感病毒) , 其核心壳外还被一层含蛋白质或糖蛋白 (glycoprotein) 的类脂双层膜覆盖着, 这层膜称为包膜 (envelope) 。包膜中的类脂来自宿主细胞膜。有的包膜上还长有刺突 (spike) 等附属物。包膜的有无及其性质与该病毒的宿主专一性和侵入等功能有关。

(2) 将病毒或其遗传物质从它的前身大分子中独立出来进行自主复制和进化的时候, 定义为病毒的起源。当病毒获得了决定自身繁殖和命运的遗传信息量时, 就获得了新的分类地位成为独立的遗传元件。

病毒的起源有三类学说:

退化性起源学说。退化性起源学说认为病毒是细胞内寄生物的退化形式。这种细胞内寄生的产生原因可能是由于微生物对某种不能穿过细胞膜的代谢发生了严重依赖。在细胞内这类寄生物可以在不影响其生存的情况下逐渐丢失部分生物学功能。它们所必需保留的功能是具有可进行自主复制的DNA复制原点 (顺式元件) 、可以对复制进行调控的反式调控蛋白, 以及能与宿主生物合成及复制系统相互作用的顺式和反式功能。最终的选择结构就可产生一种专性细胞内寄生的DNA分子或质粒。

退化性起源学说把病毒的起源解释为两个阶段:首先寄生物在细胞内产生独立复制的DNA质粒, 然后编码寄生物亚细胞结构单位的基因发生突变, 形成病毒的衣壳蛋白。随着进化的发生, 新获得可在细胞间转移的特性被进一步选择下来。

病毒起源于宿主细胞中的RNA和 (或) DNA成分的学说。这种学说认为, 病毒是正常的细胞组分在进化过程中获得了自主复制的能力独立进化而来的。该学说能解释所有病毒的起源:DNA病毒起源于质粒或转移因子;反转录病毒起源于反转座子;RNA病毒起源于自主复制的m RNA。

病毒起源于具有自主复制功能的原始大分子的学说, 即病毒起源于自主复制的RNA分子。核糖核酸多聚体具有自主复制的信息和能力。由于发现RNA分子具有催化化学反应的能力使得RNA为生命和病毒的起源的学说变得更具吸引力。小而简单的RNA分子具有至少下列三种化学功能:核糖核酸酶的活性;能自我拼接去掉内部的核酸序列 (核酸) ;有实验表明, 以RNA作为引物可以合成依赖于模板的多聚胞嘧啶核酸。

这些观察都有利于RNA是现今生物的进化起源学说。首先是RNA的形成和复制, 然后演变出RNA-蛋白介导的一系列反应, 第三步产生了DNA。DNA由于比RNA稳定而最终成为遗传信息。RNA的反应性有利于它作为催化物而不利于它成为遗传物质。有些分子被包装在细胞和组织中, 形成宿主细胞, 另一些分子则自我复制或寄生在宿主细胞中, 进化成为病毒。这一理论认为病毒与宿主是共进化的。现今的类病毒和卫星RNA, 仍保留有部分的RNA催化性能, 因而被一些学者认为是生命形式出现以前的RNA世界的化石。研究病毒的进化有多种方法, 可以通过序列同源性、基因组排列顺序、基因组的基因组成等方面构建病毒的进化树。单基因的进化树并不一定代表病毒的进化树, 多个基因串联所获得的进化树比单基因的进化树具有更好的稳定性。基因组的排列顺序与单基因的进化分析从两个不同的侧面反映了病毒的进化。研究基因组成的演化对揭示基因的起源及病毒与宿主之间的关系具有重要意义。

DNA病毒和RNA病毒的进化。突变和重组都是DNA病毒进化的决定因素。DNA病毒容易在宿主体内形成持续性或慢性感染, 它们可以在宿主体内存在多年而后爆发, 其间可能几乎不发生变异, 因此, 这类病毒的变异速率可能表现得比裂解型病毒慢一些。一般来讲, DNA病毒不会像RNA病毒那样引起人类世界范围的流行性疾病。RNA病毒引起的疾病流行和变异成为研究RNA病毒进化, 特别是进化时间的良好素材。

3 抗菌药物的作用机理

抗菌药物的作用主要是通过干扰病原微生物的生理生化代谢过程产生抗菌作用。抑制细菌细胞壁合成:青霉素与头孢菌素类均能抑制胞壁粘肽合成酶 (包括转肽酶、羧胎酶、内肽酶) , 从而阻碍细胞壁肽聚糖的合成, 使细胞壁缺损, 菌体破裂死亡。抑制细胞膜功能:通过抑制细胞膜功能发挥抗菌作用的抗生素, 主要包括两性霉素B、多粘菌素和制霉菌素等。这类抗生素使细胞膜的完整性遭到破坏, 大分子和离子从细胞内向细胞外泄漏, 细胞受到损伤而导致细菌死亡。抑制或干扰细菌细胞蛋白质合成:抑制蛋白质合成的抗生素主要有氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和氯霉素类等。这类抗生素各自结合到细菌核糖体70S的30S亚基或50S亚基上, 阻断肽链形成复合物的始动、错读或干扰新的氨基酸结合到新的肽链上等, 作用于蛋白质生物合成环节的某一部位, 产生抑菌甚至杀菌的作用。抑制核酸合成的抗菌药物主要有喹诺酮类、磺胺类及其增效剂等。喹诺酮类抗菌药物是有效的核酸合成抑制剂, 其抑制DNA螺旋酶 (拓扑异构酶Ⅱ) , 阻碍DNA生物合成, 从而导致细菌死亡;磺胺类药物为对氨基苯甲酸 (PABA) 的类似物, 可与其竞争二氢叶酸合成酶, 阻碍叶酸的合成;磺胺增效剂三甲氧苄氨嘧啶抑制细菌的二氢叶酸还原酶, 阻止四氢叶酸的合成, 两者合用, 依次抑制二氢叶酸合成酶和还原酶, 起到双重阻断, 抗菌作用增强。

针对病毒的生理特性, 有了抗病毒药物。抗病毒药物是指能够直接抑制或杀灭病毒、干扰病毒吸附、阻止病毒穿入细胞、抑制病毒生物合成、抑制病毒释放或增强宿主抗病毒能力的药物。常见的抗病毒药物有抗病毒口服液、聚肌胞苷酸、干扰素等。

4 兽药的现状

兽药是预防、治疗和诊断动物疾病的重要物质, 直接关系到动物疫病防控工作成效和动物源性食品安全重视。国外先进国家的兽药行业发展已经取得了可喜的成绩。国内兽药行业规模不断扩大、管理和法规体系逐步得到完善, 管理体制逐步趋向健全, 生产经营行为逐步得到规范, 兽药行业得到健康有序的发展。

(1) 兽药的残留。动物组织中的药物残留受多种因素影响, 如药物本身特性、物种、动物健康状况和给药方式等, 它们都会影响药物吸收量和药物在体内的停留时间。如果畜牧生产者规范用药, 则肉、蛋、奶、蜂蜜中的药物残留量通常很低, 一般对人体无害。但如用药不规范 (不按规定用药或不遵守休药期规定) , 则使动物产品中兽药残留量升高, 乃至超过允许摄入量, 从而给动物和消费者带来安全隐患。

现实中主要有以下几种违规情况。 (1) 非法使用禁用药物, 产生严重安全隐患。 (2) 非专业人员乱开处方, 不凭处方购药。 (3) 不按规定使用兽药, 违反标签规定, 超剂量、超范围用药, 导致兽药残留。尤其是在抗菌促生长剂和驱虫剂的长期超量使用后又不严格执行休药期, 药物成分大量残留在动物屠体中。 (4) 兽药标签和说明书标示不规范。兽药生产厂家任意夸大药物适应症, 不标明兽药成分、禁忌和毒副作用, 容易产生重复用药和配伍禁忌。 (5) 兽药行业的恶性竞争, 假劣兽药流入市场, 加剧兽药残留。

总而言之, 兽药生产、销售、使用、残留检测等各环节都有可能导致兽药残留, 而要广泛使用兽药又要保证食品安全水平, 就必须加强兽药管理, 切实有效地控制兽药残留。搞好兽药管理应从立法、行政、执法层面进行立体管理, 对药品安全性、有效性、质量管理各个方面进行严格把关。世界上主要发达国家对此已有比较成熟的管理经验, 通过学习和借鉴他们的成功理念, 结合中国国情制定适宜的管理制度和程序, 将有助于提高中国兽药管理能力, 快速提升国内食品质量和安全水平。

(2) 滥用药物导致大量的细菌、病毒进化形成对动物健康危害更大的新病株。抗生素的发现, 解决了不少因细菌病毒所感染的多种传染病, 为动物的健康事业做出了一定的贡献。但是任何事物都具有两面性, 临床兽医有时过于夸大、甚至迷信药物的治疗作用, 农村兽医很多都是父传子, 老师传弟子, 没有经过正规培训和学习, 专业院校毕业的更少, 用药的时候只考虑短期的效果, 造成了当今兽医界普遍存在的滥用抗生素的现状。动物偶有小疾, 便大量使用抗生素, 不但给患病动物带来严重的毒副作用, 还促使不少细菌病毒加速进化、成为毒性更大、耐药性更强的新病株, 药物的研究周期远远落后于病毒和细菌的进化。

(3) 西药对肌体的影响。据统计, 80%的西药对染色体有诱变作用, 这一点对于长期用药的病患动物危害更大, 有的产生药物依赖性 (不服药症状加剧) , 有的产生药物抵抗性 (剂量加大) 。西药不仅导致各种药源性疾病, 而且可诱发或加重与老化有关的各种疾病, 加速动物体老化。西药对动物体疾病治疗不但有其局限性, 而且给动物体带来了不可低估的毒副作用。

据世界卫生组织近年来的统计报道, 在临床发病率中, 大约有30%属于药源性疾病 (由于药物副作用引起的) , 大约21%属于感染性疾病, 大约16%属于医源性疾病 (由于误诊和医疗事故引起的) , 药物不良反应对人类健康的威胁远比伪劣药品的危害严重的多。

5 兽药研发的方向

(1) 化学药品。近年来, 由于食品安全问题, 跨国公司的研发投入重点在宠物。中国目前的优势是猪、禽用药物, 今后宠物、水产等药品将呈现迅速增长的态势。其他的新兴国家仍以仿制药品为主, 因为全球销售排名前30位的产品, 其专利保护基本到期。

(2) 生物制品。目前, 国际上发达国家制药企业已经开发出基因工程疫苗 (基因缺失、DNA疫苗) 、多肽疫苗、快速诊断试剂盒和免疫增强因子等产品, 黏膜给药系统研究也处在同人医相等的位置上。目前, 由于动物严重疫病流行和人畜共患病等原因, 疯牛病、口蹄疫、狂犬病、蓝耳病、伪狂犬病、猪流感、禽流感、支原体病、鸡球虫病和马立克病等成为兽用生物制品的重点研究领域。

(3) 全球新兽药研发的基地。著名的跨国公司一直是最重要的兽药研发基地。比如辉瑞公司、梅里亚公司、拜耳公司、博林格公司等都建立了药物研究发展中心。新生的生物技术公司也非常注意这个方面的建设, 纷纷建立国家级实验室。当前国际上兽药研究速度也呈现减缓的趋势。原因是研究新药的难度越来越大, 新药的标准越来越高, 审评的条件越来越严格, 整个研究费用高、周期长。抗生素和抗菌素应用前景不明朗, 研究新药的风险不断加大。所以抗寄生虫药物为各个公司研发的重点。

(4) 滋扰素作用特点。作为肌体最重要的细胞因素之一, 有生命的物质学功能表现为广谱的抗病毒活性和免疫调节功能, 滋扰素属诱生蛋白, 正常细胞一般不自觉孕育发生, 在诱生剂 (包孕病毒、球菌和某些化学合成物) 的引发下产生;滋扰素系统是目前所知的作用最快的病毒守势体系, 可在几分钟内使肌体处于抗病毒状态, 且在1~3周内对病毒的重复感染有抵抗作用。但只对病毒起按捺作用而非杀灭, 有种属特别优异性, 不同的病毒、细胞对滋扰素敏锐性不同, 不能替换, 所以还有很大的极限性。

仔猪神经症状疾病病原诊断 第9篇

本研究采用实验室的诊断方法对表现神经症状的猪内脏进行病原检测,为临床诊断及疾病诊治提供一个参考。从湖南株洲某猪场临床上表现神经症状的发病猪内脏采用平板分区域划线法进行细菌分离、PCR鉴定、病毒分离以及组织学检查等方法鉴定病原,给疾病的诊断与防治提供了参考。

1材料与方法

1.1试验与仪器

胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)购自Sigma公司;鲜血琼脂培养基购自郑州某公司;标准兔血清购自杭州某公司;DNA Marker 2000plus购自北京某公司;PCR MIX 3.0为北京某公司产品;PCR引物由上海某公司合成 ;1640培养基 、0.25 % TrypsinEDTA;新生犊牛血清;配制双抗用青霉素钠(80万单位);配制双抗用硫酸链霉素 (100万单位); PK- 15细胞和ST细胞由本实验室保存。

1.2细菌分离

无菌采集4头临床疑似猪链球菌感染病死或发病猪的脑、肺脏和脾脏组织,无菌条件下用接种环蘸取组织深部病料,划线接种于巧克力琼脂板, 于37℃培养箱中倒置培养24h,挑取单菌落放置滴有生理盐水的载玻片上,涂匀,风干,进行革兰氏染色镜检。

1.3猪链球菌的PCR鉴定及分型检测

1.3.1扩增引物:扩增所用引物见表1,由上海铂尚生物技术有限公司合成。

1.3.2PCR模板、反应体系和反应条件

1.3.2.1PCR模板

(1)细菌PCR模板:取100μL菌液过夜培养后离心后弃去上清,用等体积的灭菌PBS洗两次,最后用等体积的灭菌PBS重悬,于沸水中煮沸10min, 离心取上清作为细菌核酸检测的模板,- 20℃保存。

(2)病毒PCR模板:取病猪脑组织及肺脏组织0.3~0.5g,加入0.5m L的去离子水,研磨5min,离心取上清,加入等体积的裂解液并震荡混匀,加入10μL的蛋白酶K,57℃水浴2h后;加入等体积的平衡酚,颠倒混匀后静置5min,12 000r/min离心5min,转水相于新EP管中;加等体积的氯仿,混匀, 12 000r/min离心5min,转水相于新EP管中,加入2.5倍体积70%的酒精,12 000r/min离心5min,弃去上清,重复洗涤;37℃烘干;50μL去离子水溶解DNA,作为DNA核酸检测的模板,- 20℃保存。

1.3.2.2反应体系、反应条件

(1)反应体系(30μL):15μL mix,14μL去离子水,Fp 0.5μL,Rp 0.5μL,模板1μL。

(2)反应条件:预变性:94℃ 5min;变性:94℃ 30s;退火温度及延伸时间按照表1进行;循环圈数33;15℃保存。用0.8 %琼脂糖对PCR产物进行电泳检测。

1.4病毒分离

称取病猪脑组织及肺脏组织0.3~0.5g,加入1m L的灭菌PBS, 匀浆4min,5 000r/min离心10min,吸取上清液,稀释前在1640培养基中加入1万单位的青霉素钠和1万单位的硫酸链霉素,将稀释好的样品于4 ℃放置24 h,使青霉素和链霉素充分发挥作用。用无血清的1640培养基按1:10的比例接种于已经长满60%~80%的PK- 15和ST细胞,在37℃,5%CO2培养箱中感作2h,弃去上清液,用含2%NBCS的1640培养基维持培养,96h后,反复冻融3次,重新接种新的细胞板,按以上的方式反复接种新的细胞,盲传至第5代,收集第5代病毒液,对其进行猪腺病毒检测。

1.5组织病理学观察

剖检观察肺脏有出血点,脑组织未见有明显的肉眼可见病变。采集病猪的脑组织和肺脏组织用10%福尔马林固定,按常规石蜡切片制作方法制作切片[7],HE染色,观察组织病理学变化。

2结果

2.1细菌分离及镜检结果

菌落观察结果为:灰白色、光滑、圆形突起小菌落,有溶血现象;镜检结果为:圆形或卵圆形,排列成链状,疑似为猪链球菌。

2.2猪链球菌的PCR鉴定

所得分离株均扩增出657bp的片段,与预期大小一样,为猪链球菌(图1)

( M:DNA 分子质量标准; 1~4: 样本; N :阴性对照)

2.3分型引物对进行PCR扩增

Ⅰ猪肺脏中检测结果:猪肺脏组织内检测到252bp、346bp的片段,分别为猪链球菌7型、9型; Ⅱ猪肺脏组织内检测到链428bp、252bp、346bp片段,分别为猪链球菌5型、7型、9型;Ⅲ猪肺脏组织内检测到428bp、346bp片段,分别为猪链球菌5型、9型;Ⅳ猪肺脏组织内检测到428bp、346bp片段,分别为猪链球菌5型、9型;在Ⅱ和Ⅲ猪的脑组织内所得分离株扩增出346bp的片段,均为猪链球菌9型;(见图2)。

(编号: 1、2 为Ⅰ猪肺脏猪链球菌分型; 3、4、5 为Ⅱ猪肺脏猪; 6、7 为Ⅲ猪肺脏猪链球菌分型; 8、9 为Ⅳ猪肺脏; 10、11 号为Ⅱ 、 Ⅲ猪脑组织猪链球菌分型)

2.4对病料中PRV、PCV2、Padv检测

对病猪脑组织及肺脏组织内PRV,PCV2检测结为阴性,Padv检测在为阳性,并分型结果为Padv3(见图3)。

2.5病毒分离率结果

(样品 1~4 :猪肺脏 P :标准阳性; N :阴性对照)

猪腺病毒分离为阴性。

2.6组织病理学观察

肺脏组织切片显示有出现出血点、组织增生及纤维脱落,脑组织血管周围出现炎性细胞及出血点 (图4)。

3讨论

本试验针对出现猪神经症状的病原进行检测, 在肺脏和脑组织中分离到猪链球菌,进一步分型共出11株猪链球菌,其中3株为猪链球菌5型,2株为猪链球菌7型,6株为猪链球菌9型。

常见病原的敏感消毒剂 第10篇

猪瘟病毒:2%火碱、5%漂白粉、1∶800消毒威、1∶800卫康、1∶300消杀威、1∶600菌毒消等, 对檨猪瘟病毒有很强的杀灭作用。

猪蓝耳病病毒:1∶800消毒威、1∶800卫康、1∶400菌毒消、1∶500全安、1∶300消杀威、1%强力檨消毒灵等, 对猪蓝耳病病毒均有很强的杀灭作用。

猪伪狂犬病毒:1%火碱、5%石炭酸、1∶1 000卫康、1∶1 000消毒威、1∶600菌毒消等, 对猪伪狂犬病毒均有很强的杀灭作用。

猪圆环病毒:0.5%强力消毒灵、3.0%火碱、1.0%菌毒敌、1∶800卫康、1∶800消毒威、1∶300消杀威等, 对猪圆环病毒均有很强的杀灭作用。

猪细小病毒:2.0%火碱、0.5%漂白粉、0.5%强力消毒灵、2.0%菌毒敌、1∶800卫康、1∶300消杀檨威等, 对猪细小病毒均有很强的杀灭作用。

猪流感病毒:1∶50碘酸、1∶1 000卫康、1∶1 000消毒威、1∶300消杀威、5%碘伏等, 对猪流感病檨毒均有很强的杀灭作用。

利用昆虫病原真菌防治蔬菜害虫 第11篇

一、不同菌类的寄主范围

以室内接种试验为基础, 汇总了各种菌株对十字花科蔬菜害虫的病原性特征。

球孢白僵菌对小菜蛾和蚜虫类具有很强的病原性, 玫烟色拟青霉菌对菜青虫和芜青叶蜂具有病原性, 而绿僵菌对夜蛾类表现较强的抗原性。

二、混合使用三种菌种的防治效果

在十字花科蔬菜栽培的田块里, 因栽培方式不同往往出现多种害虫重叠发生, 此时单独使用某一种昆虫病原真菌, 会降低商品价值。为此, 采用三种菌种混合喷布的方法。混合使用三种菌种的防治效果如下。

1. 秋甘蓝栽培中的防治效果

8月初播种, 月末定植。定植时为了避免害虫为害, 将丙硫克百威颗粒剂 (安克力) 1克与土壤混合施于每一株穴里, 每个处理区面积为15平方米, 重复三次。试验处理区设定为: (1) 3个菌种混合每个菌种1108分生孢子/毫升小区。 (2) 三个菌种混合每个菌种1107分生孢子/毫升小区。 (3) 药剂喷布区 (苏云金杆菌/常用杀菌剂) 。 (4) 无药对照区。从9月22日开始每隔10天喷布1次, 共喷布5次。从试验结果看, 1108分生孢子/毫升小区和对照区的白僵菌剂比较, 防治小菜蛾和菜青虫的效果同等, 而对甘蓝夜蛾的效果比对照区好, 在1107分生孢子/毫升小区也获得较好的防治效果, 但对小菜蛾和菜青虫的防治效果不如白僵菌剂。

2. 春甘蓝的防治效果

4月中旬播种, 5月初定植, 药剂处理同上。每个处理区面积为25平方米, 重复3次。设定如下处理区: (1) 三个菌种混合每个菌种1108分生孢子/毫升 (每隔7天喷布区) 。 (2) 三个菌种混合每个菌种1108分生孢子/毫升 (每隔14天喷布区) , (3) 对照药剂区 (苏云金杆菌剂) , (4) 无药剂喷布对照区。在每隔7天喷布区, 从6月1日开始每隔7天喷布1次, 共喷布4次, 而在每隔14天喷布区, 共喷布2次, 调查寄生害虫数量及为害程度。试验结果表明, 每隔7天喷布区 (三种菌种混合喷布) , 对小菜蛾、薄荷黑纹、金翅蛾的防治效果优于药剂处理区, 为害度小, 具有很好的实用性。每隔14天喷布区的防治效果与药剂区的等同, 但在害虫发生量多时不能充分地抑制害虫为害。对蚜虫的防治效果, 虽然不如化学药剂, 但还能抑制害虫发生密度。

3. 春播花椰菜的防治效果

4月中旬播种, 5月中旬定植。定植时为了避免危害, 将丙硫克百威颗粒剂 (安克力) 1克和土壤混合起来施于单株穴里。一个处理区面积为25平方米, 3次重复。试验方法同甘蓝处理区。调查试验结果和甘蓝一样, 每隔7天喷布区 (三种菌种混合) 的效果优于药剂处理区。每隔14天喷布区中, 对小菜蛾及翅蛾的防治效果优于药剂处理区。另外发现对蚜虫 (桃蚜) 有一定的防治效果。在花椰菜栽培中, 三种菌种混合喷布混合喷布对小菜蛾, 蚜虫等害虫防治效果优于甘蓝, 其原因甘蓝因结球而药剂喷不到里面, 而花柳菜叶直立, 叶面受药均匀所致。

三、总结

1. 害虫种类

将玫烟色拟青霉菌、球孢白僵菌、绿僵菌三个菌种混合喷布时, 对小菜蛾、翅蛾类、菜青虫、橄榄夜蛾等鳞翅目害虫获得良好的防治效果。同时可以抑制蚜虫发生密度, 对油菜科菜田害虫也可显著减轻为害。

2. 喷布浓度

分别配成1108分生孢子/毫升浓度时, 可获得与苏云金杆菌剂同等的防治效果, 甚至效果更好。

3. 喷布间隔

以每隔7天喷布1次的1108分生孢子/毫升效果更好。