解冻温度场范文

解冻温度场范文（精选3篇）

解冻温度场 第1篇

1 材料与方法

1.1 材料

甘肃省家畜繁育中心生产的牛细管冷冻精液 (精子冻后活力大于0.35) 、数字解冻器、10 L液氮罐、载玻片、盖玻片、光学显微镜、温度计、恒温板、镊子等。

1.2 方法

1.2.1 试验设计

用数字精液解冻装置设置50℃、60℃、70℃、80℃、90℃五个解冻区解冻牛细管冷冻精液, 找出解冻冻精活率最高的最佳时间, 在找解冻最佳时间时, 冻精活力在死亡后才能停止试验。找出每个温区最佳解冻时间后, 再用每个温区解冻冻精, 在解冻细管冻精后置于常温井水中长时间保存, 设置0h、4 h、8 h、12 h、24 h、32 h、48 h、72 h, 8个时间区对解冻冻精进行检测, 每次检测取用3支细管冻精, 直至解冻细管冻精活力低于0.30时停止。通过上述不同温度、不同时间和常温井水长期保存中检测所得数据对比找出细管冻精最佳的解冻温度、时间和常温井水中保存时间最长的时间区。

1.2.2 解冻方法

在实验室中准备好所用试验用品, 在数字精液解冻器上设置好解冻温度, 待达到所需温度时, 用镊子从液氮罐中迅速抽取一支细管冻精, 轻轻抖动, 把带出的液氮抖掉, 立即将其放入准备好的解冻器中并轻轻摇晃, 到达设定时间后把细管取出置于所取自来水 (温度在14℃左右) 中保存, 解冻好试验所需数量细管冻精后, 取3支细管冻精擦掉管外水滴, 剪去两头封口端, 取一滴于载玻片上盖好盖玻片后, 将其放置带有恒温板 (恒温板温度设置38℃) 的光学显微镜下观察精子活力, 每个镜检玻片观察3~5个以上视野进行活力评判和记录, 然后每隔4 h观察记录一次, 直至每个设置解冻温度和时间区所解冻细管冻精活力低于0.30时停止试验。

1.2.3 数据统计分析

用Excel和SPSS13.0统计分析试验数据, 结果用平均值来表示。

2 试验结果

镜检三个视野直线前进运动精子数达35%以上为合格, 不同解冻温度、时间下的精子活力见表1。不同解冻温度、时间下的精子活力不同, 温度越高, 所需解冻时间越短, 但随解冻时间的延长, 其精子死亡也越快。同一解冻温度下解冻时间不同, 精子活力也有差异, 但在同温度区解冻时, 都有一个时间段所解冻细管冻精活力最佳, 90℃最佳解冻时间范围为3~4 s, 解冻后活力在0.40~0.45;80℃最佳解冻时间为4~5 s, 解冻后活力达0.45;70℃最佳解冻时间范围为4~6 s, 解冻后活力达0.43;60℃解冻的最佳解冻时间范围为8~9s, 解冻后的精子活力达0.40;50℃最佳解冻时间范围为20~30s, 解冻后活力在0.40~0.43;而80℃2s、70℃2s、60℃2s和3s、50℃2s和3s解冻后精子活力达不到0.35的标准;90℃5s、80℃7s、70℃8s、60℃12s解冻后冻精精子全部死亡。除上述最佳解冻时间、冻精解冻不开和解冻后死亡外的其他不同时间解冻后的精子, 活力各不相同, 所解冻冻精也都低于最佳解冻时间段的冻精解冻活力, 但除60℃4 s、5 s有个别几剂冻精解冻后活力低于0.35外, 其他所有解冻冻精均能满足国家细管冻精生产冻后活力达标标准, 显著高于其他时间段解冻后的活力。

3 分析讨论

通过试验所得结果表明, 在高温解冻冻精时所有温区都是可以的, 区别在于解冻时间的把握, 在每一个温区内都有一个冻精解冻的最佳时间段, 冻精的最佳解冻时间90℃3~4 s, 80℃4~5 s, 70℃4~6 s, 60℃8~9 s, 50℃20~30 s。在解冻精液时如何快速越过精子的冰晶化、玻璃化及复苏时间这是一个重要环节, 因为精子在冰晶化、玻璃化及复苏时最容易发生死亡, 这也是冻精冻后和解冻后精液活力快速下降的主要原因。而高温解冻好处在于高温快速解冻可以使精子冰晶化、玻璃化时间大大缩短, 从而使精子细胞结构得到保护, 使精子损伤降到最低, 保证了精子不必要的死亡, 提升了解冻后精子的活率。高温最佳时间解冻后放入常温井水中保存, 低温使精子处于休眠状态, 使精子活动量降低, 水温度恒定受外界气温影响较小, 防止温度起伏, 减少了精子能量消耗, 降低精子死亡率, 提升解冻后精液的保存和运输时间。解冻后精液保存时间延长且受胎率正常, 对交通不便、技术人员较少、路途遥远的散养户和场区较大、操作间距离配种点较远的饲养场, 具有很大的优势。对于加快黄牛改良步伐、适当减少配种点、节省资金、降低黄牛改良的投入和成本、提高肉牛细管冻精受胎率十分重要。

摘要：人工授精技术在牛繁殖改良中发挥着极其重要的作用, 在实际生产中影响受胎率的因素很多, 本试验通过采用不同温度、不同解冻时间对解冻后精子活力做对比试验, 寻找最佳的解冻温度、解冻时间, 从而提高细管冻精解冻后精子活力和受胎率。

解冻温度场 第2篇

裂隙网络非连续介质渗流场与温度场耦合分析研究

在岩体水力学研究中,一个重要问题就是岩体渗流场与温度场的耦合分析.笔者关注了国内外相关的研究,对其发展的`趋势进行了展望.系统综述了裂隙岩体渗流一温度耦合的研究情况,阐明了裂隙岩体三种渗流模型的特点、适用范围及裂隙网络非连续介质模型的研究概况,分析了裂隙岩体渗流一温度耦合作用研究及工程应用.最后,提出基于裂隙网络非连续介质渗流温度耦合分析是目前亟待解决的课题,并指出今后需要深入研究的问题.

作 者：王如宾 柴军瑞 徐维生 徐文彬 方涛 WANG Ru-bin CHAI Jun-rui XU Wei-sheng XU Wen-bin FANG Tao  作者单位：王如宾,徐维生,徐文彬,方涛,WANG Ru-bin,XU Wei-sheng,XU Wen-bin,FANG Tao(三峡大学土木水电学院,宜昌,443002)

柴军瑞,CHAI Jun-rui(三峡大学土木水电学院,宜昌,443002;西安理工大学水电学院,西安,710048)

刊 名：水文地质工程地质  ISTIC PKU英文刊名：HYDROGEOLOGY AND ENGINEERING GEOLOGY 年，卷(期)： 34(4) 分类号：P642.135 P641.2 关键词：渗流场   温度场   耦合分析   裂隙岩体   非连续介质  

解冻温度场 第3篇

1 材料和方法

1.1 试验动物

雄性大丹犬一只, 2岁, 体况中等, 身体健康, 精液品质良好。

1.2 试验器械和试剂

1.2.1 试验器械

集精杯:长颈玻璃漏斗插入无活塞的前端热封的针筒制成;

恒温恒湿培养箱:型号LRH-150-SH, 广东医疗器械厂制造;

离心机:型号LD5-10, 北京医用离心机厂制造;

显微镜:型号YS100, 日本NIKON公司制造;

电子天平:型号YS100, 日本岛津株式会社产品;

胚胎冷冻仪:型号SY-2, 北京师范大学产品。

1.2.2 试验试剂

Tris:Noven产品, 中国医学科学院血研所科技公司分装;

柠檬酸:分析纯, 天津大学科威公司产品, 批号2004-03-06;

葡萄糖:分析纯, 天津北方化玻采购销售中心产品, 批号2002-11-05;

丙三醇:分析纯, 天津北方化玻采购销售中心产品, 批号2004-04-10;

卵黄:75%酒精棉球擦拭蛋壳表面, 干后打破蛋壳, 慢慢倾去蛋清, 将蛋黄移入小烧杯中, 打匀待用。

1.2.3 基础稀释液

Tris3.04%, 柠檬酸1.7%, 葡萄糖1.25%, 双蒸水配置。

1.2.4 稀释液

稀释液 (V/V) :80%基础稀释液+20%卵黄;稀释二液 (V/V) :88%卵黄稀释液+12%甘油。

1.3 试验方法

1.3.1 公犬保定

双腿夹住颈部保定公犬。

1.3.2 人工采精

采精者左手涂上润滑剂, 蹲于犬的左后方, 用左臂向前方撩起犬的左后肢, 然后用右手向后推包皮, 等阴茎伸出大部分时, 涂有润滑剂的左手握住阴茎向后推包皮使球体露出, 反复按摩球体, 按摩时注意按摩的力度和频率。随着按摩的进行, 犬的尾部和后肢会出现摆动, 此时右手握住集精杯准备接精, 收集精液的中间部分。按摩结束后, 等阴茎缩入包皮后解除保定。

1.3.3 鲜精的品质评定

采精后记录采精量, 并进行气味和色泽检查。在400倍镜下估测精子活率, 并用血细胞记数板进行精子记数, 算出精子密度, 做好记录。

1.3.4 鲜精处理、降温及平衡

鲜精以1500rpm离心5min, 弃掉上清液, 向管中加入适量的与鲜精等温的稀释液并混匀, 棉塞封口, 放入盛有400mL 30℃热水的烧杯中, 然后将烧杯放入4℃冰箱降温。18h后, 将等体积的已预冷至4℃的稀释二液缓慢加入精液中, 混匀后放回4℃冰箱, 平衡4h。

1.3.5 冻前准备和冷冻

1.3.5.1 冻前准备

(1) 检查冻前精子活率并记录。

(2) 测量液氮面高度:将冷冻提桶缓慢插入液氮罐内, 当听到沸腾声, 并伴有白色气体冒出时, 停止插入, 然后用刻度尺量出冷冻提桶插入的深度, 即为液氮面距离罐口的高度。

(3) 预冷细管插座:冷冻前将冷冻仪的细管插座放入液氮罐中的适当高度进行预冷, 使细管冷冻插座温度为-65℃、-70℃、-75℃, 此温度即为始冻温度。

(4) 精液装管:将精液吸入细管, 细管中精液的长度大约为1.0cm, 并使精液距细管口大约为1.0～1.5cm, 最后用聚乙烯醇粉封口。

1.3.5.2 冷冻

将装有精液的细管插入已预冷的细管插座内, 立即放入液氮罐内液面上方要求的高度进行熏蒸, 10min后, 提出细管插座, 取出细管, 立即放入冷冻提筒内投入液氮。

1.3.5.3 解冻和冻后精子活率的检查

从液氮罐中取出细管, 放入60℃、65℃和70℃的水中解冻5s。解冻后在400倍镜下进行精子活率判定。

1.4 试验结果统计

实验数据按单因子试验进行统计分析, 并进行显著性检验。

2 试验结果

2.1 始冻温度对冻后精子活率的影响

注:同一列中上标不同字母表示差异显著 (P<0.05)

从表1看, 冻后精子活率随始冻温度的不同而不同。始冻温度为-65℃、-70℃、-75℃时, 冻后精子活率分别为0.5155±0.0282、0.6284±0.0408和0.5235±0.0384。始冻温度为-70℃时冻后精子的活率显著高于始冻温度为-65℃和-75℃时的活率 (P<0.05) , 但始冻温度为-65℃时的活率和-75℃时的活率间则没有明显的差异 (P<0.05) 。

2.2 解冻温度对冻后精子活率的影响

从表2试验结果来看, 冻后精子的活率随解冻温度的升高而提高。解冻温度为60℃、65℃、70℃时, 冻后精子活率分别为0.5205±0.0534、0.6110±0.0742和0.6810±0.0324。解冻温度为65℃和70℃时的冻后精子活率极显著高于解冻温度为60℃时的活率 (P<0.01) , 解冻温度为70℃时的冻后精子活率显著高于解冻温度为65℃时的活率 (P<0.05) 。

注:同一列中上标不同字母表示差异显著 (P<0.05)

3 讨论

3.1 始冻温度对冻后精子活率的影响

潘寿文、刘湖、马大君 (1986) 对始冻温度进行过研究, 发现始冻温度为-80℃时冷冻效果较。郝志明等 (2005) 对-80℃和-113℃两种始冻温度进行过对比研究, 发现与-113℃的始冻温度相比, 始冻温度为-80℃时冷冻-解冻后的精子活率有很大幅度的提高, 由-113℃时的0.13上升到-80℃时的0.45。后来郝志明等对-70℃、-80℃和-90℃三种始冻温度又进行了研究, 结果始冻温度为-70℃时, 冻后精子的活率效果最好 (未发表) 。本研究则进一步对-65℃、-70℃、-75℃三种始冻温度进行了研究, 结果表明始冻温度为-70℃时犬精液的冷冻保存效果最好, 冻后精子的活率高达0.6810±0.0324。至于为什么-70℃的始冻温度能提高冻后精子的活率, 可能是由于从这一温度开始冷冻时精子的降温速度和降温曲线更为适宜, 对精子的损伤更小所致。

3.2 解冻温度对冻后精子活率的影响

解冻同冷冻一样, 0℃～-60℃是温度的危险区, 会对精子造成损害。因此, 解冻的操作原则是使精子快速越过危险区。Olar TT报道, 对0.5mL的法国细管犬冻精分别采取1℃2min, 35℃30s和75℃12s的方法解冻, 解冻后精子的活力分别为29%、32%、35%, 高温快速解冻效果较好 (P<0.05) 。Yu I, Songsasen N和Godke RA等 (2002) 用3.6℃/min、33℃/min、140℃/min和830℃/min四种速度进行解冻, 发现随着温度的加快, 解冻后精子的活力呈倒“V”字形变化曲线。2006年, 我们对解冻温度也进行过研究, 在55℃、65℃和75℃三种解冻温度中, 65℃情况下, 冻后精子的活率最高, 为0.6220±0.0335 (未发表) 。本研究是在我们先前研究的基础上进行的更细致的研究, 试验选取了60℃、65℃和70℃三种解冻温度, 结果表明, 随着解冻温度的提高冻后精子的活率呈上升的趋势, 解冻温度为70℃时冻后精子的活率最高, 达0.6810±0.0324。

4 结论

始冻温度为-70℃时冻后精子活率最高, 达0.6284±0.0408, 明显优于始冻温度为-65℃和-75℃时的精子活率;解冻温度为70℃时冻后精子活率最好, 达0.6810±0.0324, 明显优于解冻温度为60℃和65℃的精子活率。