山楂黄酮提取工艺研究

山楂黄酮提取工艺研究（精选12篇）

山楂黄酮提取工艺研究 第1篇

1材料与方法

1.1材料

山楂叶:采自吉林省长白山区, 秋季落果后;芦丁:分析纯美国SIGMA公司。

1.2仪器

FZ102微型植物粉碎机 (河北黄骅航天仪器厂) ;ZK-82A型真空干燥箱 (上海实验仪器厂) ;UV-2102C型紫外可见分光光度计 (尤尼克仪器有限公司) 等。

1.3实验方法

1.3.1 标准曲线的绘制

准确称取120℃干燥至恒重的芦丁0.0146g, 加入60% (体积分数) 乙醇, 溶解并定容至50ml, 准确量取上述溶液0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml, 加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml, 摇匀, 放置6分钟后加入10%硝酸铝溶液0.75ml, 摇匀, 放置6分钟后加入4%氢氧化钠溶液4.0ml, 用30%乙醇定容, 摇匀, 放置10分钟。用紫外可见分光光度计在510nm处测吸光度A。线性回归方程为:y (μg/ml) =546.293A+1.68997, 其中y为芦丁含量, A为吸光度, r=0.9998。

1.3.2 山楂叶中黄酮含量测定

称取山楂叶粉末5.000g装入滤纸筒, 置于索氏抽提器中, 加入60%的乙醇100ml, 在80℃条件下于恒温水浴锅中提取3h。趁热减压抽滤, 滤渣加乙醇洗涤, 过滤, 合并上清液后减压蒸馏至近干, 用正丁醇萃取脱色 (即溶液的棕黄色褪去) , 加乙醇定容于250ml容量瓶中, 作为待测液。然后按照1.3.1测定吸光度 (重复测定3次, 结果取平均值) , 计算山楂叶总黄酮提取率, 提取率按公式计算。

提取率= (所提取的总黄酮含量/山楂叶中总黄酮的平均含量) 100%

2结果与讨论

2.1单因素实验

2.1.1 浸提温度对黄酮类化合物提取率影响

称取5份山楂叶 (每份5g) , 加入70%的乙醇100ml, 分别在40℃, 50℃, 60℃, 70℃, 80℃温度下浸提3h, 抽滤, 滤渣重复提取1次, 合并提取液, 加入60%的乙醇定容至100ml, 测吸光度。结果表明, 温度在40-60℃, 提取率随温度的升高而增加, 超过60℃提取率下降。因此, 选择60℃为佳。

2.1.2 乙醇浓度对黄酮类化合物提取率影响

称取5份山楂叶 (每份5g) , 在60℃下, 分别加入30%、40%、50%、60%、70%、80% (v/v) 的乙醇100ml, 浸提3h, 抽滤, 滤渣重复提取1次, 合并提取液, 加入60%的乙醇定容至100ml, 测吸光度。结果表明, 温度在60℃时提取率随浸提剂浓度递增, 乙醇浓度超过60%提取率下降。因此, 选择浸提剂浓度为60%适宜。

2.1.3 浸提剂用量对黄酮类化合物提取率的影响

称取5份山楂叶 (每份5g) , 分别加入60ml, 80ml, 100ml, 120ml, 140ml60%的乙醇, 在60℃下浸提3h, 抽滤, 滤渣重复提取1次, 合并提取液, 加入60%的乙醇定容至100ml, 测吸光度。结果表明, 温度在60℃时, 用60%的乙醇提取, 提取率呈增加趋势, 在80ml-100ml增加较快, 超过120ml提取率下降。因此, 提取剂用选择120ml。

2.2各种提取因素对总黄酮提取率的影响

在单因素试验的基础上, 选择提取温度 (A) 、乙醇浓度 (B) 、浸提剂量 (C) 为考察因素, 以总黄酮提取率为考察指标, 选用L9 (33) 进行正交实验。极差分析结果表明, 影响总黄酮提取率的大小顺序为:乙醇浓度>浸提剂量>提取温度, 乙醇浓度对提取率影响显著。最佳提取工艺为A1 B2 C2, 即60%乙醇, 浸提剂用量 (料液比1:24) , 温度60℃, 效果最佳。

3结语

利用高温回流提取山楂叶中的总黄酮, 其最佳工艺条件为乙醇体积分数60%、温度60℃、1g山楂叶用24ml的浸提剂, 在此工艺条件下, 山楂叶的总黄酮提取率为93.56%。

参考文献

[1]乌兰格日乐, 白海泉, 翁慧.黄酮抗氧化活性研究进展[J].内蒙古民族大学学报, 2008, 23 (3) :277-280.

[2]延玺, 刘会青, 邹永青等.黄酮类化合物生理活性及合成研究进展[J].有机化学, 2008, 28 (9) :1534-1544.

[3]于晶, 郝再彬, 苍晶等.黄酮类化合物的活性研究进展[J].东北农业大学学报, 2008, 39 (12) :125-130.

[4]杨润亚, 明永飞, 王慧.无花果叶中总黄酮的提取及其抗氧化活性测定[J].食品科学, 2010:79-82.

山楂黄酮提取工艺研究 第2篇

对核桃楸树皮总黄酮提取方法及相关影响因素进行探讨.以总黄酮含量为指标,分别考察常规提取法、超声波提取法、回流提取法、索氏提取法对提取率的`影响,以及溶剂的种类、浓度与温度对提取率的影响.结果表明,超声波提取法的总黄酮提取率最高;使用60%乙醇在60℃时的总黄酮提取率最高.

作 者：程力惠 潘育方 卢丽霞 CHENG Li-hui PAN Yu-fang LU Li-xia  作者单位：广东药学院,广东,广州,510627 刊 名：亚热带植物科学 英文刊名：SUBTROPICAL PLANT SCIENCE 年，卷(期)： 38(4) 分类号：Q949.95 R284.2 关键词：核桃楸树皮   总黄酮   提取方法   Juglans mandshurica Cortex   total flavonoids   extraction method  

食用玫瑰生物类黄酮的提取工艺研究 第3篇

【关键词】 食用玫瑰 黄酮 提取

前言

玫瑰,学名Rosa rugosa,别名红玫瑰、梅槐、刺玫瑰，蔷薇科，蔷薇属，落叶直立灌木。食用玫瑰中含有丰富的黄酮类化合物，黄酮类化合物作为一种功能成分，具有增强心血管功能、抗肿瘤、增强免疫力、延缓衰老等作用。在国外， 近年来对黄酮类化合物的研究开发十分活跃， 但在国内保健食品生产中开发较多的只有银杏黄酮、山楂黄酮、茶叶黄酮等[1]。

本论文以食用玫瑰为研究对象，对食用玫瑰中生物类黄酮的提取工艺进行初步的研究和评价，希望我们的研究能为进一开发天然高效食品抗氧化剂、食品添加剂、研制功能性食品及开发医药材料提供理论指导。

1. 实验材料、主要药品、仪器及实验方法

1.1实验材料

玫瑰花:本研究所采用的实验材料为新鲜的食用玫瑰花

1.2实验主要仪器设备

索氏抽提器，电子分析天平，紫外可见分光光度计，旋转蒸发仪，高速离心机，真空泵，恒温循环水箱，电热干燥箱，恒温搅拌循环水浴锅，PHS-2S酸度计，酒精度计等。

1.3实验主要试剂

芦丁、没食子酸、棚皮素标样；乙醚、乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇、冰乙酸柠檬酸、氢氧化钠、氢氧化钙、三氯化铝、亚硝酸钠、硝酸铝（以上均为分析纯）；

1.4食用玫瑰黄酮的测定方法

采用比色法[2]， AlCl3与黄酮类物质作用后，生成黄酮得到黄色铝络合物。

1.5食用玫瑰花黄酮提取工艺的研究[3]

1.5.1黄酮提取单因素实验[4]

（1）提取方法筛选试验

①乙醇索氏抽提法

准确称取5.00克玫瑰粉，用滤纸包好放入索氏抽提器中，加入100mL95%乙醇90℃抽提1h，定容，测定黄酮萃取率。

②丙酮浸提法

准确称取5.00克玫瑰粉，用100mL80%丙酮80℃回流浸提1h，抽滤，用80%丙酮洗涤滤渣至洗涤液无色，定容，测定黄酮萃取率。

③热水提取法

准确称取5.00克样品，加入100mL蒸馏水，90℃浸提1h，定容，测定黄酮萃取率。

④碱溶酸沉法

准确称取5.00克样品，加入100mL蒸馏水，煮沸，在搅拌条件下缓慢加入石灰乳调节pH值为9.0，在此条件下，微沸60min，趁热滤布过滤，用90℃蒸馏水洗涤滤渣至洗涤液无色，合并滤液与洗涤液，在60～70℃下用HCl溶液调节pH值至5.0，搅匀，静置24h，抽滤，用蒸馏水洗涤沉淀物至中性，真空浓缩干燥得粗提物，用60%乙醇配制成样品液，定容，测定黄酮萃取率。

（2）乙醇浓度对黄酮浸出率的影响试验

准确称取5.00克食用玫瑰，用l00mLpH8.15的不同浓度乙醇溶液，在80℃温度下回流浸提2h，抽滤，定容，测定不同浓度乙醇的黄酮浸出率。

（3）浸提温度对黄酮浸出率的影响试验

准确称取5.00克食用玫瑰，用l00mLpH8.15的50%乙醇溶液，在不同温度下回流浸提2h，抽滤，定容，测定不同浸提温度的多测定黄酮浸出率。

（4）浸提时间对黄酮浸出率的影响试验

准确称取5.00克食用玫瑰叶，用l00mLpH8.15的50%乙醇溶液，在80℃温度下回流浸提不同时间，抽滤，定容，测定不同浸提时间的测定黄酮浸出率。

（5）料液比(m/V)对黄酮浸出率的影响

准确称取5.00克食用玫瑰，分别用不同体积的pH8.15的50%乙醇溶液，在80℃温度下回流浸提2h，抽滤，定容，测定不同料液比的测定黄酮浸出率。

（6）浸提溶剂pH值对黄酮浸出率的影响实验

准确称取5.00克食用玫瑰，用100mL不同pH值的50%乙醇溶液，在80℃温度下回流浸提2h，抽滤，定容，测定不同溶剂pH值的测定黄酮浸出率。

（7）正交实验

对影响黄酮浸出率的乙醇浓度、浸提温度、浸提时间、料液比(m/V)、浸提溶剂pH值进行正交试验，试验的因素水平如表所示，以黄酮浸出率为指标，优化浸提工艺条件。

表 正交实验因素水平表

2. 结果分析

2.1食用玫瑰花总黄酮检测方法的建立

在碱性溶液中，黄酮类化合物与衬Al3+生成红色络合物，用芦丁试验结果表明在420nm波长处有最大吸收峰。同时分析得到标准曲线的回归方程，为Y=0.0007x+0.0362,r=0.9998，表明在100～800цg/mL浓度范围内，浓度与吸光度有良好的线形关系。

2.2食用玫瑰花黄酮类化合物提取工艺的研究

2.2.1几种常用的提取方法比较

不同提取方法对食用玫瑰黄酮的萃取率如表1所示。回流浸提法还可通过调节乙醇浓度，增加食用玫瑰黄酮的的溶解性，提高提取效率，因此，选择乙醇浸提工艺。

2.2.2乙醇浓度对黄酮浸出率的影响

不同乙醇浓度对食用玫瑰黄酮浸提效果表明，当乙醇浓度小于40%时，浸出物中黄酮的浓度随乙醇浓度的增加而迅速提高。高于此浓度后则增长平缓。当浓度达到80%时，黄酮提取率基本不变。因此，宜采用70%左右的醇溶液进行浸提。

2.2.3温度对黄酮浸出率的影响

不同浸提温度的黄酮浸出率表明，不同浸提温度的黄酮与多酚浸出率差异极显著。40～80℃时，随着温度的升高黄酮与多酚浸出率逐渐增大，这是因为升高温度有利于食用玫瑰黄酮溶解度增大[5]。宜在60～80℃之间进行浸提。

2.2.4浸提时间对黄酮浸出率的影响

不同浸提时间的黄酮浸出率如图。不同浸提时间的黄酮浸出率差异极显著。浸提时间在60～150min之间时，延长时间可以增加玫瑰黄酮浸出量，提高黄酮浸出率。当时间超过150min时，玫瑰中的黄酮向溶液扩散速度与溶液中黄酮向玫瑰扩散的速度达到平衡，高溫长时间的蒸煮使黄酮部分损失，黄酮浸出率降低。

2.2.5 料液比(m/V)对黄酮浸出率的影响

不同料液比的黄酮浸出率如图4所示。方差分析表明，不同料液比之何差异极显著。料液比小于1：20，增大黄酮浸出率。当溶剂用量增大到一定限度时，而减少玫瑰黄酮浸出，因此，料液比1:30的黄酮浸出率比料液比为1：20的黄酮浸出率低。

2.2.6 溶剂的PH值对黄酮浸出率的影响

响应曲面法优化山楂总黄酮提取工艺 第4篇

1 材料与仪器

1.1 药材与试剂

山楂:购于平邑县原田金银花专业合作社, 经鉴定为山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥果实。芦丁对照品:中国食品药品检定研究院, 批号:100080-200707, 纯度为92.5%。其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器

岛津紫外可见分光光度计UV-2550;AL204电子天平 ( (梅梅特特勒勒--托托利利多多仪仪器器有有限限公公司司, , 00..11mmgg) ) 。。

2 方法与结果

2.1 山楂提取工艺

取一定量山楂, 加入10倍量一定浓度的乙醇加热回流, 多次提取, 过滤合并上清液, 回收溶剂, 浓缩为浸膏。

2.2 山楂总黄酮含量测定方法

2.2.1 对照品溶液制备

精密称取于120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg, 置于50mL容量瓶中, 加乙醇适量, 超声30min使之溶解, 放冷, 加乙醇至刻度, 摇匀, 精密量取20mL上述溶液置于50mL容量瓶中, 加水至刻度, 即得0.2mg/mL对照品溶液[3]。

2.2.2 芦丁标准曲线绘制

精密量取芦丁对照品溶液1、2、4、6、8、10mL, 分别置于25mL容量瓶中, 各加入70%乙醇至10mL。加5%亚硝酸钠溶液1mL, 摇匀, 放置6min;加10%硝酸铝溶液1mL, 摇匀, 放置6min;后加1.0mol/L氢氧化钠溶液10mL, 用蒸馏水稀释至刻度, 摇匀, 放置15min。以不加芦丁的对照品溶液为空白, 采用分光光度法于500nm[4]波长处测定吸光度, 以芦丁浓度C为横坐标, 吸光度A为纵坐标, 绘制标准曲线, 得线性回归方程为:A=6.272 6C+00..220044 11 ( (rr==00..999999) ) , , 线线性性范范围围为为00..000088~~00..0088mmgg//mmLL。。

2.2.3 样品溶液制备

精密称取山楂浸膏25mg, 用60%乙醇定容至25mL。精密量取2mL溶液, 用60%乙醇定容至10mL, 作为样品溶液。精密量取样品溶液5mL, 按照标准曲线制备方法进行试验。

2.3 提取试剂选择

取20g山楂, 分别用10倍量甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮按照“2.1”项工艺流程浸提, 比较4种有机溶剂对总黄酮的提取效果。结果表明乙醇提取效果最好, 总黄酮含量为15.776 2mg/g, 甲醇次之, 丙酮最差, 故选乙醇为提取试剂。

2.4 单因素试验

2.4.1 乙醇浓度

设定提取温度为70℃, 提取时间为2h, 提取次数为3次, 分别考察10%、30%、50%、70%、90%乙醇溶液对总黄酮含量的影响[5]。结果表明, 用70%乙醇提取时山楂总黄酮含量最高。

2.4.2 提取时间

设定提取温度为70℃, 提取溶剂为70%乙醇, 提取次数为3次, 分别考察1、2、3、4h提取时间对总黄酮含量的影响。结果表明, 提取时间为3h时总黄酮含量最高。

2.4.3 提取温度

设定提取溶剂为70%乙醇, 提取时间为3h, 提取次数为3次, 分别考查40、50、60、70、80℃提取温度对总黄酮含量的影响。结果表明60℃下提取山楂总黄酮含量最高。

2.4.4 提取次数

设定提取溶剂为70%乙醇, 提取温度为60℃, 提取时间为3h, 分别考查1、2、3、4、5次提取次数对总黄酮含量的影响。结果表明, 提取3次时总黄酮含量最高。

2.5 响应曲面试验

在单因素实验的基础上, 根据Box-Behnken的中心组合设计原理设计自变量, 以总黄酮含量为响应值, 通过响应曲面分析进行工艺优化。

2.5.1 因素选择

在单因素试验的基础上, 确定了各因素最适宜的条件, 根据Box-Behnken中心组合试验设计原理, 设计四因素三水平的响应面分析试验。

2.5.2 响应曲面试验

采用Design-Expert8.0.5软件进行试验设计, 具体结果如表1所示。

2.6 模型建立及显著性检验

利用Design-Expert8.0.5软件对试验数据进行多元回归拟合分析, 得到山楂总黄酮含量与各因素变量的二次方程模型为:

由方差分析结果可知, 试验所选模型P<0.000 1, 表明回归模型极显著, 失拟项P=0.836 9>0.05不显著, 说明数据中没有异常点, 不需要引入更高次数的项。各因素对山楂总黄酮含量的影响从大到小依次为提取次数、提取时间提取温度、乙醇浓度。由响应分析结果可知, 最佳提取条件为乙醇浓度80%, 提取温度56.2℃, 提取次数3次, 提取时间2.5h。

2.7 响应曲面模型验证

为验证响应面优化山楂提取条件结果的可靠性, 同时为了计算方便, 得出最终提取条件为乙醇浓度80%, 提取温度55℃, 提取次数3次, 提取时间2.5h。在此条件下连续进行了3次试验, 得出山楂总黄酮的含量分别为16.012 5mg/g、16.107 9 mg/g、16.135 4mg/g, 平均值为16.0853mg/g, RSD=0.4%, 表明基于响应曲面法的山楂总黄酮提取条件准确可靠。

3 结论

采用Design-Expert 8.0.5软件设计响应面试验, 并进行试验验证, 得出山楂总黄酮的最佳提取工艺条件为乙醇浓度80%, 提取温度55℃, 提取次数3次, 提取时间2.5h。提取工艺与模型高度拟合, 可用于工业生产, 提高山楂总黄酮提取率。

摘要：目的:优化山楂总黄酮提取工艺。方法:以乙醇为提取试剂, 在单因素试验的基础上, 应用BoxBehnken设计方法建立数学模型, 选择乙醇浓度、提取时间、提取温度、提取次数为影响因子, 以山楂总黄酮含量为响应值, 进行响应曲面分析。结果:最佳工艺条件:乙醇浓度为80%, 提取温度为55℃, 提取时间为2.5h, 提取次数为3次, 山楂总黄酮含量可高达16.085 3mg/g。结论:提取工艺与设计模型高度拟合, 可用于工业生产, 提高山楂总黄酮提取率。

关键词：山楂,总黄酮,响应曲面法,工艺优化

参考文献

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[2]高莹, 肖颖.山楂及山楂黄酮提取物调节大鼠血脂的效果研究[J].中国食品卫生杂志, 2002, 14 (3) :14-16.

[3]张妍, 李厚伟, 张永春, 等.山楂中总黄酮几种分离方法的考察及含量测定[J].哈尔滨医科大学学报, 2001, 35 (3) :183-184.

[4]张海英, 薛洁.山楂总黄酮提取工艺的研究[J].新疆中医药, 2006, 24 (5) :17-18.

山楂黄酮提取工艺研究 第5篇

研究了超声辅助萃取法提取北方地区早园竹叶中黄酮的工艺.通过单因素试验确定了影响总黄酮得率的.主要因素及其最佳水平范围,通过正交试验确定了最佳萃取条件.结果表明:用物料比为1∶15(原料质量比溶剂体积比)80%的乙醇,在70℃、500W的超声强度下萃取125min,可以使总黄酮得率达到2.4%.

作 者：张珊珊 赵晓红 ZHANG Shan-shan ZHAO Xiao-hong 作者单位：张珊珊,ZHANG Shan-shan(首都师范大学生命科学学院,北京,100037)

赵晓红,ZHAO Xiao-hong(北京联合大学应用文理学院,北京,100083)

微波法提取狼把草总黄酮工艺研究 第6篇

关键词：狼把草；总黄酮；微波辅助提取；正交试验

中图分类号： R284.2 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0235-02

收稿日期：2013-08-29

基金项目：吉林化工学院项目（编号：吉化院合字第2012第061号）。

作者简介：王亚红（1970—），女，吉林吉林人，硕士，教授，从事天然产物研究开发。E-mail：wangyahong99999@163.com。狼把草（Bidens tripartita L.）为菊科鬼针草属植物，别名鬼叉、接力草、针线包等，广泛分布于我国大部分地区。狼把草药用历史悠久，其药用价值在《本草拾遗》《本草纲目》等文献中多有记载[1]，主要功效为养阴益肺、清利湿热，主治气管炎、肺结核、咽喉炎及丹毒、癣疮等，其药用主要有效成分为黄酮化合物木犀草素、槲皮素、芹黄素及糖苷[2]。黄酮类化合物是一种生理活性物质，具有抗病毒、抗炎、抗癌防癌、降低血压、防止动脉粥样硬化和抗氧化、防衰老等作用[3-8]，该化合物已成为国内外医药界研究的热门话题，是一类具有广泛开发前景的天然药物[9]。本试验以总黄酮提取率为指标，采用单因素和正交试验，优选狼把草的微波提取工艺，为狼把草的综合利用及相关领域的深入研究提供依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1仪器与设备微波辅助萃取仪（MAS-Ⅱ，上海新仪器微波化学科技有限公司）；高效液相色谱仪（LC-20AT，日本岛津）；紫外检测器（SPD-20A，日本岛津）；色谱柱（Shim-pack VP-ODS，日本岛津）；超声波清洗器（AS3120，天津奥特赛恩斯）；旋转蒸发仪（RE-52A，上海亚荣生化仪器厂）；电子分析天平（FA2004N，上海精密科学仪器有限公司）。

1.1.2试验材料狼把草购自吉林市江城大药房，经鉴定为狼把草（Bidens tripartita L.）干燥全草；木犀草素、槲皮素、芹黄素由北京捷诚科远化工技术研究院提供；无水甲醇、乙酸均为分析纯。

1.2狼把草总黄酮含量测定

1.2.1色谱条件色谱柱为C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 ∶水 ∶乙酸为75 ∶30 ∶0.4，用前微孔滤膜过滤并经超声脱气处理；检测波长为254 nm，流速为0.7 mL/min；柱温为室温；测试样品每次进样量为10 μL。

1.2.2对照品溶液的制备与线性试验精密称取干燥至恒重的木犀草素、槲皮素、芹黄素标准品，用流动相溶解并定容制成60.5、30.3、26.3 mg/mL的对照品溶液；分别精密吸取1、3、5、7、9 mL，用流动相定容至10 mL，用高效液相色谱仪进行测定。以峰面积（A）对浓度C进行线性回归，得回归方程为：木犀草素A=7.65×103C+685，r=0.999 7，浓度范围605～60.59 μg/mL；槲皮素A=2.02×104C-1.65×103，r=0999 8，浓度范围3.03～30.39 μg/mL；芹黄素A=5.61×103C+395，r=0.999 7，浓度范围2.63～26.39 μg/mL。

1.2.3供试品溶液的制备与测定准确称取5.0 g狼把草生药粉末于三颈瓶中，加入一定量75%乙醇溶液作溶剂，在设定的试验参数下进行微波萃取，抽滤，滤渣加入等量75%乙醇提取第2次；合并2次提取液旋蒸，所得溶液放入坩埚，在70 ℃水浴锅中水浴蒸发；在烘箱中干燥至恒重得干浸膏，取一定量干浸膏用流动相溶解定容，用高效液相色谱仪测定狼把草中木犀草素、槲皮素、芹黄素的含量。

1.2.4总黄酮提取率计算加和每次提取得到浸膏的木犀草素、槲皮素、芹黄素3类黄酮化合物质量作为浸膏中总黄酮质量。狼把草总黄酮提取率计算公式为：狼把草总黄酮提取率=浸膏中总黄酮质量（g）/所用狼把草粉末量（g）×100%。

1.3精确度与稳定性试验

1.3.1精密度试验精密吸取木犀草素、槲皮素、芹黄素3个对照品溶液，按照色谱条件连续进样5次，求得相应含量，并计算相对标准偏差RSD。

1.3.2重现性试验在平行条件下，称取6份狼把草药粉各5.0 g，测定样品溶液中木犀草素、槲皮素、芹黄素含量，并计算RSD。

1.3.3稳定性试验取供试品溶液，用高效液相色谱仪每隔2 h测定1次样品溶液中木犀草素、槲皮素、芹黄素含量，并计算RSD。

1.3.4加样回收试验取6份1.5 g狼把草，加入木犀草素、槲皮素、芹黄素标准品适量，按照供试样品提取条件，提取并制备相应溶液，测定木犀草素、槲皮素、芹黄素含量，并计算RSD。

1.4单因素试验

1.4.1料液比设定微波功率700 W、微波温度70 ℃、提取時间30 min、乙醇体积分数75%，分别按1 ∶10、1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25、1 ∶30（g ∶mL）的料液比进行微波萃取。

1.4.2微波功率设定微波温度70 ℃、提取时间30 min、料液比为1 g ∶20 mL、乙醇体积分数75%，分别按400、500、600、700、800 W的微波功率进行微波萃取。

1.4.3乙醇体积分数设定微波功率600 W、微波温度 70 ℃、提取时间30 min、料液比1 g ∶20 mL，分别加入体积分数为45%、55%、65%、75%、85%的乙醇进行微波萃取。

nlc202309011514

1.4.4微波时间设定微波功率600 W、微波温度70 ℃、料液比1 g ∶20 mL、乙醇体积分数75%，分别微波萃取20、25、30、35、40 min。

1.5正交试验

3小结

本试验采用微波工艺提取狼把草黄酮，该方法加热耗能少，成本低，简单方便。优化所得最佳提取工艺条件为：乙醇体积分数75%、微波功率500 W、提取时间35 min、料液比 1 g ∶20 mL、微波温度70 ℃，该优化条件下的平均提取率为0507 2%。该研究结果对狼把草总黄酮在药物、食品等领域的深入开发提供了一定参考。

参考文献：

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[9]尹爱群，穆惠军，江雪欣，等. 黄酮类化合物研究进展[J]. 中国药事，2005，19（11）：50-53.

山楂黄酮提取工艺研究 第7篇

山楂是蔷薇科植物山里红(Crataegus pinnatifida Bge. var. major N.E.Br.)或山楂C.pinnatifida Bge.的成熟干燥果实,为传统中药材,能开胃消食、化滞消积、活血化淤、收敛止痢。山楂又是水果,生熟食用均可。近年临床常以生山楂治疗高血脂、高血压、冠心病等,民间还用以食疗养生、保健益寿。山楂果实中含有多种化学成分,其中黄酮是山楂中的一大类化合物, 是治疗心血管疾病和抗肿瘤的活性成分,能够降血压,降低胆固醇和血脂在血管壁上的沉积,增加皮下毛细血管的通透性,对心脑血管系统疾病有明显的疗效[1]。山楂果总黄酮对正常细胞的生长无明显影响,但对肿瘤细胞的生长却有显著抑制作用[2]。作为盛产山楂的国家,我国山楂来源尤为充足,成本低,因而充分利用山楂这一可再生的资源去开发生产新药,其前景广阔。

近年来,超高压技术应用于提取植物中的黄酮、苷类等生物活性物质研究已有报道[3,4,5],其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分等特点。本文对超高压提取法、超声波法、微波法、索氏提取法提取山楂果总黄酮的工艺条件进行了初步研究和比较,为今后进一步开发利用山楂资源提供了技术依据。

1 材料与方法

1.1 材料

DL700超高压等静压机(上海大隆机器厂);紫外可见分光光度计27520型(上海精密科学仪器有限公司);MA110电子天平(上海良平仪器仪表有限公司);JY922Ⅱ型超声波细胞粉碎机(宁波新兴科器研究所);微波炉(青海海尔微波制品有限公司);循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。

山楂果片,购于吉林大药房;对照品芦丁,购于中国药品生物制品检定所。其它试剂均为分析纯。

1.2 方法

1) 紫外分光光度法测定黄酮含量。

标准溶液的配制:精密称取干燥至恒重的芦丁标准品10mg,置50mL容量瓶中,加无水乙醇20mL,轻摇使充分溶解,定容,摇匀,得0.2mg/mL芦丁标准液。

标准曲线的绘制[6]:精密吸取标准溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL和0mL分别置25mL容量瓶中,各加水至6mL;加入5%亚硝酸钠溶液1mL后摇匀,静置6min;加10%硝酸铝溶液1mL,摇匀,静置6min后;加入4%氢氧化钠溶液10mL;摇匀后再加水定容,放置15min;立即用分光光度法在500nm波长处测定吸光度(A)值。以吸光度为纵坐标,浓度(C,m/V)为横坐标绘制曲线,计算标准曲线的回归方程为

C=0.083(A-0.022) r =0.9992

样品的测定:吸取样品液1mL至25 mL容量瓶中,步骤同上,在500nm波长处测定吸光度(A)值,计算出山楂果中黄酮的提取率Y(%),则

Y=0.083(A-0.022)V/V1V2/m100%

式中 A吸光值;

V测量时定容体积;

V1检测时所取提取液体积;

V2过滤后定容体积;

m山楂果样品质量。

2) 山楂果实预处理。

将山楂果片置于70℃真空干燥箱中恒温干燥24h,取出后粉碎成40目粉末,置于干燥器内保存备用。

3) 超高压提取。

精密称取山楂果粉末1g, 加入50%乙醇40mL, 混匀,浸泡2h,300MPa超高压处理3min,减压抽滤,得到样品液。

4) 微波提取。

精密称取山楂果粉末1g,加入50%乙醇20mL, 混匀后放入微波炉(功率为800W),微波照射4min, 减压抽滤,得样品液。

5) 超声提取。

精密称取山楂果粉末1g,加入60%乙醇20mL , 混匀,超声45min,减压抽滤,得到样品液。

6) 索氏提取。

精密称取山楂果粉末1g,加入60%乙醇60mL,提取3h,减压抽滤,得样品液。

2 结果与讨论

2.1 不同提取方法最优工艺条件的研究

在单因素试验的基础上,选择乙醇浓度、料液比、压力及保压时间为影响山楂果黄酮类化合物提取效果的因素, 选用L9(34)正交表对山楂果总黄酮的常温超高压法提取工艺进行研究[7]。超高压提取最优工艺参数为:提取溶剂为50%乙醇,料液比为1:40,浸泡时间2h,提取压力300MPa,提取时间为3min;黄酮提取率为5.44%。

在考察了乙醇浓度、料液比、提取时间3个单因素的基础上,采用正交试验优化,分别进行试验,研究了超声波法为、微波法、索氏提取法提取山楂果总黄酮的最佳工艺条件[8]。微波提取最优工艺参数为:乙醇浓度50%, 微波作用时间4min, 料液比为1:20;超声提取最优工艺参数为:乙醇浓度60%, 超声波作用时间45min, 料液比为1:20;索氏提取最优工艺参数为:乙醇浓度60%,料液比为1:60,提取时间3h。

2.2 不同提取方法对山楂果总黄酮提取率的影响

超高压提取法、超声波法、微波法、索氏提取法提取山楂果总黄酮的结果,如表1所示。

从试验结果可以看出,采用不同方法提取山楂黄酮,其提取率差异很大。其中,超高压提取法山楂总黄酮提取率最高,为5.44%;其次是索式法提取,为5.12%;超声波法为4.66%;微波法提取率最低,为3.76%。试验过程还发现,不同方法提取所得提取液差异也很大,微波法和超声波法得到的提取液十分混浊,说明其提取液中可能含有大量糖、蛋白质等杂质,索式法提取液稍有混浊,而超高压提取液呈淡红色,十分澄清。这些特性说明了超高压提取法具有选择性提取的特性,同时也表明,采用超高压提取山楂黄酮,有利于山楂黄酮的进一步分离纯化。就提取时间而言,超高压法提取时间最短,仅需3min,而提取率仅次于超高压法的索式提取却需3h,耗能较大。

3 结论

与常规提取方法和近年来出现的新型提取技术相比,常温超高压提取技术有下述特点:常温超高压提取技术可以使用多种溶剂,包括水、不同浓度的醇和其它有机溶剂。可以按照中药材的性质和提取的目标成分选择最合适的提取溶剂,从不同的中药材中提取不同性质(如生物碱、黄酮、皂甙、多糖、挥发油)的有效成分。

超高压提取具有选择性,超高压提取的提取液中杂质含量较低,因而超高压提取液的分离纯化非常简单。这样一来,不但可以大量减少分离纯化药品的消耗,而且缩短了分离纯化时间和占用的设备,还易于得到高纯度的单一成分。纯度提高带来的经济效益是十分巨大的。

超高压提取时间短,提取率高。超高压提取只使用电能,而不需要锅炉等热源,因此无灰尘、炉渣等废物、废气排放,无污染,环保节能,适于大规模生产。索氏提取虽然效率略高,但耗时、费力。因此, 超高压提取是一种较为理想的提取方法。

参考文献

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[7]陈瑞战,张守勤,王长征.常温超高压提取人参总皂苷[J].化工学报,2005(5):911-914.

龙眼壳总黄酮提取工艺研究 第8篇

他中药成分,但是,目前对龙眼壳中总黄酮的提取研究鲜见报道[3,4]。本研究用正交设计方法从龙眼壳中提取出总黄酮,并测定了含量, 以图为龙眼壳的开发利用提供基础数据。

1 实验部分

1.1 原料

新鲜干龙眼(广东高州)。

1.2 主要仪器与试剂

UV1800PC型紫外分光光度计、数显恒温水箱、电子天平、加热电炉等。

95%乙醇、芦丁、亚硝酸钠(分析纯)、氢氧化钠(分析纯)、硝酸铝(分析纯)。

1.3 定量原理

A1(NO3 )3 比色法: 以A1(NO3 )3 为显色剂,在

碱性条件下,利用其与黄酮形成红色螯合物的特征,以芦丁为对照品,在510 nm处测定其吸收度,从而得到待测物质的黄酮含量。

1.4 标准曲线的制定

1.4.1 对照品试液的配制

称量105℃下烘干至恒重的芦丁对照品100.4 mg,用适量30% 乙醇加热溶解,放冷,转移至100 mL容量瓶中,用30% 乙醇定容至刻度。再从中取10 mL溶液,置100 mL容量瓶,用30% 乙醇定容至刻度摇匀,做为对照品储备试液。此试液中芦丁浓度为0.1004 mg/mL。

1.4.2 标准曲线的绘制

精密量取对照品试液0.0,0.5,1.0,2.0,3.0 ,4.0,5.0 mL,分别置于10 mL量瓶中,加5%亚硝酸钠溶液0.5 mL,使混匀,放置6 min。加10%硝酸铝溶液0.5 mL,摇匀,放置6 min。加5%氢氧化钠溶液4 mL,用30%乙醇定容至刻度,摇匀,静置。15 min后测试510 nm下的吸光度值,以不含芦丁的空白溶液为参比。

1.5 龙眼壳中总黄酮提取工艺流程

龙眼壳除杂水洗烘干粉碎称重乙醇回流提取过滤。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线

相应的吸光度值为0.000、0.054、0.105、0.217、0.322、0.428、0.531。应用最小二乘法将芦丁标准液浓度与吸光度值做一元线性回归分析,由Microsoft Excel获得回归曲线:

Y=1.0599X + 0.0013,R2=0.9999

2.2 影响黄酮得率的单因素考虑

2.2.1 提取剂浓度的确定

每次称取0.5 g龙眼壳粉末,在50℃ ,料液比m(壳) ∶V(乙醇)=1 ∶40,浸提1 h,浸提1次的条件下,依次以体积分数为30%～95%乙醇进行浸提,过滤。用30%乙醇稀释一定倍数后,取1 mL按1.4.2.显色,在510 nm下测得的吸光度与乙醇浓度的关系见图1。从图1可以看出,在乙醇浓度为50%～70% 内对应吸光度值有个小平台。这种现象反映出龙眼壳中所含的生物黄酮类化合物具有黄酮苷元和糖苷两种形式,随着乙醇浓度的降低,前者的溶出量相对减少,后者则相对增加,中等浓度的乙醇溶液对两者的溶出率较适当。因此选择乙醇浓度范围50%～70%。

2.2.2 提取温度的确定

分别称取0.5 g龙眼壳粉末加入20 mL60% 乙醇溶液,在40～80℃范围内每隔10℃为一个测试点,提取1 h。冷却后过滤,用30%乙醇稀释相同倍数后量取1 mL测吸光度。从图中可以看到,在低于70℃的范围内随着温度的逐渐升高黄酮得率随之升高,说明较高的温度对黄酮类化合物的溶出是有利的。当超过70℃后,黄酮得率降低,这可能是黄酮在高温下不稳定所致[5]。实验表明,适宜的提取温度为大于40℃小于80℃之间

2.2.3 提取时间的确定

分别称取0.5 g龙眼壳粉末加入20 mL60% 乙醇溶液,在70℃ 下反应1～4 h,以每0.5 h为1个测试点。冷却后过滤,用30%乙醇稀释相同倍数后测得吸光度(图3)。从图中可以看出,提取2.5 h的黄酮得率最大。由于黄酮类化合物在高温不稳定,提取时间太长,会造成有效成分的损失[5],致使2.5 h 后得率有所降低。

2.2.4 提取时料液比的确定

称取1 g龙眼壳粉末,分别加入10,15,20,25,30,35, 40 mL60% 乙醇溶液,在70℃下反应2 h,过滤,滤液用30%乙醇溶液定容至50 mL。用30%乙醇稀释一定倍数后测定吸光度值,料液比与吸光度值的关系见图4。从图4可以看出,随着料液比的不断加大,生物类黄酮化合物的溶出率也显著加大。当固液比在35倍后,黄酮化合物的溶出率增长缓慢。

2.3 正交设计

根据溶剂浓度、料液比、温度、提取时问4个单因素试验所确定的水平范围,选定乙醇浓度,料液比,提取温度,提取时间作为考察的4个因素,各取3个水平(见表1),以龙眼壳总黄酮得率为指标,选用L9(34)正交表进行实验(见表2)。

准确称取1.000 g左右龙眼壳粉末若干份,按表2在不同条件下处理后,过滤,用30%乙醇定容至30 mL。再从中取1 mL用30%乙醇定容至10 mL,得样品液。取2 mL样品液按1.4.2显色检测,得表2的实验结果。

注:得率(%)=(吸光度-0.0013)/1.059910/21030/1000100

由表2的直观分析可以看出: 4种因素对龙眼壳黄色素提取效果的影响程度依次为B>A>D>C,即乙醇浓度>提取温度>料液比>提取时间,其中料液比对龙眼壳黄色素提取的效果影响最显著,提取时间对龙眼壳黄色素提取效果影响最小; 最佳提取工艺为A3B2C2D3,即提取剂为60%的乙醇、提取温度为80℃、提取时间为2.5 h、料液比为1 ∶35。

按最佳提取工艺平行实验3次,结果如表3所示,实验结果比表2中的其他组合都高。说明这种组合在工艺上是简单可行的。

3 讨论

1)以60%的乙醇溶剂作为提取剂,料液比为1 ∶35,提取时间为2.5 h,温度为80°C是龙眼壳总黄酮提取的最佳工艺,其得率为3.66%,且得到的最佳工艺条件通过验证实验证明是稳定可行的。

2)黄酮类化合物是一大类天然产物,广泛存在于植物界,是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇,其它包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等[6]。天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,能通过血脑屏障,能进入脂肪组织,进而体现出如下功能:消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能[7,8]。

3)本实验结果表明,龙眼壳中含有较为丰富的黄酮类化合物,有广泛的开发前景和利用价值。

参考文献

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荷叶黄酮提取工艺的研究 第9篇

目前荷叶黄酮的提取方法主要有浸提法、微波提取法和超声波法等, 本文以乙醇为提取剂, 采用正交试验的方法从荷叶中提取荷叶黄酮, 系统研究了在不同的提取温度、时间和料液比等条件下的提取效果, 并确定了最佳的提取工艺。

1 试验材料与方法

1.1 材料

(1) 试验材料:荷叶采于孝感市星河镇。

(2) 主要仪器:SHZ-Ⅲ型循环水真空泵、HH-524双列四孔水浴锅、RE-52AA旋转蒸发器, 上海亚荣仪器厂;UV-240分光光度计, 日本岛津。

(3) 主要试剂:乙醇、无水氯化铝和卢丁均为国产分析纯。

1.2 试验方法

1.2.1 荷叶的预处理

将新鲜荷叶洗净、沥干, 于50℃烘箱中烘干后, 粉粹并过40目筛, 放置于冰箱中备用。

1.2.2 提取溶剂的确定

黄酮类物质的提取通常采用极性溶剂提取和水提取2种方法, 由于乙醇溶液容易渗入至原料的内部, 提取效果要优于水提取法;另外, 乙醇价格低廉, 食用安全性高, 可回收再次利用。所以, 本研究选用乙醇作为荷叶黄酮的提取溶剂。

1.2.3 标准曲线的制作

准确称取烘干至恒重的芦丁标准品0.01875g, 置于100mL容量瓶中, 用70%的乙醇溶解并定容至100mL, 得质量浓度为0.1875mg/mL的芦丁标准液。分别吸取上述芦丁标准液0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0mL于25mL比色管中, 加入70%乙醇稀释至10mL, 滴加1mol/L AlCl3溶液3.0mL, 摇匀, 用70%乙醇稀释至刻度, 室温放置20min后, 于415nm处测其吸光度, 以试剂空白为参比液。以吸光度A为纵坐标, 芦丁标准液浓度C为横坐标, 绘制准曲线如图1所示。

1.2.4 荷叶黄酮的提取及测定

准确称取一定量干荷叶粉, 转移至500mL的平底烧瓶中, 按一定的料液比加入一定浓度的乙醇, 在设定温度下浸提一段时间, 减压抽滤, 合并提取液后离心, 取一定量的上清液, 用试剂空白做参比液, 用制作标准曲线同样的方法, 测定其黄酮类物质的含量, 计算提取率。

式中:Y为根据标准曲线方程计算出的荷叶中黄酮类物质的质量浓度, mg/mL;V为原浸提液体积, mL;W为提取用荷叶粉的质量, g;N为稀释倍数。

2 结果与分析

2.1 乙醇浓度对提取效果的影响

准确称取6份荷叶粉, 每份5g, 分别放入6只500mL的平底烧瓶中;再分别向其中加入不同浓度的乙醇150mL, 在50℃下保温提取2h, 冷却后减压抽滤、离心, 分别取1mL提取液, 置于100mL容量瓶中, 用对应浓度的乙醇定容至100mL, 然后按照1.2.3方法进行黄酮类物质的测定。

由表1可知:当乙醇浓度大于40%以后, 提取液的吸光度处于上升趋势。乙醇浓度达到70%时, 提取液的吸光度最高, 提取效果最好。乙醇浓度大于70%后, 提取液的吸光度开始下降, 说明提取效果变差。这可能是因为荷叶黄酮为多种物质的混合物, 包括各种苷元和黄酮苷, 由于其性质和化学结构不同, 在不同浓度的乙醇中有着不同的溶解度。本试验选取60%、70%和80%作为正交试验的3个水平。

2.2 温度对提取效果的影响

准确称取5份荷叶粉, 每份5g, 分别放入5只500mL的平底烧瓶中;再分别向其中加入70%的乙醇150mL, 在不同温度下保温提取2h, 冷却后减压抽滤、离心, 分别取1mL提取液, 置于100mL容量瓶中, 用70%的乙醇定容至100mL, 然后按照1.2.3方法进行黄酮类物质的测定。

由表2可知:当温度达到50℃时, 提取液的吸光度最高, 提取效果最好;温度超50℃时, 提取液的吸光度呈下降趋势, 说明高温不利于荷叶黄酮的提取, 同时, 温度太高, 黄酮类物质会氧化, 杂质溶出也较多, 影响其稳定性和提取效果, 综合考虑, 本试验选取50、60和70℃作为正交试验的3个水平。

2.3 料液比对黄酮提取效果的影响

准确称取5份荷叶粉, 每份5g, 分别放入5只500mL的平底烧瓶中;再分别以不同的料液比向其中加入70%的乙醇, 在50℃浸提温度下, 分别对样品提取2h, 冷却后减压抽滤、离心, 分别取1mL上清液, 置于50mL容量瓶中, 用70%的乙醇定容至50mL, 然后按照1.2.3方法进行黄酮类物质的测定。

由图2可知:当料液比为1∶40时, 提取率达到最大;考虑到溶剂量太少, 不利于操作, 增大溶剂量也给工业生产造成浪费。因此, 本试验选取1∶20、1∶30和140作为正交试验的平个水平。

2.4 浸提时间对荷叶黄酮提取效果的影响

准确称取5份荷叶粉, 每份5g, 分别放入5只500mL的平底烧瓶中;再分别向其中加入70%的乙醇150mL, 在浸提温度50℃的条件下, 保温提取不同时间, 冷却后减压抽滤、离心, 分别取1mL提取液, 置于100mL容量瓶中, 用70%的乙醇定容至100mL, 然后按照1.2.3方法进行黄酮类物质的测定。

由表3可知:当提取时间小于2h时, 随着浸提时间的延长, 吸光度不断增大, 提取2h后, 吸光度开始下降;说明在一定的时间范围内, 黄酮类物质的提取率不断上升, 超过2h后, 有效物质的溶出量减少, 提取率逐渐下降。因此本试验选取1.5、2.0和2.5h作为正交试验的3个水平。

2.5 正交试验确定最佳工艺参数

上述试验对不同提取工艺参数进行了初步筛选, 为进一步得到荷叶黄酮的最佳工艺条件, 参照上述试验结果, 以影响黄酮类物质提取率的乙醇浓度、料液比、温度和提取时间为4个影响因素, 设计[L9 (34) ]的正交试验。正交试验结果见表4, 方差分析见表5。

由表4可知:RA>RC>RB>RD, 即温度对提取率的影响最大, 其次是时间和料液比, 最后是乙醇浓度, 与表5结果相一致。比较优的提取条件是A1B3C1D1, 即浸提温度50℃、料也比1∶40、时间1.5h和乙醇浓度为60%, 依此条件做追加试验, 得到荷叶黄酮的提取率为3.17%。此结果高于正交试验中所有的提取率, 因此这个结果是合理的, 考虑到成本及生产效率, 此组合为最佳生产工艺条件。因此, 本试验确定提取荷叶黄酮提取的最佳提取条件为温度为50℃、时间为1.5h、料也比1∶40和乙醇浓度为60%。

3 结论

在荷叶黄酮的提取中, 提取温度和时间是影响提取效率的2个主要因素, 而料也比及乙醇浓度对提取效果影响相对较小。通过正交试验, 获得了荷叶黄酮的最佳提取条件:温度为50℃、时间为1.5h、料也比1∶40和乙醇浓度为60%;在此条件下的提取率为3.17%。

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金盏银盘总黄酮提取工艺研究 第10篇

关键词：金盏银盘,总黄酮,含量测定,提取工艺

金盏银盘(Bidens biternate(Lour.)Merr.et Sherff)为菊科鬼针属植物金盏银盘全草,药性:甘,微苦,凉。功用主治:清热,解毒,凉血。主治感冒暑热,黄疸,泻痢,吐血,血崩,跌打损伤,痈肿,鹤夕风,疥疮等[1]。据报道鬼针草能针草提取降低血压、降低血浆胆固醇,提高血浆高密度脂蛋白,并能降低胰岛素,可抑制ADP、胶原诱导的血小板聚集[2]。近年来,临床研究表明从鬼针草中提取的黄酮类化合物具有活血化瘀、通脉降压等功效,用于治疗原发性高血压,心脑血管疾病,具有抗血栓形成作用,对动脉硬化、血管栓赛有预防和治疗作用[3,4]。此外,还有研究发现鬼针草总黄酮对CCl4所致的小鼠急性化学性肝损伤和大鼠肝纤维化均有很好的防治作用[5]。金盏银盘是鬼针属类药材,该药材含有较多的黄酮类化合物,因此金盏银盘总黄酮在医药领域的应用具有广阔的前景,为了进一步开发和充分利用金盏银盘中总黄酮,我们采用正交实验的方法对其提取工艺进行研究。

1 仪器和试剂

电子天平AB104-N;UNICO-UV-2102-PC型紫外可见分光光度计;KQ-500B型超声波清洗器。

芦丁标准品(100080-200707),中国药品生物制品检定所;金盏银盘药材,江西樟树药材市场购买,由我校药用植物教研室葛菲教授鉴定;无水乙醇、三氯化铝均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 对照品溶液的制备

取芦丁对照品10 mg,精密称定,加70%乙醇充分溶解,转移至25 mL容量瓶,加70%乙醇定容到刻度,摇匀,得对照品溶液。

2.2 测定波长选择

取芦丁对照品溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中,加10%AlC3溶液1 mL(70%乙醇配制),用70%乙醇定容到刻度,摇匀。以70%乙醇溶液为空白,在200～800 nm范围内扫描。结果表明芦丁对照品溶液在428 nm处有最大吸收,因此选择428 nm为测定波长。

2.3 标准曲线的绘制

分别移取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL 于10 mL容量瓶,加10%AlC3溶液1 mL,用70%乙醇定容到刻度,摇匀。以70%乙醇溶液为空白,在428 nm范围内测定吸光度,以吸光度(A)对溶液浓度(C)作图,绘制标准曲线。得回归方程:

A=36.5148C+0.0028, R=0.9997

表明芦丁在浓度0.00415～0.0815 mg/mL范围内,A对C具有良好的线性关系。

2.4 供试品溶液的制备

取金盏银盘药材粗粉4.0 g,精密称定,置于250 mL的单口烧瓶中,加入20倍量的70%乙醇(80 mL),超声提取两次,提取温度为60 ℃,每次提取1.5 h,抽滤,合并滤液,药渣用70%乙醇洗涤2～3 次,一并纳入滤液,置于250 mL的容量瓶中,用70%乙醇定容,摇匀,的供试品溶液,待用。

2.5 金盏银盘总黄酮提取方法的建立

2.5.1 用乙醇超声提取

精密称取金盏银盘全草4.0 g,置于250 mL的单口烧瓶中,加入20倍量的70%乙醇(80 mL),超声提取两次,提取温度为60 ℃,每次提取1 h,抽滤,合并滤液,药渣用乙醇洗涤2～3次,一并纳入滤液,置于250 mL的容量瓶中,用70%乙醇定容,摇匀,待用。

2.5.2 用乙醇回流提取

精密称取金盏银盘全草4.0 g,置于250 mL的单口烧瓶中,加入20倍量的70%乙醇(80 mL),水浴回流提取两次,提取温度为80 ℃,每次提取1 h,趁热抽滤,合并滤液,药渣用乙醇洗涤2～3 次,一并纳入滤液,置于250 mL的容量瓶中,用70%乙醇定容,摇匀,待用[6]。

2.5.3 样品溶液总黄酮含量测定

精密量取样品溶液3 mL,置于10 mL的容量瓶中,按标准曲线制定方法进行操作,测定吸光度,由回归方程计算样品中总黄酮的含量,结果见表1。

由表1结果可以看出,超声提取法优于回流提取法。超声提取的总黄酮的量比回流提取的总黄酮的量约多1.1%。故本实验选择用乙醇超声提取的方法提取金盏银盘总黄酮。

2.6 乙醇超声提取法的工艺试验考察

2.6.1 正交试验因素水平的确定

取9份金盏银盘药材,每份约4 g,用托盘天平称定,置于250 mL的单口烧瓶中,按正交试验设计的要求进行实验。实验采用L9(34)正交设计,考察的影响因素有:A乙醇的浓度(%)、B乙醇的用量(倍)、C提取时间(h)、D提取的温度(℃)四个因素,提取的次数均为两次,确定的因素水平见表2。

2.6.2 正交实验结果

根据表3的分析结果可知,金盏银盘乙醇超声提取时,各个因素对金盏银盘总黄酮提取效果的影响程度不同,各因素的影响程度依次为A>C>B>D,可知对提取效果影响有统计学意义的因素是乙醇浓度A。综合直观的分析和方差分析的结果,金盏银盘总黄酮提取的最优工艺为A1B3C3D1,即用20倍量的70%乙醇,在60 ℃超声提取两次,每次提取1.5 h。

2.6.3 精密度和重复性实验

取同一供试品溶液,同法测定5次,分别计算供试品溶液中总黄酮的含量,其RSD为1.26%,表明该方法具有较好的精密度。

取同一样品5份,各4.0 g,精密称定后依法提取测定总黄酮的含量,每份样品测定3次,并取平均值,计算RSD为2.47%。说明在金盏银盘中总黄酮的提取和含量测定中,该提取工艺具有良好的稳定性和重现性。

3 结 论

对金盏银盘总黄酮提取结果影响较大的是乙醇浓度和提取时间,其次是乙醇的用量,影响最小的是提取温度。通过实验最后确定最优工艺的提取条件是,乙醇浓度为70%,提取时间为1.5 h,乙醇用量为药材量的20倍,提取温度为60 ℃。经验证该方法具有可靠地稳定性,为提高金盏银盘的使用价值和效率提供了指导。

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山楂黄酮提取工艺研究 第11篇

关键词：乌腺金丝桃;总黄酮;超声提取;正交设计

基金项目：吉林农业科技学院大学生创新项目（2015008）

中图分类号： S567                             文献标识码：  A                 DOI编号：   10.14025/j.cnki.jlny.2016.24.043

乌腺金丝桃是藤黄科草本植物，功效为镇痛、止血、通乳，主要应用于吐血、子宫出血、风湿关节痛、神经痛、跌打损伤、乳腺炎[1]。研究表明，其具有治疗心脏病、抗肿瘤等作用，主要药效物质为黄酮类化合物[2，3]。黄酮类化合物因其具有抗菌、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、镇痛、保肝、利尿、调节血管渗透性、延缓衰老、防护紫外线损伤等广谱的药理作用引人瞩目[4]。鉴于乌腺金丝桃总黄酮提取工艺的研究少见报道[5]，且用超声法从乌腺金丝桃中提取总黄酮的研究未见文献报道，笔者在本试验中采用正交试验设计，对影响其提取率的多个因素进行了考察，以期优选出超声法提取乌腺金丝总黄酮的最佳工艺。

1 材料

1.1 试剂与材料

本试验材料为乌腺金丝桃叶，于2015年9月采自吉林农业科技学院左家校区乌腺金丝桃试验田，鼓风烘干（50℃）备用。金丝桃苷标准品;无水乙醇、甲醇、亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠。

1.2 仪器

电热鼓风干燥箱、 电子分析天平、循环水式真空泵、旋转蒸发仪、超声波清洗器、紫外可见分光光度计。

2方法

2.1试验流程

样品称重超声提取抽滤滤液浓缩定容离心测定含量计算提取率。

2.2标准品溶液的配制

精密称取金丝桃苷标准品3.8毫克，溶解于甲醇中，制成浓度为380微克/毫升的标准品母液。

2.3 空白溶液的配制

取甲醇0.5毫升，加入5% NaNO2溶液0.3毫升，摇匀，放置6分钟，加入10% Al（NO3）3溶液0.3毫升，摇匀，放置6分钟，再加入4% NaOH溶液3毫升，摇匀，放置15分钟，即为空白对照液[3]。

2.4测定波长的选择

对2份样品和金丝桃苷对照品经显色后，在350～700nm范围内扫描。金丝桃苷对照品的λmax=530nm处，样品提取液的λmax=525～527nm，故选择显色后在527nm处测定吸光度。

2.5标准曲线的绘制

取母液稀释得系列浓度标准品溶液。分别取各浓度标准品溶液0.5毫升，按2.3项操作，离心，在527nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，金丝桃苷浓度为横坐标做标准曲线，得线性方程y=0.0006x+0.00765（R2=0.99905），线性范围是5.93～380微克 /毫升。

2.6样品溶液的制备和总黄酮提取率的计算

取药材粗粉2.0克，精密称取，用乙醇溶液超声提取。提取液抽滤浓缩，用甲醇定容并依据试验情况适当稀释，精密量取溶液0.5毫升，按按2.5项操作，测定吸光度（A），计算总黄酮的含量及总黄酮的提取率，提取率=样品中总黄酮的量/药材重量×100%。

2.7单因素考察

平行条件分别考察乙醇浓度、温度、提取时间、料液比、超声功率在不同水平下对乌腺金丝桃中总黄酮提取效果的影响。

2.8正交试验

采用L9（34）正交试验安排表进行试验，以考察多因素对提取过程的交互影响，从而筛选出超声提取最佳工艺。因素及水平设置见表1。

3 结果与分析

表1超声提取法的L9（34）正交因素水平表

表2单因素考察结果

3.1单因素考察结果

单因素考察结果见表2，结果表明，乙醇浓度、温度、提取时间、超声功率对总黄酮提取效果有影响，料液比对提取效果影响不大，确定提取时料液比为1∶22。依据结果确定正交试验各因素的合理水平。

3.2 正交试验结果

表3  超声法提取的正交试验结果

极差分析结果的R值大小表明，四种因素对乌腺金丝桃中总黄酮提取影响程度A>B>D>C，即乙醇浓度>温度>超声功率>提取时间，说明因素A为影响乌腺金丝桃中总黄酮提取率的主要因素;四种因素的K值表明各因素水平的影响程度是A1>A2>A3，B2>B3>B1，C3> C1>C2，D2>D3>D1，综上所述，理论最佳的工艺条件是A1B2C3D2，即样品用60%乙醇采用超声功率为120W在超声温度60℃条件下提取50分钟，见表3。

3.3 验证性试验结果

按照上述确定的最佳条件，取5份样品做了5次平行试验，总黄酮平均提取率8.15%，算得相对标准偏差RSD=2.77%<3%，进一步说明正交试验所得的最佳条件为提取乌腺金丝桃总黄酮较为理想的工艺。

4 结语

以总黄酮提取率为评价指标的正交试验结果表明，乙醇浓度对乌腺金丝桃中总黄酮的提取影响程度显著，提取温度与超声功率影响次之、提取时间与料液比影响程度较小;正交试验分析及验证性试验结果表明，乌腺金丝桃中总黄酮超声提取最佳工艺条件是样品用22倍量的体积分数为60%乙醇采用超声功率为120W在超声温度60℃条件下提取50分钟，在此条件下总黄酮提取率是8.15%。

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作者简介：薛颖，吉林农业科技学院，在读本科生，研究方向：中药学。

山楂黄酮提取工艺研究 第12篇

本研究在超声频率80 Hz超声波辅助条件下,考察了山楂色素的浸提工艺,通过正交试验对提取工艺进行优化,现将结果报道如下。

1 材料

1.1 原料与主要试剂

山楂果,市售;甲醇、乙醇、乙酸乙酯,购自天津科密欧化学试剂公司。

1.2 主要仪器

紫外-可见分光光度计,北京普析仪器公司生产;双频超声清洗仪,北京京海正通科技公司生产;离心机,湖南星科公司生产。

2 方法

2.1 提取工艺流程

新鲜山楂果→切片→45℃烘箱中烘干→粉碎→超声浸提→色素提取液→备用。

2.2 山楂色素最大吸收波长的测定

取一定量山楂色素提取液用体积比1∶1的乙醇和乙酸混合溶液稀释至适当浓度,采用紫外-可见分光光度计测定山楂色素的吸收光谱,确定其最大吸收波长。

2.3 单因素试验

2.3.1提取溶液的选择

称取4份2.00 g山楂粉,分别溶于15 m L无水乙醇、甲醇、乙酸和1∶1的无水乙醇和乙酸的混合液中,在超声仪中于20℃水浴超声浸提30 min,离心,分别用提取液定容至25 m L。利用紫外-可见分光光度计测定,确定最佳提取溶液。

2.3.2料液比的选择

称取2.00 g山楂粉,分别按料液比1∶4,1∶6,1∶8,1∶10,1∶15溶于1∶1的无水乙醇和乙酸混合液中,在超声仪中于20℃水浴超声浸提30 min,离心,再定容至25 m L。利用紫外-可见分光光度计测定,确定最佳提取料液比。

2.3.3提取温度的选择

称取2.00 g山楂粉,溶于15 m L的1∶1无水乙醇和乙酸混合液中,分别于20℃、40℃、60℃、80℃水浴超声浸提30 min,离心,再定容至25 m L。利用紫外-可见分光光度计测定,确定最佳提取温度。

2.3.4提取时间的选择

称取2.00 g山楂粉,溶于15 m L的1∶1无水乙醇和乙酸混合液中,在超声仪中于20℃水浴超声浸提10 min、20 min、30 min、40 min,离心,定容至25 m L。利用紫外-可见分光光度计测定,确定最佳提取时间。

2.4 山楂色素提取条件的优化

在单因素试验的基础上,考察提取温度(A)、料液比(B)、提取时间(C)对山楂色素提取率的影响,进行L9(33)正交试验,见表1,以提取液的吸光度值为评价指标,确定山楂色素的最佳提取工艺。

3 结果与讨论

3.1 山楂色素最大吸收波长的确定

使用紫外-可见分光光度计在波长450~700 nm范围内进行扫描,确定山楂色素提取液的最大吸收波长,结果见图1。

由图1可知,山楂色素提取液最大吸收波长为554 nm。

3.2 不同溶液的选择

利用紫外-可见分光光度计考察提取溶液不同时对提取效果的影响,结果见图2。

由图2可知,体积比1∶1的无水乙醇与乙酸混合溶液的吸光度值最大,提取效果最好。以下试验均用体积比1∶1的无水乙醇与乙酸混合溶液作为提取溶剂。

3.3 料液比对山楂色素提取的影响

分别设料液比为1∶4,1∶6,1∶8,1∶10,1∶15,超声辅助提取色素,料液比对山楂色素提取量的影响见图3。

由图3可知,吸光度值先升高后下降,并在料液比为1∶8时吸光度值达到最大,随后吸光度值缓慢减小,故最适提取料液比为1∶8。

3.4 温度对山楂色素提取的影响

结果见图4。

由图4可知,固定其他提取条件,改变提取温度提取山楂色素,在提取温度为20~60℃时,溶液的吸光度值随着提取温度的升高而增加,说明温度高有利于提取山楂色素。但当提取温度>80℃时,对能源的消耗较高,高温会引起一些不稳定成分变质或分解,故最适提取温度为60℃。

3.5 时间对山楂色素提取的影响

结果见图5。

由图5可知,在10~40 min范围内适当增加提取时间,可使更多的山楂色素溶出,说明此区间提取时间的增加可有效提高提取效率,当提取时间为30 min时,色素的提取量达到最大值,在10~40 min范围内吸光度值随着提取时间的增加而减小。故选择提取时间为30 min。

3.6 山楂色素提取条件的优化

结果见表2。

由表2可知,3个因素对山楂色素提取率的影响依次为A>C>B,即提取温度>提取时间>料液比,其中提取温度对提取率的影响显著;3因素的最优组合为A3B2C3,即当提取温度为80℃、料液比为1∶8、提取时间为30 min时,花青素提取效果最好。但从节省成本的角度考虑,试验最终确定提取温度为60℃,即调整后的组合为A2B2C3。

4 结论

通过试验确定山楂色素最大吸收波长为554 nm,最佳提取溶剂为体积比1∶1无水乙醇与乙酸混合溶液,正交优化试验得出山楂色素的最佳提取条件:提取时间30 min、提取温度60℃、料液比1∶8,该提取工艺为山楂色素的进一步应用提供了理论参考。

摘要：为了研究山楂色素的浸提工艺,试验采用正交法对山楂色素的提取工艺进行优化,在单因素试验的基础上,以浸提时间、料液比、温度为自变量,在超声频率为80 Hz超声波辅助条件下,通过正交试验得到微波辅助浸提山楂色素的最佳工艺条件。结果表明:体积比1∶1的乙醇和乙酸混合溶液为最适宜提取液,最适宜提取时间为30 min,温度为60℃,料液比为1∶8。说明正交法优化超声波辅助山楂色素工艺的提取效果较好,工艺简单,具有一定研究价值。

关键词：山楂,花青素,微波辅助,单因素,浸提工艺,正交法

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