齐墩果酸范文

齐墩果酸范文（精选9篇）

齐墩果酸 第1篇

1 齐墩果酸的药理作用

1.1 保肝护肝作用

自20世纪70年代人们便开始研究OA的保肝护肝作用。研究发现OA对四氯化碳诱导的大鼠肝损伤具有明显的保护作用[3]。

Liu Y等[4]的研究表明经过OA处理的肝脏能够显著抑制血清丙氨酸转氨酶、乳酸脱氢酶和脂质过氧化酶活性,降低血清谷丙转氨酶水平,进而减少肝细胞的坏死以及肝组织的炎症反应和纤维化,促进肝细胞的再生。经研究部分原因是经过OA处理可以保护四氯化碳诱导的肝谷胱甘肽排空,并通过抑制细胞色素酶P450的活性,抑制四氯化碳的代谢活性。进而达到预防四氯化碳、酒精诱发的肝硬化的作用。

Zhang L等[3]研究表明OA还能够提高小鼠肝脏内谷胱甘肽、金属硫蛋白、谷胱甘肽-S转移酶等抗氧化物质的含量水平,提高肝脏解毒能力。

赵骏等[6]研究认为OA的保肝作用与其结构中的活泼官能团羧基,羟基,羰基能够与有毒物质结合有关。

1.2 齐墩果酸的抗癌作用

近年来,研究人员在药理研究中发现OA可以作用于肿瘤发生的不同阶段,包括抑制肿瘤的形成,阻止肿瘤诱发和诱导肿瘤细胞分化,同时还能有效地抑制血管发生肿瘤细胞的侵害和转移。

张东方等[7]研究发现齐墩果酸具有抗人肺癌细胞增殖和侵袭作用,并有诱导PGCL3细胞凋亡的作用。Ohigashi H 等[8]发现OA对由12-氧代-十四烷基大戟二萜醇-13-乙酯(TPA)诱导的Epastein-Barr 病毒(EBV)在人淋巴瘤细胞株 Raji 细胞中的活化有抑制作用。赵蕾等[9]的研究发现OA可以抑制人慢性粒细胞白血病K562细胞在常氧及低氧条件下VEGF mRNA和蛋白的表达。通过抑制VEGF的分泌可以实现抗血管新生治疗白血病,但进一步的作用机制还有研究。

王晓峰等[10]对小鼠体外试验,发现OA不仅可抑制肿瘤生长,还能降低不良辐射损伤即降低放疗对鼠造血组织损伤的作用。另有研究报道[11],从1 000种植物提取物和纯化合物中筛选出OA等7种物质作为人DNA连接酶Ⅰ的天然抑制物,它们可通过发挥变构效应而破坏该酶的活性部位,该作者认为研究这些活性物对鉴定它们对于酶的特定细胞学功能很重要,也对它们发展为抗肿瘤药物很重要。

1.3 齐墩果酸的降血糖、血脂作用

柳占彪等[12]采用四氧嘧啶腹腔注射造成大鼠高血糖模型,观察OA对高血糖大鼠血糖、肝糖原、肝糖原分布及形态的影响,结果显示给予OA的高血糖大鼠其血糖浓度下降肝糖原浓度上升且与同期造型对照组大鼠相比,OA治疗组大鼠肝小叶内糖原颗粒分布较多,肝细胞内糖原颗粒流失亦较轻。殷峻等[13] 通过观察与人肝细胞表型相似的人肝癌细胞(HepG2)24 h发现OA只能使使糖的消耗量轻度增加同时对βTC3细胞的胰岛素分泌有抑制作用,因此认为OA的降糖作用存在其他作用机制。

郝志奇等[14]研究发现齐墩果酸能降低正常小鼠的血糖,对抗肾上腺素或葡萄糖引起的小鼠血糖升高,并对四氧嘧啶引起的小鼠糖尿病有预防和治疗作用。Ali等[15]研究表明齐墩果酸对α-糖苷酶具有抑制作用,并认为这是其降糖作用的机制之一。

向阳等[16]研究了OA对高脂血症大鼠模型血脂水平的影响,结果OA组血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)水平明显低于高脂模型对照组。刘玉兰等[17]研究了OA对老龄小鼠某些功能的影响,研究结果表明,可明显抑制胶原及ADP诱导的血小板聚集,连续给药一周,其对血小板聚集的抑制作用明显优于一次给药的作用,剂量增加,作用加强,又可使血小板电泳迁移速率加快。

1.4 抗病毒及微生物的作用

近些年来超级细菌的出现以及人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者数量的急剧增加与抗生素和其他抗病毒药的滥用具有密切关系,目前对此类疾病多用西药进行防治,但西药有较大的毒副作用,且耐药性也越来越严重,急需开发出具有抗病毒及微生物潜力的新型药物。

曾范利,于录等[18]采用MABA法和二倍稀释法测定OA体外抗菌活性实验中发现OA对结核分支埃希菌H37Rv(ATCC 27294)和H37Ra(ATCC 25177)均有明显的抗菌活性,对这两种结核菌的最低抑菌浓度均为16 μg/mL。并且研究了其细胞毒性实验,OA的脾细胞毒性结果与4种常规抗结核菌药及空白对照比较,OA的OD570较空白略高,而4种常规抗结核菌药的OD570均低于OA,表明OA在所测药物浓度范围内对于小鼠脾细胞没有毒性。OA的肝细胞毒性结果与4种常规抗结核菌药及空白对照比较,OA的OD570较空白略高,而4种常规抗结核茵药的OD570均低于它,表明OA在所测药物浓度范围内对于小鼠肝细胞没有毒性。Huang D 等[19]认为齐墩果酸可能作用于细菌细胞外膜,引起形态改变导致细菌自溶而产生抗革兰阳性菌作用。

艾滋病毒蛋白酶(Protease,HIV-PR)是艾滋病毒(HIV)繁殖的必需酶之一,已被证明是寻找治疗艾滋病药物的最有效靶点之一。为了从天然药物中寻找价廉并具有抗耐性的抗艾滋病毒成分,Ma Chao-mei以抗HIV-PR的活性为指标,对几种粗筛有活性的传统药物进行活性成分的追踪分离。发现文冠木的抗HIV-PR活性成分包括OA[20]。

1.5 抗炎作用

戴岳等[21]报道了齐墩果酸对不同致炎引起的大鼠足垫肿胀及二苯胺引起的小鼠耳肿胀等炎症模型都有明显的抑制作用。

Giner-Larza等[22]实验发现OA对二肽基肽酶引起的耳肿胀、佛波酯引起的皮炎、缓激肽引起的爪水肿具有抑制作用,并且研究了可能的抗炎机制。动物实验证实批杷叶乙醇提取物的乙酸乙酯和正丁醇苹取物对二甲苯引起的小鼠耳肿胀有明显抑制作用。对构糠酸喷霉引起的豚鼠嚏嗽有明显的止咳作用。而经提取分离及活性分析发现其有效成分为齐墩果酸及其衍生物[23]。

1.6 对免疫系统的影响

OA 对前列腺素合成具有明显的促进作用,能刺激环腺苷酸水平上升,对环鸟苷酸和组胺释放有明显抑制作用,证明OA具有免疫抑制作用。OA可显著促进淋巴细胞增殖和巨噬细胞功能,并与白细胞介素2具有协同作用[24]。

1.7 抗衰老作用

更年期是女性衰老的主要表征之一,而患有更年期综合症的女性体内自由基明显增多并且伴随着卵巢等各组织器官的衰老。娄艳、陈志良等[25]将给予OA的更年期大鼠与未给药的更年期大鼠进行比较实验,分别检测大鼠E2、MDA、SOD、GSH-Px水平,光镜观察卵巢、肾上腺皮质形态改变等指标,结果表明给予齐墩果酸的大鼠与对照组相比较SOD、GSH-Px活性明显提高,并且MDA浓度降低。而且OA明显改善了大鼠卵巢与肾上腺皮质的老化程度。

1.8 抗溃疡作用

Rodriguez等[26]在动物实验中将OA用于醋酸引起的胃损伤,给药后受损区域明显减少。给药剂量为50 mg/kg和100 mg/kg时,治疗比率分别为54.5%和76%,而对照组的雷尼替丁给药50 mg/kg时治疗比率为84%,黏膜厚度相应从342 μm增加到540 μm(100 mg/kg OA)和945 μm(50 mg/kg雷尼替丁),对胃进行组织学检查,显示损害区域开始再生。由于OA良好治疗作用和毒性低以及分布范围广等优点所以开发齐墩果酸极其衍生物是很有发展前景的。

2 结 语

以齐墩果酸为原料开发的药物齐墩果酸片已经应用于临床作为肝病辅助药,用于治疗传染性急性黄疸型肝炎及肝硬化,具有明显的降低谷丙转氨酶的作用。并且OA作为恶性肿瘤的免疫治疗用药已经进入二期临床,作为天然化合物OA具有抗癌、抗菌、抗病毒等药理活性并且有毒副作用小的优点,是一种很具有开发潜力的天然产物,可以作为药物或保健品的原料。并且由于它具有优秀的生物活性尤其是在抗癌及抗HIV等方面,科研工作者已经以它作为先导化合物希望开发出高效低毒的药物,那么在不久的将来将会有更多以齐墩果酸衍生物为主要成分的药物将被广泛应用于临床。

摘要：五环三萜类化合物齐墩果酸广泛分布于多种天然植物中,具有多种生物活性。本文综述了近年来对齐墩果酸药理方面的研究进展并对其研究前景进行了展望。

齐墩果酸胶囊说明书及相关作用 第2篇

【商品名称】齐墩果酸胶囊(奥星1号)

【拼音全码】QiDunGuoSuanJiaoNang(AoXing1Hao)

【主要成份】齐墩果酸胶囊(奥星1号)每粒含齐墩果酸20毫克。辅料为：淀粉。

【性状】齐墩果酸胶囊(奥星1号)为硬胶囊，内容物为白色粉末。

【适应症/功能主治】用于急、慢性肝炎的辅助治疗。

【规格型号】40粒*10瓶

【用法用量】口服。成人，急性肝炎一次1-2粒，慢性肝炎一次2-4粒。一日3次。

【不良反应】1.少数患者有口干、腹泻、上腹部不适感，经对症处理可消失。2.个别患者出现血小板轻度减少，停药后可恢复。

【禁忌】尚不明确。

【注意事项】1.齐墩果酸胶囊(奥星1号)为肝病辅助治疗药。第一次使用齐墩果酸胶囊(奥星1号)前应咨询医师。治疗期间应定期到医院检查。2.儿童用量请咨询医师或药师。3.如服用过量或出现严重不良反应，应立即就医。4.对齐墩果酸胶囊(奥星1号)过敏者禁用，过敏体质者慎用。5.齐墩果酸胶囊(奥星1号)性状发生改变时禁止使用。6.请将齐墩果酸胶囊(奥星1号)放在儿童不能接触的地方。7.儿童必须在成人监护下使用。8.孕妇、哺乳期妇女及老年人应在医师指导下使用。9.如正在使用其他药品，使用齐墩果酸胶囊(奥星1号)前请咨询医师或药师。

【儿童用药】儿童必须在成人监护下使用。

【老年患者用药】尚不明确。

【孕妇及哺乳期妇女用药】尚不明确。

【药物相互作用】如与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用，详情请咨询医师或药师。

【药物过量】尚不明确。

【药理毒理】齐墩果酸胶囊(奥星1号)对肝损伤有一定的保护作用，可使升高的血清丙氨酸氨基转移酶下降，促进肝细胞再生，加速坏死组织的修复。

【药代动力学】尚不明确。

【贮藏】密闭保存。

【包装】40粒*10瓶/盒。

【有效期】24月

【批准文号】国药准字H61022832

【生产企业】陕西奥星制药有限公司

齐墩果酸 第3篇

【摘要】 目的：建立RP-HPLC法对祛瘀散结胶囊中齐墩果酸的含量测定。方法:采用Platisil ODS柱（250mm ×5.0mm，5μm），流动相为甲醇-0.4%磷酸（90:10v/v），流速1.0mL?min-1；检测波长210nm，柱温40℃。结果：齐墩果酸在0.175~1.225ug范围内线性关系良好，得回归方程：y=3.46+7.24C（r=0.999 4，n=7），最低检测质量浓度为0.175ug，祛瘀散结胶囊中齐墩果酸的含量为266.1716ug/g～274.2573ug/g。结论：该方法具有操作简便、方法可靠、结果准确，稳定性好的特点，可用于祛瘀散结胶囊中齐墩果酸的含量测定及质量控制。

【关键词】 RP-HPLC；祛瘀散结胶囊；含量测定；齐墩果酸

【中图分类号】 R284.1

【文献标识码】 A【文章编号】1044-5511(2011)09-0008-02

祛瘀散结胶囊（抑瘤宝、块结消）由白花蛇舌草、山慈菇、三七、枳壳等多种中药制成的胶囊剂。具有祛瘀消肿，散结止痛的功效；用于瘀血阴絡所致的乳腺胀痛，乳癖，乳腺增生病。据文献报道^[1]：祛瘀散结胶囊能有效地抑制实验性小鼠乳腺小叶增生；临床研究表明祛瘀散结胶囊治疗乳腺增生病的总有效率为72.7％，同时可提高机体细胞免疫功能。对S180肉瘤的活性有抑制作用，实验证实：治疗组的抑瘤率分别为25.1%、62.3%和47.2%，环磷酰胺治疗组的抑瘤率为76.4%，接近环磷酰胺的抑瘤率^[2]。 治疗乳腺增生较乳核散结片疗效好，两组比较有统计学意义(P＜0.05)。能有效地抑制实验性小鼠乳腺小叶增生^[3]。对卵巢囊肿和子宫肌瘤也有较好的疗效^[4]。白花蛇舌草为茜草科耳草属植物白花蛇舌草（Hedyodis diffusa willd）的干燥全草，近年来大量研究表明白花蛇舌草对多种癌症如宫颈癌、胃癌、肝癌等均有明显的治疗作用。白花蛇舌草有较为复杂的化学成分，含有多糖、三帖酸、黄酮类、蒽醌类等多种化合物。齐墩果酸和熊果酸是其含有的两个主要有效成分，齐墩果酸具有较强的抗菌消炎作用，同时还具有保护肝脏、利水渗湿等功效。熊果酸对多种恶性肿瘤细胞有抑制其生长的作用，对诱癌致癌物也有一定的抵抗作用，除此以外还具有一些其他的更广泛的生物学效应^[5]。据文献报道^[6、7]祛瘀散结胶囊的质量标准是采用人参皂苷，未见有测定齐墩果酸含量的有关报道。在参考有关文献^[8]的基础上，建立了反相高效液相色谱法测定祛瘀散结胶囊中齐墩果酸含量的方法，本法准确、简便、快速，可作为祛瘀散结胶囊的质量控制指标。

1 仪器与试剂

岛津LC-10AVP高效液相色谱仪、SPD-10AVP紫外外-可见检测器、WML-2010色谱工作站，甲醇（高效液相色谱淋洗剂；上海国药集团化学试剂有限公司）、冰醋酸为分析纯，双蒸水（自制）。

齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0709-9808）；祛瘀散结胶囊为广西××制药有限公司产品（批号：090620、090906、091102）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Platisil ODS柱（250mm ×5.0mm，5μm），以甲醇-0.4%磷酸（90:10V/V）为流动相，流速1.0mL?min-1；检测波长210nm，柱温40℃。结果见图1。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品10.5mg，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（0.21μg•L -1）。。

2.3 供试品溶液的制备 取祛瘀散结胶囊内容物，研磨，精密称取3.0g至100mL具塞三角烧瓶中，加甲醇30.0mL，超声提取40min，取出，放至室温，用甲醇补足减失的质量，用定量滤纸过滤，取续滤液1.0mL，离心15min(15 000r/min)，上清液即为供试品溶液。

2.4 阴性干扰实验 按处方比例取处方中除白花蛇舌草以外的药材，制备缺少白花蛇舌草的阴性样品，按2.3项下方法制备阴性对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照品溶液及供试品溶液各15.0μL，注入到高效液相色谱仪中。结果可见，在阴性对照品溶液色谱图中与对照品溶液色谱图相应处无吸收峰，在供试品溶液色谱图中齐墩果酸的峰与其他成分峰的基本达到基线分离（图1）。 A:对照品溶液;B:供试品溶液;C:阴性对照品溶液 ;D:标准曲线图



A.齐墩果酸HPL色谱图 B.样品HPLC色谱图 



C.缺白花蛇舌草HPLC色谱图 D.齐墩果酸标准曲线图

2.5 标准曲线考察 精密吸取齐墩果酸对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5μL，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=3.46+7.24C（r=0.999 4，n=7），结果表明，齐墩果酸在0.175~1.225ug的线性范围线性关系良好，最低检出限为0.175ug。

2.6 精密度实验 取同一对照品溶液，分别精密吸取１０.０μL，注入到高效液相色谱仪中，进样6次。结果齐墩果酸峰面积的RSD为1.67%，提示所使用仪器的精密度良好。

2.7 稳定性实验 取同一供试品溶液，每隔２h进样1次，连续６次，RSD为１.８０%，表明供试品溶液在１２h 内稳定性良好。

2.8 重现性实验 精密称取同一批样品６份，按供试品实验方法进样测定，结果RSD为1.14%，提示本方法重现性良好.

2.9 回收率实验 取已知齐墩果酸含量为272.9716ug/g的样品适量，研磨，精密称取0.30g，共9份，分别加入标准品溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL，按2.3项下方法进行提取，进样测定，计算回收率。结果示平均回收率为95.65%，RSD值为1.57%。见表1。

表1 齐墩果酸加样回收率

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2.10样品含量测定 分别精密称取经研磨的不同批号（090620、090906、091102）的祛瘀散结胶囊内容物共9份（每一批号3份），按“2.3”项下制备，各取17.5μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。含量测定结果见表2。

表2 祛瘀散结胶囊中齐墩果酸的测定结果（n=3）

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3讨论

祛瘀散结胶囊是以中药经科学组方，现代制药工艺制备的复方胶囊制剂，其质量标准采用HPLC测定人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量的方法^[6、7]：该方法依据2010版《中国药典》三七含量测定方法，以HPLC测定其人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量^[8]。但这只是该制剂的质量控制方法之一。且祛瘀散结胶囊为复方制剂，成分复杂，测定人参皂苷Rg1的含量，测定过程采用了正丁醇提取，氨水洗涤，大孔吸附树脂柱吸附的方法除去干扰物质等步骤，较繁复^[6]。由于祛瘀散结胶囊的处方白花蛇舌草为君药，在参考相关文献的基础上^[8]，本文建立一种简便、快速、可靠的用RP-HPLC法测定该制剂中齐墩果酸含量。

该方法直接取祛瘀散结胶囊内容物，经研磨，精密称取一定量，加入甲醇，超声提取40min，精密取续滤液1.0mL，离心15min(15 000r/min)，上清液即可进样测定，齐墩果酸的分离度均大于1.5，完全达到药典的要求。

经上述RP-HPLC条件及方法的测定，祛瘀散结胶囊每克含齐墩果酸在266.1716～274.2573ug/g之间。 

本文建立的测定齐墩果酸含量方法，操作简单，方法稳定，可操作性强，可考虑替代原有的质量控制标准或同时使用。

参考文献

[1] 匡志鹏，刘剑勇，张传珉等. 块结消胶囊治疗乳腺增生病的实验和临床应用研究[J]. 广西中医学院学报，2001,18(1) ：9~11

[2] 张传珉，覃源才，黄仁彬等. 自拟抑瘤宝胶囊对小鼠移植性肿瘤的影响[J]. 广西医学 2003,25(5)：716~717

[3] 张传珉 覃源才 全达芳等. 抑瘤宝胶囊治疗乳腺增生病280例观察 [J]. 实用中医药杂志 2002，18(3) ：12~13

[4] 匡志鹏 覃源才 黄万珠等. 块结消胶囊对卵巢囊肿、子宫肌瘤的疗效观察[J]. 广西医学 2001，23(3) ：436~437

[5] 郑茂，范博，丁红，等.高效液相色谱法测定不同产地白花蛇舌草中齐墩果酸和熊果酸的含量[J].中国药物与临床 2010，10（3）：261-263

[6] 江维克 周涛. HPLC同时测定祛瘀散结胶囊中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量[J]. 中成药 2007，29(4) ：534~536

[7] 涂波 王丽 李春馨. HPLC法测定祛瘀散结胶囊中人参皂苷Rg1和Rb1的含量[J]. 实验科学与技术 2007，5(3)： 50~52，74

齐墩果酸 第4篇

关键词：红枣,齐墩果酸,微波提取,正交试验

红枣 (Zizyphus Jujube Date) 又称中华大枣、大红枣、华枣, 是鼠李科枣属植物枣树 (Zizyphus Jujube Mill) 的果实。红枣中含有多种皂苷类物质, 如齐墩果酸、熊果酸、山楂酸和桦木酸等[1]。齐墩果酸 (简称OA) 是五环三萜类化合物, 具有消炎抑菌, 促进肝细胞再生、防止肝硬化、强心、利尿、降血酯、降血糖、抑制变态反应等作用, 近年又证明有抗癌活性[2,3]。齐墩果酸结构复杂, 人工合成步骤较多, 且天然药物对人体无副作用, 目前仍依赖从植物中提取得到。微波提取法具有高效性、强选择性、操作简便、提取成本低等优点[4]。本实验采用微波法提取红枣齐墩果酸, 拟通过单因素试验和正交试验, 得出微波提取红枣齐墩果酸的最优工艺条件, 为微波法提取齐墩果酸和红枣的开发利用提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

红枣 (外购, 经干燥、粉碎后过0.178 mm筛备用) , 齐墩果酸标准品 (外购) ;香草醛、冰醋酸、甲醇、无水乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚等 (均为分析纯) 。

WF-2000微波快速反应器;Cary 50紫外-可见分光光度计;TDL-5台式离心机;R-201旋转蒸发器;DGG-9140B型电热恒温鼓风干燥箱等。

1.2 红枣中齐墩果酸的提取流程

红枣undefined

1.3 样品中齐墩果酸含量的测定

1.3.1 齐墩果酸标准溶液的配制和标准曲线的绘制

精密称取齐墩果酸标准品10 mg, 以无水乙醇为溶剂, 定容于50 mL容量瓶中, 即得0.2 mgmL-1的齐墩果酸标准溶液。准确吸取齐墩果酸标准溶液0.5 mL置于具塞试管中, 加热挥去溶剂后, 加5%香草醛-冰醋酸0.2 mL, 高氯酸0.8 mL。然后在60 ℃水浴中加热15 min, 取出并用冰水冷却2 min。再加乙酸乙酯4 mL, 摇匀, 以未加对照品的试剂空白作参比, 于波长400～800 nm处进行紫外扫描, 得最大吸收波长为560 nm (见图1) 。准确吸取标准溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL, 按上述显色方法, 在560 nm下测定吸光度。绘制标准曲线 (见图2) , 齐墩果酸在8～28 μgmL-1范围内与吸光度线性关系良好。

1.3.2 红枣齐墩果酸含量的计算

精密称取一定量粗产品用乙酸乙酯溶解定容, 按照1.3.1的方法测定红枣中齐墩果酸的含量。并根据下式计算齐墩果酸的提取率:

齐墩果酸提取率/mgundefined

1.4 试验设计

考察不同的提取溶剂、乙醇体积分数、液料比、提取温度、微波功率和微波作用时间6个因素, 进行单因素试验。在单因素试验基础上, 采用正交试验确定最佳工艺条件。

2 结果与分析

2.1 单因素试验

2.1.1 不同提取溶剂对齐墩果酸提取率的影响

固定液料比为20∶1 (mL∶g) 、提取温度为50 ℃、微波功率300 W、微波作用时间90 s, 分别用甲醇、无水乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇作溶剂提取齐墩果酸, 结果如表1所示。

由表1可知, 不同提取溶剂对齐墩果酸提取率的影响比较大, 甲醇的提取率最高, 无水乙醇次之, 丙酮、氯仿和正丁醇的提取率较小。乙醇与甲醇相比而言, 乙醇毒性更小, 更安全, 价格便宜, 且易回收利用, 故本试验选择乙醇作为提取溶剂。

2.1.2 乙醇体积分数对齐墩果酸提取率的影响

固定液料比20∶1, 微波功率300 W、提取温度60 ℃、微波作用时间90 s, 改变乙醇体积分数, 结果见表2。

从表2可看出, 齐墩果酸的提取率随乙醇体积分数的增大而提高。可能是因为随着乙醇浓度的提高, 溶于乙醇的齐墩果酸溶出量增加, 提取率随之提高。但体积分数增至80%后, 提取率提高速度很缓慢。从产品收率、降低能耗、节省成本等方面综合考虑, 试验选择体积分数为80%的乙醇溶液作为提取剂。

2.1.3 液料比对齐墩果酸提取率的影响

固定乙醇体积分数80%、微波功率300 W、提取温度60 ℃、微波作用时间90 s, 改变液料比, 结果见表3。

从表3可看出, 提取率随着液料比的增大而增大。增加溶剂用量, 渗透压增大, 齐墩果酸就越容易渗透出来, 提取速度加快, 一定时间内齐墩果酸提取率就会增加。当溶剂用量达到一定程度后, 因红枣中所含的齐墩果酸基本溶出, 所以继续增加溶剂用量, 齐墩果酸提取率不再增加, 从经济角度和溶剂回收的工作量考虑, 溶剂用量不宜太大。在本试验条件下, 适宜液料比为20∶1。

2.1.4 提取温度对齐墩果酸提取率的影响

固定乙醇体积分数80%、液料比20∶1、微波功率300 W, 微波作用时间90 s, 改变提取温度, 结果见表4。

从表4可看出, 提取率随着温度的升高而逐渐升高, 随着温度的升高, 物系中分子运动加剧, 将加快传质速率, 有利于齐墩果酸的提取。温度在70 ℃以后, 提取率反而有降低的趋势, 原因可能是温度升高齐墩果酸结构被氧化破坏, 同时温度升高能耗加大, 因此选择70 ℃作为提取温度即可。

2.1.5 微波功率对齐墩果酸提取率的影响

固定乙醇体积分数80%、液料比20∶1、提取温度70 ℃、微波作用时间90 s, 改变微波功率, 结果见表5。

从表5可看出, 齐墩果酸提取率随功率的增大逐渐升高, 当微波功率超过 200 W后提取率开始下降。原因可能是功率越高, 物系吸收微波能越多, 物系温升越快, 固液传质速度也越快;且温度越高, 对物料细胞破坏作用越大, 当微波功率超过一定范围时引起了齐墩果酸的降解。故选择最佳微波功率为200 W。

2.1.6 微波作用时间对齐墩果酸提取率的影响

固定乙醇体积分数80%、液料比20∶1、提取温度70 ℃、微波功率为200 W, 改变微波作用时间, 结果见表6。

在微波作用90 s后, 提取率开始有所下降, 可能是因为微波辐射时间过长, 导致提取体系温度过高, 从而使齐墩果酸结构被氧化破坏引起提取率下降, 所以微波作用时间以90 s为宜。

2.2 正交试验

2.2.1 正交试验安排

在单因素试验的基础上, 以齐墩果酸提取率为指标, 乙醇体积分数、液料比、提取温度、微波功率和微波作用时间五个因素, 选择L16 (45) 正交表安排试验, 因素水平表见表7所示。

2.2.2 正交试验结果及极差分析

按表7安排进行正交试验, 正交试验结果及极差分析如表8所示。

由表8正交试验结果的极差分析可知, 最优因素水平组合为A4B3C4D2E4, 即乙醇体积分数为90%、液料比为20∶1、提取温度80 ℃、微波功率为200 W、微波作用时间120 s。由表8极差分析可知, 各因素影响齐墩果酸提取率的程度大小顺序是D>A>E>C>B, 即微波功率>乙醇体积分数>微波作用时间>提取温度>液料比。影响因素较大的是微波功率和乙醇体积分数。

2.2.3 正交试验结果的方差分析

对表8试验结果进行方差分析, 结果如表9所示。

注:*表明显著, **表明非常显著

由表9正交试验结果的方差分析可知, 所选取的5个因素中微波功率对齐墩果酸提取率的影响非常显著, 乙醇体积分数影响显著, 液料比、提取温度和微波作用时间影响不显著。从工业化考虑, 采用微波法提取红枣中的齐墩果酸时, 应严格控制微波功率和乙醇体积分数。而提取剂用量可以适当减少, 提取温度可以适当降低, 微波作用时间可以适当缩短, 以保证产品收率较高的同时降低能耗、减少生产成本。

2.2.4 最佳条件的验证实验

在最佳条件下提取, 平行进行3次试验, 测定齐墩果酸的提取率, 平均值为2.4129 mgg-1, 与正交试验基本符合。

3 产品紫外分析

按1.3.1方法对红枣粗产品进行紫外分析, 结果如图3所示。

由图3可知, 齐墩果酸标准品的最大吸收波长λmax为560 nm。由图3可知, 红枣中提取的粗产品在波长560 nm处有良好吸收峰, 故可判断出红枣提取物中含有齐墩果酸成分。

4 结论

(1) 研究表明, 不同提取溶剂对红枣中齐墩果酸提取率的影响很大, 从产品收率、安全性、成本等方面综合考虑, 乙醇是红枣齐墩果酸的最佳提取溶剂。齐墩果酸的最大吸收波长λmax为560 nm。

(2) 通过单因素实验和正交试验优化了微波法提取红枣中齐墩果酸的工艺条件, 结果表明, 影响齐墩果酸提取率的5个因素从大到小依次是:微波功率>乙醇体积分数>微波作用时间>提取温度>液料比。最佳工艺组合条件为:乙醇体积分数为90%、液料比为20∶1、提取温度80 ℃、微波功率为200 W、微波作用时间120 s。在最佳工艺组合条件下, 齐墩果酸提取率为2.4129 mgg-1。

(3) 采用微波法提取红枣中齐墩果酸时, 乙醇体积分数对齐墩果酸提取率的影响非常显著, 微波作用时间影响显著, 液料比、提取温度和微波功率影响不显著。所以, 采用微波法提取红枣中的齐墩果酸时, 应严格控制乙醇体积分数和微波作用时间。而提取剂用量可以适当减少, 提取温度和微波功率可以适当降低, 以减少生产成本。

参考文献

[1]樊保国.枣果的功能因子与保健食品的研究进展[J].食品科学, 2005, 26 (9) :587-591.

[2]曹艳萍, 杨秀利, 薛成虎.红枣中齐墩果酸提取工艺的研究[J].食品科学, 2007, 28 (10) :165-167.

[3]李海鹏, 徐怀德, 孟祥敏, 等.光皮木瓜齐墩果酸超声波辅助提取及纯化工艺[J].农业工程学报, 2008, 24 (10) :222-226.

齐墩果酸 第5篇

1 仪器与试药

日本岛津全自动高效液相色谱仪, 型号:LC-20AT, 配备LC工作站;UV2600型紫外分光光度计。齐墩果酸对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号为110709-200505, 供含量测定用) ;青叶胆片 (云南白药集团丽江药业有限公司, 产品批号为20120901、20120906、20120907) ;甲醇为色谱纯, 其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Sapphire C1 8柱 (200 mm4.6 mm, 5µm) ;流动相:甲醇-0.2%冰醋酸溶液 (85∶15) ;检测波长:210 nm;柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;进样量:10μL。按外标法以峰面积计算含量。

2.2 溶液制备

对照品溶液的制备:取齐墩果酸对照品约10 mg, 精密称定, 置50 mL量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密吸取1 mL, 置25 mL量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得对照品溶液。

供试品溶液的制备:取重量差异项下的样品, 研细, 细粉末约3.5 g, 精密称定, 置锥形瓶中, 精密量取100 mL甲醇, 加入锥形瓶中, 称定重量。加热回流30 min, 放冷, 称定重量, 以甲醇补充失去的重量, 摇匀, 滤过, 取滤液作为供试品溶液。

阴性对照溶液的制备:按青叶胆片处方比例制成不含青叶胆的阴性对照品, 按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 阴性干扰试验

取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液, 按拟订的色谱条件测定。供试品溶液与对照品溶液色谱图中具有相同保留时间的色谱峰, 而阴性无干扰。

2.3.2 线性关系考察

精密称取齐墩果酸对照品11.50 mg, 置50 mL量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 精密吸取对照品溶液0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mL, 分别置25 mL量瓶中, 加流动相溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为系列对照品溶液, 分别吸取10µL, 按2.1项下色谱条件测定, 以进样量 (ng) 为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线。 (表1)

得回归方程y=5487x+39280, R2=0.9991。结果表明齐墩果酸进样量线性范围是46~230 ng。

2.3.3 精密度试验

取齐墩果酸对照品约10 mg, 精密称定, 置50 mL量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密吸取1 mL, 置25 mL量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得对照品溶液。精密吸取对照品溶液10µL, 连续进样6次, 依法测定。结果的R SD=0.44% (n=6) , 表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液, 在放置0, 2, 4, 6, 8 h时分别进样测定。 (表2)

结果含量的RSD=1.27% (n=5) , 表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.3.5 重现性试验

分别称取同批号20120901重量差异项下样品6份, 研细, 细粉末约3.5 g, 精密称定, 置锥形瓶中, 精密量取100 mL甲醇, 加入锥形瓶中, 称定重量。加热回流30 min, 放冷, 称定重量, 以甲醇补充失去的重量, 摇匀, 滤过, 取滤液作为供试品溶液。按供试品溶液制备方法制备溶液, 依法进样测定。结果含量的RSD=1.21% (n=6) , 表明方法重现性良好。

2.3.6 加样回收试验

在已知含量的样品粉末中, 加入一定量的齐墩果酸对照品, 按供试品溶液制备方法制备溶液, 依法测定并计算回收率。由结果可见, 回收率在95%~105%之间, RSD值为1.24%。测定方法回收率良好。

2.4 样品含量测定 (表3)

3 讨论

取齐墩果酸对照品适量, 用流动相溶液溶解, 在200~400 nm波长范围内扫描, 结果齐墩果酸在210 nm处有最大吸收, 故选210 nm作为检测波长。

在试验过程中, 曾采用乙腈-水 (20∶80) 、甲醇-0.3%磷酸酸溶液 (80∶20) 等多种流动相, 结果色谱峰分离效果均不理想而未被采用。文中选用的流动相甲醇-0.2%冰醋酸溶液 (85∶15) 分离效果较好, 且保留时间较短。实验中还考察了不同柱温 (10、25、35、40℃) 对色谱分离效果的影响, 结果各柱温对分离效果、保留时间的影响有明显区别, 柱温为30℃分离效果好。因此确定以柱温为30℃。

HPLC法简单可行、结果可靠, 可用于定量控制青叶胆片的质量。

摘要：目的:建立青叶胆片中齐墩果酸的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱 (HPLC) 法, Sapphire C18柱 (200 mm×4.6 mm, 5μm) ;流动相:甲醇-0.2%冰醋酸溶液 (85∶15) ;检测波长:210 nm;柱温:30℃。结果:齐墩果酸进样量线性范围为46～230 ng, y=5487x+39280, R2=0.9991, 平均加样回收率为100.00%, RSD为1.24% (n=6) 。结论:HPLC法简单可行、结果可靠, 可用于定量控制青叶胆片的质量。

关键词：青叶胆片,齐墩果酸,高效液相色谱法

参考文献

齐墩果酸 第6篇

1仪器和材料

对照品:中国药品生物制品检定所 批号:110709-200505;

样品 (90%) :自制;

卵磷脂 :Lipiod E80, 上海东尚科技有限公司;

胆固醇 :供注射用, 上海东尚科技有限公司;

乙腈 :色谱纯 天津市科密欧化学试剂有限公司;

FA2004N电子分析天平:上海精密仪器有限公司;

R204型旋转蒸发仪;上海申生科技有限公司;

HHS-2S型电子恒温水浴锅:上海光地仪器设备有限公司;

高效液相色谱仪:LC-10AT, 日本岛津;

UV265型紫外分光光度计:日本岛津;

其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1齐墩果酸脂质体中药物含量的测定

2.1.1分析方法的建立

(1) 对照品溶液的制备:精密称取齐墩果酸的对照品10mg, 用无水乙醇定容于10ml容量瓶中, 制成1mg/ml的对照品溶液, 备用; (2) 脂质体溶液的制备:按处方量称取卵磷脂、胆固醇和齐墩果酸, 加入至500m的梨形瓶中, 加入无水乙醇10ml, 超声溶解, 摇均, 30℃减压蒸发至干, 成膜, 真空干燥1.5h。加入pH为7.4的磷酸缓冲盐溶液5ml, 超声荡洗, 将膜洗脱, 然后, 超声40min, 0.45μm滤膜过滤, 得到脂质体溶液, 备用; (3) 空白脂质体的制备:采用上述方法制备空白脂质体溶液, 备用; (4) 光谱分析:将齐墩果酸的无水乙醇溶液放置于紫外分光光度计中进行波长扫描, 结果为在212nm处有最大吸收, 因此, 确定其检测波长为212nm; (5) 色谱条件:色谱柱:KromasailC18柱 (250mm×4.6mm, 5μm, 100A) ;流动相:乙腈-水 (85∶15) ;流速:0.8ml/min;检测波长:212nm;柱温:室温;进样量:20μl。

2.1.2 标准曲线的制备

精密量取制备好的对照品溶液稀释成五个不同浓度, 再用流动相稀释, 得到80、40、20、10、5 μg/ml 5个浓度的溶液, 20 μl进样, 测定峰面积。以对照品峰面积 (Y) 对样品浓度 (X μg/ml) 进行线形回归, 回归方程为Y=9 694.6X+5 740.2 (r=0.999 9) 在5～80 μg/ml具有良好的线形关系。

2.1.3 精密度试验

取浓度为20 μg/ml的对照品溶液1 d之内连续测定5次, 结果见表1。

结论:仪器的精密度良好。

2.1.4 稳定性试验

取浓度为20 μg/ml的对照品溶液进行5 d连续测定, 结果见表2。

结论:含量测定方法的稳定性良好。

2.1.5 空白回收率试验

精密吸取3份1 ml空白脂质体溶液, 分别加入1 ml对照品溶液20、10、5 μg/ml, 20 μl进样, 测定峰面积, 结果见表3。

结论:表明本测定方法具有良好的回收率, 方法可靠性强。

2.2 包封率测定

2.2.1

包封率测定方法的方法学验证 因为此方法在以往的脂质体的包封率的测定方法中比较少用, 所以, 需要对其进行方法学验证。按照“2.1.1”的方法制备脂质体, 平均分成两份, 其中一份加入2 ml药物, 进行水浴超声, 然后过0.45 μ水系滤膜, 以下再根据“2.2”的包封率测定方法进行测定。结论:加入的2 ml药物并不能透过滤膜, 因此, 过膜法简单可靠。

2.2.2 包封率测定

本文采用过膜法测定包封率。精密吸取制备好的脂质体溶液以及过0.45 μ水系滤膜前的溶液, 无水乙醇破乳, 再过0.45 μ油系滤膜, 依照其含量测定方法, 20 μl进样, 测定包含在脂质体中的含药量的峰面积以及过0.45 μ水系滤膜前的溶液的峰面积。应用过膜法测定包封率的公式:包封率 (%) = 过膜后的药物峰面积/过膜前的药物峰面积×100%。测得3个批号脂质体的包封率分别为93.1%、92.0%、93.4%。

3讨论

本文建立了齐墩果酸脂质体含量测定的HPLC方法, 药物与辅料之间得到良好分离, 在5～80 μg/ml范围内线形关系良好, 回收率高, 重现性好, 能准确快速地进行含量测定。

脂质体中药物包封率的测定方法有多种:透析法, 此方法容易造成药物丢失, 耗时长;离心发, 需要一定的设备条件;微型柱离心法和鱼精蛋白聚集法则需要特定的实验条件;葡聚糖凝胶柱层析分离法, 因为本实验所用的药物是脂溶性很强的药物, 所以不适宜用此法。本实验, 采用了并不常用的过膜法, 并通过方法学验证, 得出结论, 选用过膜法测定包封率分离脂质体和游离药物, 简单可靠。本文所建立的HPLC法测定脂质体的含量及包封率, 药物峰、辅料峰和溶剂峰得到很好的分离, 辅料对测定无干扰。根据《中国药典》2005年版二部附录规定, 脂质体的包封率应>80%, 本文中所测得的脂质体包封率均在>90%, 符合药典规定[2]。

摘要：目的建立齐墩果酸脂质体中药物含量测定及包封率测定的方法。方法采用Kromasail C18柱 (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:乙腈-水 (85∶15) ;流速:0.8ml/min;柱温:室温;检测波长:212nm。采用过膜法分离齐墩果酸脂质体中的游离药物。结果在本色谱条件下齐墩果酸与辅料及溶剂峰分离良好, 齐墩果酸在580μg/ml (r=0.9999, n=5) 具有良好的线性关系, 回收率101.5%102.6%, 日内RSD及日间RSD均<3% (n=5) 。结论该方法准确可靠、简单易行, 可以用于齐墩果酸脂质体含量及包封率的测定。

关键词：齐墩果酸脂质体,含量测定,包封率,HPLC

参考文献

[1]王梅, 高晓黎.新型脂质体载药及影响因素考察.药学学报, 2006, 41 (12) :1204-1207.

齐墩果酸 第7篇

1 仪器与试药

1.1 仪器

1290超高压液相色谱-紫外检测器, 色谱柱zorbax RX-SIL (250 mm×4.6 mm, 2.5μm;Agilent公司生产;CP225D型电子天平 (德国Sartorius公司生产) ;旋转蒸发仪 (BUCHI公司生产, 瑞士) ;KS-1500超声提取仪器 (宁波科盛仪器厂生产) ;超声波清洗器TCQ250 (北京医疗设备二厂生产) 。

1.2 试药

甲醇为色谱纯 (上海陆忠试剂厂) , 乙腈、冰醋酸为HPLC级;水为高纯水 (实验室自制) ;齐墩果酸对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号:20110305) 。马鞭草购于开封市药材市场, 经河南大学天然产物重点实验室鉴定为马鞭草科植物马鞭草verbena officinalis L。干燥阴干, 粉碎过40目。

2 方法

2.1 对照品溶液的配制

准确秤取齐墩果酸对照品1.2 mg, 放置于10 ml容量瓶中, 加甲醇5 ml, 超声波助溶, 甲醇补全至对应的刻度, 0.22μm滤膜滤过, 得标准品溶液, 于4℃下备存。

2.2 供试品溶液的配置

准确秤取粉碎的马鞭草约1.0 g, 置于250 ml三角瓶中, 加75%甲醇100 ml, 超声辅助提取2 h, 过滤, 提取3次, 提取液合并, 浓缩转移至25 ml的量瓶, 75%甲醇补充至相应的刻度, 得供试品溶液, 备用[10]。

3 结果

3.1 色谱条件

色谱柱:色谱柱zorbax RX-SIL (250 mm×4.6 mm, 2.5μm) ;流动相:乙腈溶液 (A) 和0.1%冰醋酸 (B) ;流速0.30 ml/min;检测波长210 nm。洗脱程序:0~5 min, A浓度维持15%;3~5 min, A浓度增至30%;5~10 min, A维持30%;10~15 min, A递增至50%;15~20 min, A维持40%;20~25 min, A下降到15%。柱温30℃;进样量5μl。齐墩果酸塔板数理论值>10 000。UPLC色谱图见图1。

注:A.对照品;B.样品;1-标准品

3.2 线性关系

准确吸取齐墩果酸标准品0.5、1、2、3、4、5 ml于10 ml量瓶中, 甲醇稀释并补充至相应的刻度, 得浓度分别为0.006、0.012、0.024、0.036、0.048、0.06 mg/ml对照品溶液, 5μl进样[11], 以峰面积积分值 (y) 为纵坐标, 对照品浓度 (x) 为横坐标进行线性回归, 得方程y=27834x+1873, 相关系数 (R) 为0.9998, 显示齐墩果酸在0.006~10.06 mg/ml浓度范围内线性关系良好。

3.3 精密度试验

精密吸取对照品溶液1 ml放置于10 ml的量瓶中, 甲醇稀释并补充至相应的刻度。5μl进样测定齐墩果酸的含量, 进样连续5次, 测定峰面积, 齐墩果酸的含量, 结果齐墩果酸峰面积RSD值为0.18%, 表明该仪器精密度良好。

3.4 稳定性试验

精密吸取供试品溶液5μl依次在0、5、10、15、24 h进样, 测定峰面积[12]。计算齐墩果酸的含量, 结果齐墩果酸的峰面积RSD值为0.8%, 表面在齐墩果酸24 h内测定, 含量稳定, 完全可以在24 h完成相关的测定。

3.5 重复性试验

准确吸取5份供试品溶液各5μl, 平行测定.测定峰面积, 计算齐墩果酸的含量, 结果齐墩果酸的峰面积RSD为0.79%, 表明该测定方法重复性良好。

3.6 加样回收率

精密秤定0.5 g已知含量 (0.429 mg/g) 的马鞭草6份, 分别准确加入齐墩果酸对照品0.12、0.17、0.25 mg, 参照供试品溶液的制备工艺路线进行提取, 5μl进样测定测定峰面积, 计算齐墩果酸的含量, 每个样品平行测定3次, 计算回收率。结果齐墩果酸平均加样回收率为99.7%, RSD为1.25%。

3.7 样品含量测定

取样品3份, 精密秤定, 参照供试品溶液的制备工艺路线进行提取, 5μl进样测定测定峰面积, 计算齐墩果酸的含量, 结果3批样品齐墩果酸的含量分别为0.429、0.433、0.427 mg/g, 平均含量0.430 mg/g。

4 讨论

本文建立了超高压液相色谱法测定马鞭草药材中齐墩果酸含量的方法, 采用乙腈、甲醇等极性较大的有机溶剂作为流动相, 能够在较短时间内洗脱, 其他成分得到很好的基线分离。试验建立的UPLC方法特异性强、前处理简单、重复性好, 与传统的HPLC分离方法比较, 分析时间短, 操作简便, 灵敏度高, 精密度及稳定性良好, 更加便于对马鞭草药材的质量控制。

摘要：目的:建立超高压液相色谱法测定马鞭草中齐墩果酸的含量。方法:采用超高压液相色谱法 (UPLC) 测定马鞭草中齐墩果酸的含量, 色谱柱zorbax RX-SIL (250 mm×4.6 mm, 2.5μm) ;流动相:乙腈溶液和0.1%冰醋酸;柱温30℃;检测波长210 nm。结果:齐墩果酸在0.006~10.06 mg/ml范围内线性关系良好, 平均回收率为99.7%, RSD为1.25%。结论:本法灵敏度高, 重复性好, 可为马鞭草质量控制提供参考。

齐墩果酸 第8篇

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-10AT高效液相色谱仪, SPD-10AVP紫外可见检测器, 岛津Cs-930型双波长薄层扫描仪 (日本岛津公司) ;N2000双通道色谱工作站 (浙江大学智能信息工程研究所) ;定量毛细管 (美国Drunmand公司) ;电子分析天平 (梅特勒-托利多公司) ;HH系列恒温水浴锅 (江苏金坛中大仪器厂) 。

1.2 对照品与试药

齐墩果酸对照品 (中国食品药品检定研究所, 批号:111733-201205, 供含量测定用) ;喉咽清口服液由企业提供 (批号分别为20120922、20121005、20121015、20121113、20130117、20130401、20130412、20130620、20130660、20130901) 。

1.3 试剂

硅胶G (青岛海洋化工厂) ;甲醇、乙腈为色谱纯;浓盐酸、硫酸为分析纯;乙醇为分析纯;水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

精密量取喉咽清口服液25 m L至50 m L量瓶中, 加无水乙醇至刻度, 摇匀, 冰箱放置3 h后取出, 放至室温, 加乙醇至刻度, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液25 m L、盐酸3 m L, 置锥形瓶中加热回流1 h, 冷却, 转移至分液漏斗中, 用石油醚 (60~90℃) 振摇提取6次, 每次20 m L, 合并石油醚液, 置水浴上蒸干, 残渣加甲醇溶解, 定量转移至10 m L量瓶中, 冷却, 加甲醇至刻度, 摇匀, 滤膜过滤, 取续滤液即得[7]。

2.2 对照品溶液的制备

取齐墩果酸对照品9.86 mg, 精密称定, 置于10 m L的量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得齐墩果酸对照品储备液, 浓度为0.986 mg/m L。精密吸取上述对照品储备液适量, 用甲醇稀释成浓度为0.493 mg/m L的对照品溶液, 即得。

2.3 阴性干扰试验

取除土牛膝外的其他药材, 按工艺方法制备, 并按供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。

2.4 色谱条件与系统适应性[8,9]

色谱柱:Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5μm) ;流动相:乙腈-水 (90∶10) ;紫外检测波长:210 nm[10];流速:1.0 m L/min;柱温:30℃;进样量:10μL。按齐墩果酸峰计算, 理论板数应不低于2000。

此条件下待测组分与其他组分达到有效分离;阴性无干扰。对照品、喉咽清口服液供试品及阴性样品色谱图见图1。

2.5 线性关系的考察

精密吸取齐墩果酸对照品储备液 (0.986 mg/m L) 1、2、4、6、8、10μL, 按照前述色谱条件分别进样测定, 记录各进样量下的色谱峰面积, 以峰面积积分值Y对进样量X (μg) 进行线性回归, 得齐墩果酸的线性回归方程为:Y=2.42×103X+5.31×104, r=0.9997, 齐墩果酸在0.986~9.860μg线性范围内与峰面积呈良好线性关系。

A.对照品;B:供试品;C:阴性样品

2.6 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液 (批号:20130620) , 按照前述色谱条件, 连续进样6次测定, 记录各次峰面积。结果得齐墩果酸峰面积的RSD为0.96%, 表明本方法精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一批号样品 (批号:20130620) , 按照“2.1”项下操作制备供试品溶液, 按照前述色谱条件, 分别于0、2、4、8、10 h精密吸取该供试品溶液10μL进样测定, 记录各次峰面积, 计算得齐墩果酸峰面积的RSD为0.44%, 表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.8 重复性试验

取同一批号样品 (批号:20130620) 6份, 按照“2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液, 精密吸取各份溶液10μL, 注入液相色谱仪, 按外标法计算齐墩果酸的含量。6份样品中齐墩果酸的平均含量为0.242 mg/m L, RSD为1.92%, 表明方法的重复性良好。

2.9 加样回收试验

精密量取已知含量的同一批号 (批号:20130620) 样品6份, 每份10 m L, 醇沉准备酸水解时, 再精密加入齐墩果酸对照品适量, 按照“2.2”项下操作分别平行制备6份供试品溶液。精密吸取各溶液10μL, 按照前述色谱条件分别进样测定, 记录色谱峰面积, 计算回收率, 结果见表1。

2.1 0 样品测定

取10样品进行含量测定, 按“2.1”项下操作, 进样, 计算齐墩果酸的含量, 结果见表2。

2.1 1 薄层扫描色谱法[11]

2.1 1. 1 色谱条件

展开剂为环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯 (20∶5∶8) ;显色剂为10%硫酸乙醇溶液;扫描波长λS=520 nm, λR=700 nm。

2.1 1. 2 供试品溶液的制备

精密量取本品25 m L, 用水饱和的正丁醇振摇提取6次, 每次20 m L, 合并正丁醇液, 蒸干, 残渣加乙醇30 m L、盐酸3 m L使溶解, 加热回流提取1 h, 提取液回收乙醇至无醇味, 加水30 m L, 用石油醚 (60~90℃) 振摇提取6次, 每次20 m L, 合并石油醚液, 置水浴上蒸干, 残渣加无水乙醇微热使溶解, 定量转移至5 m L量瓶中, 冷却, 加无水乙醇刻度, 摇匀, 作为供试品溶液。

2.1 1. 3 对照品溶液的制备

方法与“2.2”项下同。

2.1 1. 4 线性关系考察

精密吸取齐墩果酸对照品储备液 (0.986 mg/m L) 2、4、6、8、10μL点于同一硅胶G薄层板上, 展开, 晾干, 喷以10%硫酸乙醇溶液, 在105℃加热至斑点显色清晰, 晾干, 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板, 周围用胶布固定, 按照上述色谱条件进行扫描, 测定峰面积积分值。以齐墩果酸含量X (μg) 为横坐标, 以吸收度积分值Y为纵坐标, 计算回归方程Y=4572.1X-508.7, r=0.9991, 线性范围为:1.97~9.86μg。

2.1 1. 5 样品测定

分别吸取各供试品溶液3、6μL、对照品溶液2、4μL, 分别交叉点于同一硅胶G薄层板上, 展开、扫描, 测量供试品与对照品吸收度积分值, 测定, 计算, 即得。色谱图见图2。

2、4、6、8:供试品;1、3、5、7、9:对照品

3 讨论

3.1 样品处理方法的选择

原标准是采用正丁醇振摇提取口服液中的齐墩果烷类三萜皂苷成分, 操作繁琐, 而且冬天气温低, 样品溶液容易乳化难以分层, 为操作带来不便, 本研究改为醇沉除去杂质保留有效成分, 简化了操作。考察了试验过程中硫酸、盐酸酸水解时间[12], 结果盐酸水解1 h较完全。

3.2 流动相的筛选

本实验对甲醇-水、甲醇-0.1%醋酸、乙腈-水这三种流动相系统进行了比较筛选, 结果发现以甲醇-水系统无论怎样调节两者比例均未得良好峰形的峰, 而换用乙腈-水流动相即可得到满意的色谱峰形, 齐墩果酸与其他杂质峰的分离度也较高。

3.3 紫外测定波长的选择

采用二极管阵列检测器在190~380 nm范围内分别扫描齐墩果酸峰的紫外吸收, 齐墩果酸在204 nm波长处有最大吸收, 但由于甲醇的截止波长为205 nm, 选用此波长来检测时溶剂有吸收, 对测定造成干扰, 故选用210 nm作为测定波长, 以保证测定结果的准确性。

3.4 样品含量结果分析

齐墩果酸 第9篇

1 仪器与试药

1.1 仪器

万分之一电子天平 (sartorius BP 121s) , Aglient 1100高效液相色谱仪 (美国) 。

1.2 样品与试剂

三两半药酒 (浙江天一堂药业有限公司) , 阿魏酸对照品 (中国药品生物制品检定所, 110773-200611) , 齐墩果酸对照品 (中国药品生物制品检定所, 110709-200505) , 试剂除甲醇为色谱纯外, 其他均为分析纯, 水为重蒸馏水。

2 实验方法

2.1 高效液相色谱法检验齐墩果酸的含量[2,3]

2.1.1 色谱条件及系统适应性

色谱柱为十八烷基键合硅胶柱 (416 mm×250 mm) , 流动相:甲醇-水 (90 ∶ 10) , 流速:0.8 ml/min, 检测波长:215 nm, 灵敏度:0.05AUFS, 温度:室温。

2.1.2 对照品溶液的配制

精密称取105℃干燥至恒重的齐墩果酸对照品约4.0 mg, 用甲醇定容至10 ml, 摇匀后作为贮备液。

2.1.3 标准曲线的绘制

精密量取上述标准贮备液0.2、0.4、0.6、0.8 和1.0 ml分别置于10 ml量瓶中, 用甲醇定容后摇匀, 各进样20 μl, 以峰面积Y为纵坐标, 进样量X为横坐标绘制标准曲线, 回归方程为:Y=40 168.5X+1 129, r=0.999 8, 进样量在9.6～40.0 μg/ml范围内线性关系良好。

2.1.4 精密度试验

精密吸取40.0 μg/ml齐墩果酸对照品溶液20 μl, 重复进样6次, 测定峰面积, RSD=0.3%。

2.1.5 重现性试验

取同批号的样品6份, 按样品测定项下方法操作, 测定峰面积。RSD=2.1% (n=5) 。

2.1.6 加样回收试验

精密吸取已测得齐墩果酸含量的样品6份, 精密加入40.0 μg/ml的齐墩果酸对照品溶液1 ml , 按样品测定项下的步骤操作, 计算回收率, 结果见表1。

2.1.7 样品的测定

精密吸取样品50 ml5份, 分别置于烧瓶中, 加盐酸2 ml, 加热回流1 h使水解, 用石油醚 (60～90℃) 40 ml分三次提取, 合并石油醚提取液, 蒸干, 残渣用甲醇定容于10 ml量瓶中, 摇匀, 滤过, 进样20 μl, 用外标法计算含量, 含量分别为8.84μg/ml、9.01μg/ml、8.72μg/ml、8.97μg/ml、9.14 μg/ml。样品及阴性对照液色谱图见图1。

2.2 高效液相色谱法检验阿魏酸的含量[4,5]

2.2.1 色谱条件及系统适应性

色谱柱为十八烷基键合硅胶柱 (416 mm×250 mm) , 流动相为甲醇-0.05%冰醋酸 (2 ∶ 3) , 检测波长:322 nm, 柱温:40℃, 流速:110 ml/min, 理论塔板数大于3000。在以上色谱条件下, 阿魏酸能与其他组分达到基线分离, 获得良好的实验效果。

2.2.2 对照品溶液的配制

精密称取阿魏酸对照品5.0 mg, 置100 ml容量瓶中, 加甲醇-5%冰乙酸 (1:4) 溶液溶解, 并稀释至刻度, 摇匀即得。

2.2.3 标准曲线的绘制

精密吸取上述对照品储备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 ml置50 ml容量瓶中, 加甲醇-5%冰乙酸 (1∶4) 溶液稀释至刻度, 摇匀, 分别进样20 μl, 测定峰面积, 以峰面积积分值为纵坐标, 阿魏酸量为横坐标绘制标准曲线。计算回归方程:Y=23.09×1 066X +0.229×106, r=0.998。表明阿魏酸含量在0.125～0.75 μg 范围内, 具有良好的线性关系。

2.2.4 精密度试验

精密吸取上述对照品储备液于高效液相仪中反复进样6次, 求得阿魏酸对照品的RSD<2%。

2.2.5 重现性试验

取同批三两半药酒样品, 依法重复测定其含量, 测定结果样品中阿魏酸含量RSD=0.73% (n=5) 。

2.2.6 回收率试验

采用加样回收法, 精密称取已知阿魏酸含量的样品6份, 分别精密加入一定量的阿魏酸对照品, 依本含量测定方法测定6次, 结果表明, 本法平均回收率99.8%, RSD=0.2% (见表2) 。

2.2.7 样品的测定

取本品约30 ml, 精密量取, 置回流瓶中, 加入甲醇-5%冰乙酸 (1 ∶ 4) 溶液10 ml , 精密称重, 80℃水浴回流30 min, 放冷至室温, 再次精密称重, 并用甲醇-5%冰乙酸 (1:4) 溶液补足损失的量。离心10 min (2 500 r/min) , 取上清液, 用微孔滤膜[4] (孔径0.45 μm) 滤过, 滤液做为供试品溶液。进样20 μl, 用外标法计算含量, 结果分别为9.66、9.81、9.61、9.74、9.85 μg/ml, 样品及阴性对照液色谱图见图2。

3 讨论

3.1 齐墩果酸是一种水不溶性物质, 在氯仿中的溶解度最大。三两半药酒经水解后, 以氯仿、石油醚分别提取, 结果显示用氯仿的提取成分较多, 齐墩果酸峰不能完全分离。以石油醚提取为佳。

3.2 阿魏酸见光易分解, 易造成检测不准, 需用棕色瓶保存;且在溶剂的选择时先后采用甲酸-甲醇 (0.5 ∶ 9.5) 和甲醇-冰乙酸 (1 ∶ 4) , 发现采用后者阿魏酸比较稳定。

3.3 测定阿魏酸进行流动相的选择时, 曾以水-冰醋酸-正丁醇 (347 ∶ 1 ∶ 11) , 甲醇-四氢呋喃-水-醋酸 (20 ∶ 10 ∶ 70 ∶ 0.5) 等流动相体系进行试验, 发现采用甲醇-0.5%冰醋酸 (2 ∶ 3) 流动相体系, 分离情况较好, 达到满意的结果。

参考文献

[1]国家药品委员会编.中国药典.化学工业出版社, 2005:325.

[2]韩志慧, 刘国际, 雒廷亮.HPLC法测定齐墩果酸片中齐墩果酸的含量.郑州大学学报 (工学版) , 2005, 26 (4) :51.

[3]都述虎, 饶金华, 耿武松.薄层扫描法测定木瓜中齐墩果酸的含量.中草药, 2003, 34 (1) :35.

[4]郑末晶, 杨静, 吴桂芝, 等.高效液相色谱法测定当归寄生注射液中阿魏酸的含量.中成药, 1999, 21 (4) :178.