艾滋病实验室生物安全

艾滋病实验室生物安全（精选6篇）

艾滋病实验室生物安全 第1篇

艾滋病初筛实验室安全防护制度

1.建立安全制度

1.1 根据“微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）”，制订本实验室的安全标准操作程序（S-SOP），该程序应适用于现有的实验条件，并与实验室其他规定相一致。

2.人员管理和培训

2.1 实验室主任应了解所有工作人员。在安排工作区域时，要根据人员的工作种类和所涉及的生物材料，对实验室环境做安全检查。

2.2 新调入人员、外来合作、进修和学习的人员在进入实验室之前必须经过实验室主任的批准。非实验室人员和非实验室物品不得进入实验室。

2.3 严格执行实验室工作人员采血检测HIV抗体和备案制度，工作人员血清应长期保留。

2.4 所有工作人员必须经过HIV检测技术和实验室安全培训，包括上岗培训和复训，并接受实验室管理人员的监督。实验室的安全责任人要对工作和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。

2.5 必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行安全教育，直至有能力后方可单独工作。

3.安全保障措施 3.1 皮肤受损、患病都会增加感染的危险。皮肤的伤口和擦伤都应以防水敷料覆盖。

3.2 进实验室前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。

3.3 进入实验室应穿隔离衣，戴手套。如果接触物传染危险性大，则应戴双层手套和防护眼镜。

3.4 离开实验室前必须脱去隔离衣并洗手。

3.5 严禁在艾滋病检测实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。4.带入和带出实验室的物品

4.1 对所有带入实验室的物品都应进行检查。含有测试样品的包裹应在安全柜或其他适当的装置内打开。

4.2 将HIV测试样品转送其他实验室时，应防止对人员和环境的污染。护送样品的人应明确接收地点和接收人，实验室负责人或其指定的人员应及时确认样品已送达指定的实验室，被转入安全位置并得到妥善处理。

4.3 污染或可能造成污染的材料在带出实验室前应进行消毒。4.4 用于国际空运的样品要按照国际空运协会（IATA）的规则进行包装和标记，并提交相应的资料。

5.减少利器的使用

5.1 尽量避免在实验室使用针头、刀片等利器，最好不使用玻璃器皿。如果必须使用，在处理或清洗时应采取措施防止刺伤或划伤，并应对用过的物品进行消毒处理。5.2尽量使用安全针具采血，如蝶形真空针，自毁性针具等，以降低直接接触血液和刺伤的危险性。应将用过的针头直接放入坚固的容器内，消毒后废弃。

6.实验室意外和事故处理

发生意外事故时，应立即进行紧急处理，并报告实验室负责人。

6.1 皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤处的血液，用70%乙醇或其他消毒剂消毒伤口。

6.2 皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70%乙醇或其他皮肤消毒剂。

6.3 粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位。6.4 衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。6.5 污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序。

7.意外事故登记：

重大意外和事故必须进行登记，内容包括： 7.1 意外和/或事故发生的时间、地点及详细经过。

7.2 处理方法和经过，包括专家或领导赴现场指导和处理的情况。

7.3 随访检测的日期、项目和结果。8.报告和检测

8.1 发生重大事故时，在紧急处理的同时要立即向主管领导和专家报告。同时抽血检测HIV抗体，暴露一年内要定期检测。

8.2 发生小型事故时可在紧急处理后立即将事故情况和处理方法报告主管领导和专家。

艾滋病实验室生物安全 第2篇

10月26日，2012年度全市艾滋病检测技术与生物安全管理培训班在市疾控中心举办。培训班邀请国家疾控中心艾滋病参比实验室邢文革教授就“艾滋病检测技术进展及质量控制”进行了授课；市疾控中心韩秀云、潘晶讲授了艾滋病筛查实验室职业暴露与生物安全防护等知识。学习内容有以下几点：

1． 酶联免疫反应（ELISA）技术

ELISA基本原理：是以酶标记的抗体或抗原为主要试剂的方法，是标记免疫技术的一种。免疫技术是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即应用制备好的特异性抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。

特点是具有高度的特异性和敏感性。将抗原或抗体用可以微量检测的标记物(例如放射性核素、荧光素、酶等)进行标记，则在与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作用，进一步提高了免疫技术的敏感性。

标记免疫技术一般分为两类。一类用于组织切片或其他标本中抗原或抗体的定位属于免疫组化技术。另一类用于液体标本中抗原或抗体的测定。称为免疫检测。

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：① 固相的抗原或抗体，② 酶标记的抗原或抗体，③ 酶作用的底物，根据试剂的来源和标本的性状以及检测的条件，可设计出

各种不同的检测方法。

双抗体夹心法：最常用的方法，操作步骤如下：

(1)将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质（在商品化的试剂盒中，已经完成此步骤）。

(2)加受检标本，使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与同相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。

(3)加酶标抗体，使固相抗原复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

(4)加底物：酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

双抗原夹心法：

根据双抗体夹心法的原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可双抗原夹心法测定标本中的抗体。（HIV试剂多属于此种类型）

ELISA试剂盒的组成：ELISA的成品试剂盒中包含以下各组分：(1)已包被抗原或抗体的固相载体(96孔板);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物)(3)酶的底物（缓冲液和底物液或称A/B液）(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)(5)有些试剂盒中还有标本的稀释液

(6)洗涤液（基本为通用的浓缩磷酸盐溶液）(7)酶反应终止液（一般为弱硫酸液）

ELISA试剂盒的选择：必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检验合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。

ELISA方法模式图

ELISA检测需注意的问题：操作环境、环境温度、仪器的校准、洗板机的维护、比色波长的设定、Cutoff值计算。ELISA试验的假阳性反应：

a.溶血样本：溶血标本可能会增加非特异性显色。

b.CMV、EBV、红斑狼疮、风湿病患者：自身抗体与HIV-1的某些抗原决定簇有交叉反应性，在初筛检测时可能导致假阳性现象。c.新生儿:20%～60%的婴儿受到HIV感染,因为母体HIV抗体可持续大约15个月之久, d.技术误差

e.细菌污染：菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。

f.抗凝：抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性.g.辣根过氧化物酶：国产 ELISA试剂一般都用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)制备结合物。HRP是一种糖蛋白，含糖量约为18%，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增 加非特异性显色。

2．HIV的筛查及确证检测 艾滋病筛查实验室的职能：

a.对收到的血液样品进行艾滋病筛查检测，并及时妥善进行原始资料的登记及管理工作。

b.对HIV抗体不确定标本进行追踪。

c.及时通过网络进行“月报告”；济南市要求5日之前上报。e.接受上一级艾滋病实验室的业务考核和现场督导。

d.接受患者关于HIV知识的咨询解释工作。（对HIV检测所涉及内容要贯彻保密原则）HIV筛查实验室检测要求：

a.方法是使用ELISA(第三代/第四代)、化学发光等技术规范准许的检测方法;b.不能只用快速检测作为初筛实验。

c.无论何种实验，必须留有原始检测记录，包括快速检测也必须留存检测记录。

d.对于初筛阳性的样品，需要再进行2次筛查检测，其中至少一次检

测要使用不同厂家或不同方法进行。艾滋病筛查实验室阳性标本的处理: a.对于再次检测后，其中任一种方法呈现阳性反应的标本，应在24小时内上送“艾滋病确证实验室”。

b.将阳性标本装入带螺帽的冻存管中，放入4℃冰箱中暂时储存。

c.填写HIV疑似阳性标本“复检检测单”。

d.检测单中必须填写的项目：基本信息，重点是身份证号的填写；检测数据的S/CO值。

艾滋病筛查阳性标本送样须知:

a.必须使用生物制品转运箱；三层包装上送。

b.必须专人专车运送；不能使用公共交通工具转运阳性反应样品。c.必须填写“复检检测单”及“阳性标本转运登记” d.2013年起将对送样不合格单位进行记录，年底评比计分。艾滋病筛查阳性标本送样须知: 采用ＷＨＯ提出的三级包装系统。

第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。

第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可装多个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。

第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。外面要贴标

签（数量，收、发件人）。

第一层容器第二层容器第三层容器

艾滋病筛查实验室的报告格式： a.阴性：HIV抗体阴性“—” b.阳性：HIV-1抗体阳性“+” c.不确定：HIV抗体不确定“±”

d.在收到确证检测报告之前，可先出具“HIV抗体待复查”报告。e.艾滋病确证实验室出具的报告，筛查实验室需留存复印件。HIV确证检测：

WB是首选的用于HIV抗体的确认实验，WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。

WB的敏感性一般不低于初筛实验，但它的特异性很高，这主要是基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化，能够检测针对不同抗原成分的抗体。

WB技术主要包括3个部分：

（1）通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳将HIV抗原按照分子量大小而分离。（2）将分离的抗原转移到硝酸纤维素膜上。

（3）加样检测标本中是否含有针对不同抗原组分的抗体。前2步操作由试剂生产厂家完成，检测人员只需进行第3步 3.HIV筛查实验室注意事项

操作程序文件（SOP）、实验室生物安全手册、实验室的档案管理、筛查实验室样品的保存、HIV抗体不确定追踪处理 4.质控品的配制及质控图的绘制 质控品梯度稀释方法：

60/110μl阳性血清60/110μl混合液60/110μl阴性血清60/110μl阴性血清60/110μl阴性血清60/110μl阴性血清60/110μl阴性血清60/110μl阴性血清 将梯度稀释后的样品同普通样品一样进行OD值测定

质控方法的种类：前20次试验得到的质控品值，使用“即刻法”进行质控。

从第21次开始过渡为Levey-Jennings法进行质控。

5.生物安全防护：是指避免生物危险因子，特别是偶然的和有意利用的生物因子，对生物体包括实验室工作者在内的伤害和对环境的污染的意

识和措施。

实验室生物安全防护分为一级防护（屏障）和二级防护（屏障）。

HIV实验室生物安全级别：

艾滋病血清学检测：包括艾滋病筛查和确证实验室、免疫学和核酸检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的实验室中进行。HIV分离、研究：HIV分离、细胞培养及研究工作应在Ⅲ级生物安全实验室（BSL-3）中进行。

生物安全柜分级：I级生物安全柜---保护工作人员和环境

II级生物安全柜---保护工作人员、环境和试样（产品）III级生物安全柜---采用手套箱更严格地保护工作人员、环境和试样（产品）

生物安全管理体系文件：

《生物安全管理手册》《程序文件》《风险评估》《安全手册》《作业指导书》《安全数据单》《安全、技术记录》

个人防护装备：

防护部位 ：眼睛、头面部、呼吸道、躯体、手、足、耳（听力）。装备包括：眼镜（安全镜、护目镜）、口罩、面罩、防毒面具、帽子、防护衣(实验服、隔离衣、连体衣、围裙)、手套、鞋套等。

安全脱卸个人防护装备考虑要点：卸去个人防护装备的地方可在实验室门口或实验室前

厅（BSL-1实验室）或离开主实验室在半污染区或缓冲间内卸下个人防护装备（BSL-2和BSL-3实验室）；另外在主实验室外并等门已经关好后卸下防毒面具（BSL-2和BSL-3实验室）。

卸下个人防护装备的顺序按下面顺序进行：

1）手套； 2）面罩或护目镜； 3）隔离衣；

4）口罩或防毒面具和防护帽； 5）鞋套（可再戴新手套）。

生物安全防护操作要点：严格而又不断更新的培训制度。

全员培训上岗，建立培训与复训制度。所有工作人员，包括临时进修人员，都必须经过培训（包括上岗培训和复训），并要接受实验室管理人员的监督，实验室的上级专家要对工作安全及整个安全工作环境负责，所有工作人员均有责任保证自己和他人的工作安全，同时加强新技术新知识培训。

艾滋病职业暴露的处理：

a.艾滋病职业暴露的概念：艾滋病职业暴露—HIV感染者及病人的血液或体液，（阴道分泌物、羊水）及含有HIV的实验室样本，污染了医务人员破损的皮肤、黏膜或被针刺伤或利器割伤。

b.感染的条件：足量的病毒病毒能够存活有病毒排出有侵入的伤口。c.暴露的途径：

皮肤损伤：针刺损伤、皮肤的切割伤。

粘膜暴露： 粘膜部位如眼、鼻、口腔等接触HIV或含有HIV的血液、羊水等。

d.职业暴露的传染源：HIV感染者或艾滋病人的血液、羊水、含血体液、阴道分泌物。含HIV的实验室样本、生物制品、器官等。e.职业暴露常见人群：

一类危险人群：护理人员、医生（妇产科）、助产士。

二类危险人群：血库或化验室的工作人员、尸检人员。

其余危险人群：清洁被血液和污染的环境者

对被血液和污染的器具祛污、消毒、维护者

处理污染的被服和废弃物者

处理盛有污染利器的容器者

处理和运输生物学标本时

对有潜在污染可能的水管进行维护者

即：凡提供医疗服务的大多部门均有可能发生职业暴露。f.造成职业暴露可能因素： 1.没有安全防护的规章制度

2.没有按照常规进行操作 3.对职业暴露缺乏自我保健意识 4.缺乏职业暴露的专业知识 5.不可避免地处于高度暴露的环境 g.不会发生职业暴露的情况：

1.在不直接接触血液和感染性体液的情况下给HIV感染者或艾滋病人做常规体检；

2.接触到HIV感染者或艾滋病人的尿液或汗液； 3.与HIV感染者或艾滋病人谈话、握手。h.HIV职业暴露的处理原则：

1.现场处理2.报告及保密3.风险评估 4.监测及随访 5.预防用药 现场处理：急救

1）如有伤口，应轻轻挤压，使其尽量挤出血液，用肥皂水或清水冲洗。2）受伤部位的消毒：伤口应用消毒液（如75%酒精，0.2%次氯酸钠，0.2-0.5%过氧乙酸，0.5%碘伏等）浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口。3）暴露的粘膜，应用清水或生理盐水冲洗干净。

紧急处理可以减少80%的感染

艾滋病实验室生物安全 第3篇

1 国内外生物安全实验室管理的相关法律规范

世界卫生组织(WHO)《实验室生物安全手册》1983年出版，1993年和2003年分别进行了修订。2004年在WHO官方网站上发布了《实验室生物安全手册》第三版，该手册指导和规范了全世界从事致病微生物研究的科研人员的实验室生物安全操作，是目前最全面、最科学的实验室生物安全手册之一。1983年美国疾病预防与控制中心(CDC)和国立卫生研究院(NIH)联合出版了《微生物和生物医学实验室的生物安全指南》，1993年和1999年分别出版了第三版和第四版。2002年美国NIH针对重组DNA分子和含有重组DNA分子的生物体的特殊操作，又制定了《涉及重组DNA研究的生物安全指南(NIH指南)》;1977年2月，加拿大医学研究委员会(MRC)提出了动物病毒和细胞培养的实验室安全和潜在安全问题，出版《实验室生物安全指南》;其他组织和国家，如欧盟(《关于保护工作人员免受工作中生物因子暴露造成的危害的理事会指令2000/54/EC》)、英国(《生物因子危害程度及防护分类》)、瑞士(《基于对人和环境危险性的生物因子分类》)等都有规定(指南/手册)对本国的实验室生物安全操作和管理进行规范。

国内相应的生物安全规定出台较晚，2004年9月1日实施的中华人民共和国国家标准GB50346-2004《生物安全实验室建筑技术规范》，标准中对生物安全实验室的建筑装修、实验室的基本技术指标、设施的建设与配置、验收的原则和方法都做了明确规定。随后，中华人民共和国国家标准GB19489-2004《实验室生物安全通用要求》在同年10月1日开始实施。该标准包括生物安全等级、动物实验室设施设备的配置、个人防护和实验室安全行为等内容。它立足于解决实验室安全管理存在的隐患，防止类似生物安全事故的发生。该标准在2008年进行了重新修订。2004年11月12日温家宝签署国务院第424号令，公布《病原微生物实验室生物安全管理条例》，本标准明确了对病原微生物实行分类管理，对实验室实行分级管理。将病原微生物分为四类，实验室分为四级，规定了实验室的设立、管理责任、制度、人员培训、操作、安全标志和审查论证等要求。

农业部先后制定了《兽医实验室生物安全管理技术规范》、《高致病性病原微生物实验室生物安全管理审批办法》《动物病原微生物分类名录》、《高致病性动物病原微生物菌(毒)种或者样本运输包装规范》等管理规范，国家环保总局颁布了《病原微生物实验室生物安全环境管理办法》。此外，卫生部、国家质量技术监督局也制定了《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》(WS 233)。卫生部《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或者样本运输管理规定》于2005年12月28日实施。

上述国际、国内对生物安全实验室的所有法规和标准规定中的主要原则是：实验室应满足生物安全的通用要求，达到物理隔离的技术原则。

2 动物生物安全实验室的生物安全控制

防扩散是生物安全的基本准则。包括三个要素，实验室操作和技术、安全设备(初级屏障)以及实验室设施(二级屏障)。动物安全实验室的生物安全水平标准与一般进行传染病性病原微生物学实验室基本相似。根据对实验动物研究的环境条件、安全和饲养方面的要求，动物实验生物安全水平同样分成四个等级。动物生物安全一级水平(ABSL-1)：适用于对其特征比较清楚，通常对健康成人不致病，并且对实验室人员及环境的潜在危害性小的病原体;动物生物安全二级水平(ABSL-2)：涉及感染与人类疾病相关的病原体的实验动物操作;动物生物安全三级水平(ABSL-3)：涉及国内或国外感染外源性病原体的动物研究，这些病原体可通过气溶胶传播，并且可引起严重的或致死性的疾病;动物生物安全四级水平(ABSL-4)：适用于对危险的或外源性病原体进行的操作，这些病原体对个体有很高的致死性危险，并且可以通过空气途径进行传播。

我国于2004年11月12日颁布了<病原微生物实验室生物安全管理条例>，提出对微生物实行分类管理[2]。国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，将病原微生物分为四类，第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。第一类、第二类病原微生物在我国统称为高致病性病原微生物。

世界卫生组织在《实验室生物安全手册》(2004)中指出，在确定所从事工作的生物安全水平时，应根据危险度评估(Risk assessment)来进行专业判断，而不应单纯根据所使用的病原微生物所属的某一危险度等级来机械地确定所需的实验室生物安全水平[3]。

3 动物生物安全实验室生物安全管理对策

3.1 动物生物安全实验室设施、设备的管理

动物生物安全实验室在设计建造时要充分考虑到相对独立性，应在建筑物中自成隔离区。要便于管理和安全清洁，避免人流、物流的交叉污染，各区域要严格分开。要有单独的空调和送排风系统，其内部分为清洁区和污染区。排气口应安装高效空气过滤装置。还应配有备用电源。应安装通讯、安全报警系统及自动控制监控系统[4]。此设计通常采用物理学隔离，主要是指在气密性结构内采用负压通风，并形成定向流，以达到防止气溶胶扩散污染的目的。

在动物生物安全实验室中应安装符合安全和工作要求的100%外排风生物安全柜，其他的安全防护设备还包括低温高速离心机和可能产生气溶胶的设备所使用的安全通风橱。还应设置高压蒸汽灭菌器。

设施、设备的运行与维护应需有资质的专业人员进行管理。应制定管理规章制度，建立设备管理档案和设备标识;制定仪器维护和检查程序，定期检查仪器设备;严格按照程序文件执行。

3.2 动物生物安全实验室操作技术规范的管理

良好的操作规范是保证实验室工作安全开展的关键，因此，在编写实验室生物安全有关指南和制定实验室生物安全法规时，要根据微生物危害等级制定相应的标准操作程序(Standard Operating Procedure,SOP)，确保所有实验操作在风险最小的情况下开展工作。SOP文件应对实验室工作人员的日常工作行为、具体动物实验操作程序、实验室安全设备和仪器的操作规范、个人防护的操作规范、生物安全培训、消毒灭菌和废弃物的处理操作技术规范以及应急处置和风险评估等进行规定。SOP文件应在实际工作中不断进行补充、修改和完善。

3.3 动物生物安全实验室保障工作的管理

动物生物安全实验室的管理最重要的是对人员和物品的管理。实验室工作人员的管理是实验室生物安全保障工作的核心内容之一。建立完善的组织机构和健全管理制度;建立工作人员的档案;实验室工作人员上岗前必须经过培训和技术技能考核;建立健全健康检查制度;要完善内务管理制度。另外，实验室防护和消毒用品的配备和储存是实验室保障工作的关键。建立实验室仪器设备和实验记录档案。

3.4 动物生物安全实验室安保管理

主要包括生物安全危险评估;实验室安保计划;建立实验室准入制度;加强门禁系统的管理和安全检查;应急方案和事故报告等内容[5]。

3.5 动物生物安全实验室监督管理

实验室监督管理制度体系的建立是保证动物生物安全实验室安全、有效运行的重要保障条件之一。按照国家相关规定建立机构负责人→部门负责人→实验室负责人三级生物安全责任监管体系，做到责任到人。成立专门的实验室生物安全管理机构，设有专人负责实验室生物安全措施的落实、监督和日常管理。实验室的实验活动要接受来自上级有关部门的监督检查。在监督体制的基础上，建立事故报告制度。

4 小结

动物生物安全实验室是一把双刃剑,它的应用既能给人类造福，同时，也能给人类带来许多灾难。合理使用动物生物安全实验室，控制感染事件的发生是动物生物安全实验室管理的核心内容。要不断完善管理体制，提高实验室工作人员的生物安全意识，保证动物生物安全实验室安全运行。

参考文献

[1]曲连东,张永江.动物实验的生物安全与防护[M].北京.中国农业科学技术出版社,2007.

[2]国务院第424号令,《病原微生物实验室生物安全管理条例》.

[3]李湘东,孙理华.三级生物安全实验室管理体系的建立[J].公共卫生与预防医学,2007,18(5):126-128.

[4]GB19489-2008.《实验室生物安全通用要求》(S).

例谈高中生物实验室安全教育 第4篇

关键词：生物实验；安全隐患；安全教育

生物学是以实验为基础的一门自然科学，实验是生物科学研究的重要手段，学生在实验操作的过程中，不可避免地会接触一些化学药品和仪器设备，这些化学药品和仪器设备具有潜在的危险性。《普通高中生物课程标准》明确提出：“要注意实验安全教育”，“安全使用实验器具（如解剖器具、玻璃器皿、酒精灯等）和实验药品（酒精、酸、碱等）是生物学实验的基本技能，教师应强化安全教育，增强学生的自我保护意识。同时，要注意实验废弃物的妥善处理”。本文以实验《生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定》为例，简要谈一下怎样才能有效地对学生进行实验室安全教育。

一、不断提高自身素质

不断提高自身素质，是实验教师对学生进行实验室安全教育的基础。实验教师平时要注意不断学习和积累，让自己的知识储备越来越丰富，课堂上用起来才会得心应手。

另外，实验教师平时要不断锤炼自己的教学语言，使自己的教学语言趋于简练、准确、科学、规范。这样做既便于学生理解，提高了对学生进行安全教育的效率，又潜移默化地提高了学生使用规范生物学语言的能力。

二、实验课前认真备课

实验课前认真备课，是实验教师对学生进行有效安全教育的前提。实验教师可以从安全教育的内容和方法两方面认真备课，并且要细心排查水、火、电、化学危险品等是否存在安全隐患，制订好防火防爆、防触电、防中毒、防外伤等方面的安全预案，为实验课的安全进行提供知识基础和物质保障。

三、实验室安全教育的内容

实验课是实验教师对学生进行安全教育的主阵地。实验课上，实验教师可从以下三个方面着手开展实验室安全教育。

1.实验室安全态度教育

认真、严谨的实验态度，是实验室安全的基本保障。学生到达实验室的时候，可能有的学生很安静，有的学生在一起聊天，有的学生嬉笑打闹等等。这时，实验教师可以重申学生实验守则，要求学生遵守实验室的规章制度，采取认真、严谨的态度对待实验课，保证自己和他人的安全。实验教师也可以采用把学生的实验态度纳入过程性评价的方式来促进学生遵守课堂纪律和学生实验守则，从而创设一个安全的实验探究环境。

2.实验室安全知识教育

一个实验安全知识教育的内容，可以从以下四个方面来探讨：

（1）化学试剂的安全问题

在这个实验里，我们用到了七种化学试剂，其中有两种存在安全隐患，要提醒学生重视。一个是NaOH，NaOH是强碱，具有很强的腐蚀性，能腐蚀皮肤和衣物。使用的时候要戴好一次性手套，不要让自己的皮肤或衣物接触到NaOH。如若学生被NaOH灼伤，应用大量流动清水冲洗，再用低浓度的醋酸进行中和。另一个是苏丹III，苏丹III有致癌作用，使用的时候要戴好一次性手套，使用之后要用肥皂把手洗净。如若学生的手不慎被苏丹III染红，可用酒精洗涤。

（2）实验器材的安全问题

实验器材包括实验材料和实验用具。

在这个实验里，我们用到的实验材料是各种动植物匀浆和花生种子，其中有些味道还不错，可能有的学生很想品尝一番，这时实验教师要提醒学生思考：这些实验材料本身没有毒，但是，装它们的容器有没有毒呢？另外，细菌有没有的问题考虑过吗？要趁机告诫学生：为了以防万一，实验室的东西一概不能入口。

这个实验的实验用具比较多，需要提醒学生小心使用的主要有双面刀片（防止割伤）、盖玻片（防止压碎刺伤手指）、玻璃仪器（防止碎裂割伤或刺伤）、火柴和酒精灯（防止烧烫伤、火灾或爆炸）。

（3）实验操作的安全问题

在这个实验里，有潜在危险性的实验步骤有如下三个：

①水浴加热过程中，酒精灯使用不当可能会造成的烧烫伤、火灾、甚至爆炸

实验教师要提醒学生注意：点燃酒精灯要用火柴。不能用一盏酒精灯去引燃另一盏酒精灯，以防酒精外溢，如果溢出的酒精流到皮肤上，会造成比较大面积的烧烫伤，因为酒精燃烧的温度比较高（酒精灯外焰的温度可达600℃）。如若不慎引发酒精在酒精灯外燃烧，应立即用湿抹布从侧方盖灭火焰（从正上方盖下去可能会灼伤自己），然后立即开窗，让酒精蒸汽散发出去。熄灭酒精灯要用灯罩，熄灭后，要将灯罩拿开，待酒精灯冷却后，再盖好。一定要记得盖好酒精灯的盖子，以防酒精蒸汽不断挥发到空气中，空气中浓度过高的酒精蒸汽碰到火源会发生爆炸。酒精灯内的酒精少于三分之一的时候要停止使用，报告老师，请老师更换酒精灯。如若有风吹偏了火焰，不能用书本挡风，防止引发火灾。

水浴加热过程中，还要注意试管的取放。

实验教师要提醒学生用试管夹夹住试管上部，注意试管底部不要接触烧杯底部，以免试管内的溶液沸腾冲出试管，造成烫伤，如若被烫伤，一定要立刻用流动的水流冲洗被烫伤的部位，同时立刻报告老师，请老师来处理。

②用显微镜观察临时装片过程中，实验教师要提醒学生注意下降镜筒时，眼睛要注视物镜，不要让物镜压碎玻片，以防碎片割伤或刺伤手指。

③加热后的烧杯和试管如若立即冲洗的话，可能会导致烧杯或试管爆裂。实验教师要提醒学生一定要等它们冷却之后，再用水冲洗。

（4）废弃物处理的环境安全问题

在这个实验的废弃物中，污染环境的主要是各种实验废液。要引导学生不把实验废液倒进水槽，要倒进废液缸，由老师回收后处理无毒了再排放。

另外，需要重视的废弃物还有玻璃碎片，处理玻璃碎片时最好戴上手套。如果是桌子上或水槽里的碎玻璃片，最好用抹布轻轻地包起；如果是地上的碎玻璃片，最好用扫帚扫到垃圾铲里，再倒到教师指定的容器里，教师会把玻璃碎片集中包裹好丢弃。尤其注意，不能把玻璃碎片直接扔到垃圾桶里，以免割破拣废品者的手。

3.实验室安全操作教育

要求学生按实验内容的要求去做，使用规范的操作步骤。若要改变实验步骤和内容，一定要征得老师同意，以避免意外事故的发生。

在学生实验时，实验教师要认真指导，发现学生的不规范操作要及时提醒，及时消除安全隐患，帮助学生实现安全操作。

实验结束后指导学生整理好实验器材。先把试管内反应后的废液倒进废液缸，再清洗玻璃仪器，最后把所有器材摆放整齐。

四、实验室安全教育的方法

教育方法是多种多样的，但合适的才是最好的。对于这个实验来讲，时间紧、任务重，为了留出尽可能多的时间给学生进行实验，教师还是选择效率比较高的讲授法比较合适。然而，讲授法更适合听觉型的学生，对于视觉型的学生来说，讲授法是远远不够的，如果教师把实验步骤和注意事项画成脑图，在黑板上展示，或是用电教平台展示的话，这部分学生将很容易领会到教师讲授的内容。对于动觉和触觉型的学生，教师在学生进行实验操作的时候做的提示或提醒更容易令他们接受。总之，教师要考虑到各种学习类型的学生，采用听觉、视觉、动觉、触觉等多种信息通道，尽量适应他们的学习偏好，使自己的教育教学行而有效。

以上是笔者总结的一些对学生进行实验室安全教育的做法，希望能够得到各位读者的批评指正。为了最大限度地消除安全隐患，为了保证学生的人身安全和身体健康，实验教师要持之以恒地对学生进行有效的安全教育，让安全意识深深地扎根于每个学生的心底。

参考文献：

卢平卫.高中生物学实验教学中的安全问题及解决方案探讨，生物学教学，2011，36：（10）.

实验室安全考试生物安全类 第5篇

2、[判断题]根据所操作的生物因子的危害程度和应采取的防护措施，将生物安全的防护水平分为四级，1级防护水平最低，4级防护水平最高。以BSL-

1、BSL-

2、BSL-

3、BSL-4表示实验室的相应生物安全防护水平。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

3、[判断题]生物医学实验室内任何死亡动物尸体、组织碎块，要先高温高压灭菌后密封在塑料袋交专门机构进行处理。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

4、[判断题]初次进入实验室的操作人员应了解实验室具体的潜在危险，认真阅读、理解安全手册和操作手册。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

5、[判断题]当实验室活动涉及传染性或潜在传染性生物因子时，不需要进行危害程度评估。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

6、[判断题]工作人员在进入BSL-2以上级别实验室工作区前，应在专用的更衣室（或缓冲间）穿着背开式工作服或其他防护服。工作完毕必须脱下工作服，不得穿工作服离开实验室。可再次使用的工作服必须先消毒后清洗。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

7、[判断题]学生进入生化医药类实验室可以不穿统一的实验服（白大褂）。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

8、[判断题]生物实验室里可以烹煮食物、聚餐，学生可以在实验室留宿。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

9、[判断题]在微生物实验中，一些不要的菌种等，一定要消毒和高压灭菌处理后方可弃掉。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

10、[判断题]生物安全三级、四级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

11、[判断题]生物安全等级实验室必须按照国家规定要求建设，其中生物安全一级（BSL－1）、二级（BSL－2）实验室应向省级主管部门备案，生物安全三级（BSL－3）、四级（BSL－4）实验室必须取得国家认可的资质。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

12、[判断题]实验废弃的生物活性实验材料特别是细胞和微生物（细菌、真菌和病毒等）必须及时灭活和消毒处理。固体培养基等要采用高压灭菌处理，未经有效处理的固体废弃物不能作为日常垃圾处置。（分值1.0）

你未作答 标准答案： 正确

13、[判断题]实验动物生物安全性事件，主要表现二方面。一是正常动物在实验过程中，感染上人畜共患病；二是受感染动物由于逃逸或其产生的废弃物处理不当等，造成传染病扩散。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

14、[判断题]用于实验研究的小型啮齿类动物，一般都是无致病原感染的动物，不必在实验过程中注视其生物安全问题。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

15、[判断题]浸泡玻璃器皿的酸缸必须有防护罩，不得敞开放置。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

16、[判断题]放射性同位素实验室生成的所有废弃物、动物尸体必须经有效衰变并经同位素辐射监测合格后，才能按照一般废弃物、动物尸体进行处置。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

17、[判断题]操作人员在接触过传染性物质和动物之后必须洗手、不用消毒。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

18、[判断题]甲醛蒸气对人有强烈的刺激作用。熏蒸完毕后，立即打开门窗，并用等量的氨水放入室内，以减少对人的刺激作用。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

19、[判断题]在生物实验室中必须配备有效的消毒剂、眼部清洗剂或生理盐水，且易于取用。可配备应急药品。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

20、[判断题]可见光能复活生物体中的光复活酶，使形成的二聚体拆开复原。所以采用紫外光灭菌时，不能同时开启日光灯和紫外灯。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

21、[判断题]水蒸汽具有潜热，当水蒸汽与被灭菌的物品接触时，可凝结成水而放出潜热，使温度迅速升高，加强灭菌效果。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

22、[判断题]乙醇对活性细菌、真菌和脂类病毒起作用，但对孢子无作用。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

23、[判断题]学生在生物实验室里时，可以吃口香糖。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

24、[判断题]生物学实验室内的乙醚、二甲苯、丙酮、三硝基苯磺酸、松节油、苦味酸等是易燃易爆液体，在一定的条件下均能引起燃烧和爆炸，必须妥善安置，正确使用。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

25、[判断题]生物学实验室内的煤气、酒精、汽油等是易燃易爆燃料，在一定的条件下均能引起燃烧和爆炸，必须妥善安置，正确使用。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

26、[判断题]一次性用品，包括注射器及针头用过后经消毒可以重复使用。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

27、[判断题]生物安全主要指在进行生物学研究和教学过程中采取适当的防护设施、设备、防护原则及技术操作等以减少或消除有潜在危险性的因子暴露及意外释放，从而保证人类和环境的安全；也包括防止病原体或毒素及其相关信息被恐怖主义等不法分子窃取、滥用。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

28、[判断题]湿热灭菌和干热灭菌相比，干热灭菌穿透力强，传导快。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

29、[判断题]干热灭菌是利用热的作用来杀菌，通常在干热灭菌器中进行；使用温度通常为160-400℃，时间为1-5h。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

30、[判断题]湿热灭菌是利用热的作用来杀菌，通常在高压蒸汽灭菌器中进行。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

31、[判断题]灭菌是指用物理或化学方法杀死物体上的所有微生物及其孢子。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

32、[判断题]化学杀菌剂是指用于杀死微生物（包括它们的孢子）的化学品或化学品的混合物。（分值1.0）

你未作答 标准答案： 正确

33、[判断题]BSL-2实验室是指洁净的无菌室。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

34、[判断题]H2S无色，臭鸡蛋味，难溶于水，抑制酶的活性，使组织内窒息。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

35、[判断题]有关放射性核素的实验操作必须在指定的同位素实验室进行。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

36、[判断题]使用离心机时，当部分装载时，离心管可随意放在转头中而不用考虑平衡。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

37、[判断题]学生在《动物生理学实验》中，抓取蟾蜍时应注意使其头部向外侧，可以挤压耳后腺。如果耳后腺分泌物射入实验者眼内，则需用自来水冲洗眼睛。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

38、[判断题]发酵实验期间，要保持室内地面、桌面、操作台及其各种物品和器具的清洁卫生，同时也要保持发酵罐体外及其管路的卫生，做到无灰尘、无污垢。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

39、[判断题]当离心机用完停止时，不用等待操作面板上速度显示为零就可打开离心机盖子。（分值1.0）

你未作答 标准答案： 错误

40、[判断题]在微生物实验中，一些污染或盛有有害细菌和病毒的器皿，一定要消毒和高压灭菌处理后方可再利用。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

41、[判断题]在需用橡胶或塑料手套的生化类实验中，不用经常检查手套有无破损。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

42、[判断题]如果在微生物实验中出现意外事故（如菌种管打破等），应立即用消毒剂（84消毒剂）清洁桌面、洗手等，及时杀灭细菌和病毒，避免污染面扩大。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

43、[判断题]学生在动物实验中，抓取蟾蜍时应注意使其头部向外侧，不要挤压耳后腺，防止耳后腺分泌物射入实验者眼内。万一被射入，则需立即用生理盐水冲洗眼睛。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

44、[判断题]学生在实验中应严格按照要求和规范使用手术器械，注意手术器械使用安全，严禁用手术器械进行与实验无关的事情。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

45、[判断题]当生物安全柜内发生大量感染性材料溢洒时，液体会通过生物安全柜前面或后面的格栅流到下面去，生物安全柜内所有的物品都应该进行表面消毒并拿出生物安全柜，在确保生物安全柜的排水阀被关闭后，可将消毒液倒在工作台面上，使液体通过格栅流到排水盘上。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和/或高压灭菌处理。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

46、[判断题]进入同位素实验室之前和实验结束后应及时用同位素探测仪检查污染状况。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

47、[判断题]实验时间紧迫时，可以在开启的紫外灯下工作。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

48、[判断题]被微生物等生物材料污染的玻璃器皿应立即高压灭菌，然后清洗。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

49、[判断题]高压灭菌液体终止时，为尽快地取出灭菌液体，可快速排气使压力迅速降低。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

50、[判断题]在用匀浆器操作生物材料时，建议采用特氟隆材料的匀浆器。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

51、[判断题]离心过程中，若听到离心机有异常响声，待离心完成后再停机检查原因。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

52、[判断题]凡是《基因工程实验》操作所用的一切塑料器具（eppendorf管、tip等），在使用前都应装入盒子和瓶子中灭菌，可以直接用手装盒或装瓶。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

53、[判断题]生物实验需使用一次性手套，手套用完后捆好再弃于普通的垃圾箱内。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

54、[判断题]在《分子生物学实验》中所用的eppendorf管、tip为一次性用品，用完后可以弃于普通的垃圾箱内。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

55、[判断题]购买放射性核素必须向同位素实验室负责人申请，办理登记手续。购买、领取、使用、归还放射性同位素时应正确登记、认真检查，做到帐物相符。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

56、[判断题]同位素实验室管理人员有权拒绝未经培训或培训不合格的学生进入同位素室工作，但教师除外。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

57、[判断题]开展动物实验，实验动物如兔子等可以到农贸市场购买。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

58、[判断题]正常动物实验室强调进入室内的物品须进行严格消毒，而感染动物实验室强调进出的物品都必须经过严格的高温消毒。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

59、[判断题]不同等级的实验动物，必须饲养在相应级别的设施内。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

60、[判断题]干燥箱（烘箱）可以用于物品的干燥、干热灭菌，恒温箱用于微生物培养、生物材料培养。（分值1.0）

你未作答 标准答案： 正确

61、[判断题]为了防止污染，有些实验需要戴一次性手套。所以在进入实验室就要戴手套，并一直戴着做所有事情。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

62、[判断题]生物安全柜使用过程中，为了操作方便，应在柜内的前部操作。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

63、[判断题]操作者在双臂进出生物安全柜时，应动作缓慢，以维持操作面开口处气流的完整性。（分值1.0）

你未作答 标准答案： 正确

64、[判断题]发酵实验结束后活菌体不需要加热杀死后就能排放。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误 65、[判断题]实验中用到的溴化乙锭（EB）、秋水仙素等致癌物质，实验后可以直接向下水管道或垃圾箱倾倒。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

66、[判断题]在微生物实验中，一些不要的菌种等，不需要经消毒和高压灭菌处理后，可以直接弃掉。（分值1.0）

你未作答 标准答案： 错误

67、[判断题]实验室应时常监测生物安全柜以确保其性能符合相关要求。应保存检查记录和任何功能性测试结果，并在安全柜上标记检查证明。（分值1.0）你未作答 标准答案： 正确

68、[判断题]次氯酸钠一般不用作杀菌剂，常用于一般用途的消毒剂以及浸泡污染的非金属物质。（分值1.0）

你未作答 标准答案： 正确

69、[判断题]过氧化氢和过氧乙酸可以用于实验室工作台表面以及金属器械的消毒。（分值1.0）你未作答 标准答案： 错误

70、[判断题]气体熏蒸法可用于生物安全柜内空气的消毒，但不能用于生物安全柜内物品的消毒。（分值1.0）

你未作答 标准答案： 错误

71、[单选题]以下关于二级生物安全防护实验室的注意事项中，错误的是：（分值1.0）

 A.必须使用生物安全柜等专用安全设备

B.工作人员在试验时应穿工作服，戴防护眼镜 C.工作人员手上只有在皮肤破损或皮疹时，才应戴手套

D.必须具备喷淋装置、洗眼器等应急防护设施

你未作答 标准答案： C 72、[单选题]下列哪种处置实验服的方法是错误的？（分值1.0）

 A.离开实验室时，实验服必须脱下并留在实验室内

B．实验服可穿着外出

C.用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃

D.实验服不能携带回家

你未作答 标准答案： B 73、[单选题]目前,学校哪个部门是供应合格实验动物或提供合格动物实验场所的部门？（分值1.0）

 A.实验动物中心 B.物资供应中心 C.后勤部门 D.设备供应部门

你未作答 标准答案： A 74、[单选题]用于科学研究的实验动物，必须来源于具备什么证明的单位或部门？（分值1.0）

 A.实验动物生产许可证 B.实验动物使用许可证 C.实验动物环境设施合格证 D.动物实验使用许可证

你未作答 标准答案： A 75、[单选题]生物医学实验室内无污染的死亡动物尸体、组织碎块，应如何处理?（分值1.0）

 A.用塑料袋包装丢入生活垃圾桶中

B.自行深埋处理

C.密封在专用塑料袋内，冷冻保存，并交专门机构处理

D.自行焚烧处理

你未作答 标准答案： C 76、[单选题]狂犬病毒培养或动物感染实验应在哪一级生物安全实验室中进行？（分值1.0）

 A.BSL-1或ABSL-1 B.BSL-2或ABSL-2 C.BSL-3或ABSL-3 D.BSL-4或ABSL-4 你未作答 标准答案： C 77、[单选题]以下哪项不是实验室生物安全防护的目的？（分值1.0）

 A.保护试验者不受实验对象侵染

B.确保实验室其他工作人员不受实验对象侵染

C.确保周围环境不受其污染 D．保证得到理想的实验结果

你未作答 标准答案： D 78、[单选题]干热灭菌使用温度和时间通常为：（分值1.0）

 A.160-400℃，1-5h B.100-150℃，1-5h C.160-400℃，15-30min D.160-400℃，15-30min 你未作答 标准答案： A 79、[单选题]高致病性禽流感病毒、艾滋病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）按其危害程度，属于哪一类病原微生物？（分值1.0）

 A.第一类 B.第二类 C.第三类 D.第四类

你未作答 标准答案： B 80、[单选题]实验室生物安全性问题不仅涉及到动物间疾病的传播，最主要还关系到什么？（分值1.0）

 A.实验成败 B.实验室污染

C.人民身体健康 D.动物死亡

你未作答 标准答案： C 81、[单选题]对动物实验室的器材进行消毒灭菌效果最好的设备是什么？（分值1.0）

 A.热水器 B.紫外线灯 C.臭氧发生器 D.高压灭菌柜

你未作答 标准答案： D 82、[单选题]在分子生物学、遗传学、基因工程等实验中，哪种常见药品是致癌物质？实验中不能让药品接触到皮肤上。（分值1.0）

 A．单体丙烯酰胺 B．甲叉双丙稀酰胺 C．溴化乙锭（EB）

你未作答 标准答案： C 83、[单选题]在遗传学等实验中，哪种常见药品是致癌物质？实验中不可以让药品接触到皮肤上。（分值1.0）

 A．单体丙烯酰胺 B．秋水仙素 C．甲叉双丙稀酰胺

你未作答 标准答案： B 84、[单选题]在生物化学蛋白电泳实验中，接触的哪种药品为神经性毒物，接触皮肤会被吸收？（分值1.0）

 A．秋水仙素

B．溴化乙锭（EB）C．甲叉双丙稀酰胺

你未作答 标准答案： C 85、[单选题]正常屏障系统动物实验室内的气压，相对室外是什么压力？（分值1.0）

 A.正压 B.负压 C.等压 D.随意

你未作答 标准答案： A 86、[单选题]紫外线消毒方便实用，紫外灯可以是固定式，也可以是活动式的，但离被照射物不应超过多少距离？（分值1.0）

 A．1.2m B．2 m C.2.2 m D.3.2m 你未作答 标准答案： A 87、[单选题]病原生物材料在匀浆或搅拌后，容器应在以下哪个场所进行开启?（分值1.0）

 A.实验台上 B.生物安全柜内 C.无菌室内 D.超净工作台 你未作答 标准答案： B 88、[单选题]以下能用于消毒的气体熏蒸剂是：（分值1.0）

 A.甲醛 B.乙醚 C.氨水 D.乙醇

你未作答 标准答案： A 89、[单选题]采用熏蒸法灭菌，熏蒸过程至少密闭保持多少时间？（分值1.0）

 A.12h B.24h C.6h D.8h 你未作答 标准答案： A 90、[单选题]关于生物安全柜的操作，正确的说法是？（分值1.0）

 A.工作前和工作后，应至少让生物安全柜工作5min来完成“净化”过程，亦即应留出

将污染空气排出生物安全柜的时间

B.操作者在双臂进出生物安全柜时，应垂直缓慢地出入前面的开口，以维持操作面开口

处气流的完整性

C.在手和双臂伸入到生物安全柜中大约1min，即让生物安全柜调整完毕，且让里面的层

流空气净化后，才可以进行操作

D.以上都对

你未作答 标准答案： D 91、[单选题]过滤除菌操作时,将菌液注入滤器过滤，时间不宜过长，压力控制在多少为宜？（分值1.0）

 A.0～30mmHg B.100～200mmHg C.200～500mmHg D.500～600mmHg 你未作答 标准答案： B 92、[单选题]以下过滤除菌操作的正确顺序是： a.使用前，将滤器和过滤瓶等全部装置用纸包好经高压灭菌 b.用橡皮管以无菌操作将过滤瓶、安全瓶、压差计和抽气系统连接 c.将待过滤液体注入滤器过滤，时间不宜过长，压力控制在100-200mmHg为限 d.使用时，在无菌操作条件下将滤器安装到过滤瓶上（分值1.0）

 A.abcd B.adcb C.abdc D.adbc 你未作答 标准答案： D 93、[单选题]浸泡消毒时，经常采用杀菌谱广、腐蚀性弱的水溶性化学消毒剂，常用的有：（分值1.0）

 A．漂白粉（次氯酸钠）B.来苏儿（甲酚）C.福尔马林（甲醛）

D.戊二醛

你未作答 标准答案： A 94、[单选题]涉及病原微生物的实验材料在匀浆或搅拌后，容器应在什么设施内开启？（分值1.0）

 A.实验台上 B.生物安全柜内

C.无菌室内 D.超净工作台

你未作答 标准答案： B 95、[单选题]湿热灭菌是利用热的作用来杀菌，通常在什么设备中进行？（分值1.0）

 A.高压蒸汽灭菌器

B.烘箱 C.高温水浴锅 D.微波炉

你未作答 标准答案： A 96、[单选题]使用高压灭菌器时，以下哪个要求是不必要的？（分值1.0）

 A.灭菌器腔内装载要松散，以便蒸汽作用均匀

B.必须穿防护服和戴手套 C.灭菌器的排水过滤器应经常拆下清洗 D.待温度降至80℃以下时才能打开高压灭菌器

你未作答 标准答案： B 97、[单选题]关于使用高压灭菌器注意事项不正确是：（分值1.0）

 A．注意防护，防止烫伤，待温度降下后再开盖 B．禁止器皿盖着盖子进行高压灭菌，易产生爆裂

C．定期检查排水桶、排水管 D.一次高压灭菌物品尽可能装满

你未作答 标准答案： D 98、[单选题]关于使用生物实验材料注意事项说法错误的是：（分值1.0） A.微生物、动物组织、细胞培养液、体液等生物材料可能存在细菌和病毒感染的潜伏性

危险，处理时必须谨慎、小心

B.被微生物等污染的玻璃器皿在清洗或高压灭菌前，应先浸泡在适当的消毒液中

C.在缺乏高压灭菌设备时，可煮沸消毒被污染的物品 D.做完实验后，必须用肥皂、洗涤剂或消毒液充分洗净双手

你未作答 标准答案： C 99、[单选题]使用移液管时下列哪种操作是正确的？（分值1.0）

 A.可以用移液管反复吸入和抽出传染性物质 B.一根移液管未经清洗，可吸取多种溶液 C.可以将任何传染性物质的液体吹入空气 D.无洗耳球时，不可用口吹吸移液管

你未作答 标准答案： D 100、[单选题]被微生物等生物材料污染的金属器皿不可以采用以下哪种溶液进行消毒?（分值1.0）

 A．2%的戊二醛 B.75%酒精溶液 C.1%的漂白粉溶液 D.高浓度肥皂水

微生物实验室生物安全操作规程 第6篇

Dr.Tiger

(修订说明：CNAS-CL09实施后，对微生物实验室的生物安全提高了要求，对实验室人员在配制培养基过程的生物安全、高压锅的生物指示剂还有菌种的传代次数均提出明确的要求，为适应新要求，对旧版的微生物实验室生物安全操作过程作了补充，同时修改和完善了一些小问题)

一、目的

制订本规则，保证实验室工作人员的健康安全、实验设备安全卫生以及防止对外界环境造成污染。

二、适用范围

适用于所有进入微生物实验室人员。实验室工作人员必需严格遵守安全操作规程。

三、安全操作规程： 1.员工安全操作规程

1.1 实验室入口处须贴上生物危险标志，注明危险因子、生物安全级别、负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求及离开实验室的程序。

1.2 禁止非工作人员进入实验室。参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入，做好卫生防护，并在有关人员陪同下方可进入，同时注意做好环境维护及保密工作。

1.3 进行感染性实验时，禁止他人进入实验室，或必须经实验室负责人同意后方可进入。免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的工作人员必须经实验室负责人同意方可在实验室工作。

1.4 接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手。1.5 禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物。1.6 尽量以移液器吸取液体，禁止口吸。

1.7 实验过程中，严格按有关操作规程操作，降低溅出和气溶胶的产生。

1.8 每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时用75%乙醇或巴氏消毒液消毒。

1.9 实验人员在配制培养基过程中，需尽量避免接触性或吸入性危害，特别是配制TTB和碘液等对人体有害的培养基或试剂时，要穿戴工作服、口罩和手套，并在通风橱中进行。

1.10工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙型肝炎疫苗、卡介苗等)。工作人员要接受有关的潜在危险知识的培训，掌握预防暴露以及暴露后的处理程序。每年要接受一次最新的培训。人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案。

1.11禁止将无关动物带入实验室。2.无菌室安全操作规程

2.1无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面一次(拖布专用)，紫外线照射消毒30min以上，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫外线消毒30min。操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。

2.2无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

2.3无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，75％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。

2.4无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。2.5需要带入无菌室使用的器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

2.6工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75% 乙醇等消毒剂再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。

2.7无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟，灭菌后通无菌风至少30min以上人员才能进入。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌30分钟。

2.8供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用75％的酒精棉球消毒外表面。

2.9每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。2.10吸取菌液时，必须用移液器吸取，切勿直接用口接触吸管。

2.11接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。2.12带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液或巴氏消毒液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。

2.13如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。

2.14凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。2.15无菌室应每月检查菌落数。在层流无菌风开启的状态下，取内径90mm的无菌营养琼脂平板5个，分别放置无菌室四周及中央位置，开盖暴露30分钟后，倒置于36℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落/平皿，10000级洁净室平均不得超过3个菌落/平皿。如超过限度，应用臭氧发生器等对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。3.压力蒸汽灭菌器的安全使用操作程序：

3.1堆放：将需灭菌的物品予以妥善包扎，各包之间留有空隙，依次堆放在灭菌桶的筛板上，以蒸汽穿透，提高灭菌效果。需灭菌物品外需黏上高压指示胶带以检验灭菌温度是否达到要求。

3.2 加水：在锅体内注入生活用水，水位一定要超过电热管2厘米以上（不宜过多）；连续使用时，每次操作前，必须补足上述水位，以免烧坏电热管和意外发生。

3.3 密封：在每次使用高压锅前，都必须认真检查高压锅的出气伐和安全阀，确保其状态完好，如有故障，在故障排除之前不得使用高压灭菌锅。把堆放好物品的灭菌桶放在锅体内，盖上锅盖并锁紧。

3.4 加热灭菌：将灭菌器接通与铭牌一致的电源，按下电源开关，接通电源，指示灯亮，表示电源已正常输入本器，按下开始按纽电热管开始加热工作；非全自动的高压灭菌锅要注意排空空气，确保灭菌时高压锅内是饱和水蒸气，高压灭菌锅内灭菌期间工作人员需监视高压锅指示面板上的压力、温度和时间等。

3.5 开盖：灭菌结束后，切勿立即将灭菌锅内的蒸汽排出，否则：由于液体物品的温度未能下降，而压力蒸汽突然释放，会使液体剧烈沸腾，造成溢出或容器爆裂。应待压力表指针归零位后，方可开启锅盖。

3.6 灭菌后无菌工器具及培养基应存放于无菌区域（如灭过菌后的无菌室或生物安全柜内），无菌物品需有明确标识。

3.7 每年至少2次用嗜热脂肪芽孢杆菌作为生物指示剂检查灭菌效果并记录，指示物需放在不一达到灭菌的部位（如堆放物品的居中位置）。4.生物安全柜操作规程

4.1确认玻璃窗处于关闭位置后，打开紫外灯，对安全柜内工作空间进行灭菌。灭菌结束后，关闭紫外灯。安全柜使用前后均需灭菌。

4.2抬起玻璃门至正常工作位置。打开外排风机。打开荧光灯及内置风机。检查回风格栅，使之不要被物品堵塞。在无任何阻碍状态下，让安全柜至少工作10分钟。

4.3用消毒液彻底清洗手及手臂。穿上工作褂，戴橡胶手套并套在袖口上，如有必要的话，戴防护眼镜和防护面罩。

4.4按实验程序放入实验材料，要将工作区域内的污染物质与洁净物质分开放置。尽量将所需要的物品在正式操作前全部放入安全柜，但不要过载，不要挡住前后风口。4.5尽量避免使用可干扰安全柜内气流流动的装置和程序。在操作期间，避免随便移动材料，避免操作者的手臂在前方开口处频繁移动，尽量减少气流干扰。

尽量不要使用明火，接种环之类用红外灭菌器灭菌。

4.6在操作过程中，如果有物质溢出或液体溅出，在将物品移出安全柜前，要对其表面进行消毒，为防止安全柜内有任何残留的污染物，在安全柜工作过程中，就要将安全柜内表面全部消毒。所有接触了污染材料的物体，在从安全柜中取出前，要进行表面消毒。所有开口容器，从安全柜中拿出前要盖好。

4.7全部工作结束后，用70%的乙醇或适当的中性消毒剂，擦拭安全柜内表面，让安全柜在无任何阻碍的情况下继续至少工作5分钟，以清除工作区域内浮沉污染。

4.8关闭照明灯和安全柜风机。关闭玻璃门，打开UV灯消毒。灭菌结束后，关闭UV灯。4.9定期抬起工作区域下面板，擦拭或冲洗工作面底下空间。

5.标准菌株安全操作规程

5.1标准菌株由专人保管。保管人负责建立标准菌株目录；目录至少应包编号、菌株号、菌种名称、来源、购买日期、购买数量、保存方法等。

5.2标准菌株应做好标识后，保存于专用冰箱中。

5.3标准菌株不能随意转借其它单位或个人，需要时，须经实验室负责人批准后方可提供。

5.4必须在生物安全柜中进行标准菌株实验，操作过程中，不要穿戴巳经污染的防护性手套触摸门柄、仪器或污染区以外区域，避免扩大污染范围。

5.5试验结束后，操作过程中所有可能与生物危险物接触或被污染的试验器械和物品，能够高压消毒的必须高压消毒，不能进行高压消毒的物品，应使用有效的消毒剂消毒处理。

5.6 标准菌株传代原则上不超过5代。

6.微生物培养物废弃物安全处理程序

6.1 尽可能使用塑料器材代替玻璃器材,防止利器损伤。非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒。

6.2 禁止用手处理破碎的玻璃器具。装有污染针、利器及破碎玻璃的容器在丢弃之前必须应用次氯酸消毒液或其他有效药品进行消毒。

6.3 所有培养物、废弃物在运出实验室之前须经巴氏消毒液消毒处理或高压灭菌后,置于专门污物袋内，交由专业卫生处理公司处置。

6.4 实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒。

7、微生物实验室紧急事故处理办法

7.1刺伤、切割伤或擦伤。受伤人员应脱下防护服，清洗双手和受伤部位，使用适当的皮肤消毒剂进行消毒，必要时进行医学处理。同时记录受伤原因和相关的微生物，并保留完整适当的医疗记录。

7.2潜在感染性物质的食入。应脱下受害人的防护服，进行必要的医学处理。报告食入材料的鉴定和事故发生的细节，并保留完整适当的医疗记录。7.3潜在危害性气溶胶的释放（在生物安全柜以外）。所有人员必须立即撤离相关区域，暴露人员应接受医学咨询，同时立即通知实验室负责人和生物安全负责人。为了使气溶胶排出和使较大的粒子沉降，在一定时间内严禁人员入内，若实验室没有中央通风系统，应推迟进入实验室的时间，同时张贴“禁止进入”的标志。待气溶胶排出、较大的粒子沉降后，在生物安全负责人的指导下，清理人员穿戴适当的防护服和呼吸保护装备进行污染的清除。

7.4容器破碎及感染性物质的溢出。应立即用布或纸巾覆盖被感染性物质污染或受感染性物质溢洒的破碎物品，并倒上消毒剂。作用适当时间后，将覆盖物以及破碎物品清除，再用消毒剂擦拭污染区域。玻璃碎片应用镊子清理，已污染的布、纸巾和抹布等应放在盛放污染性废弃物的容器内。如果用簸箕清理破碎物，应对其进行高压灭菌或放在有效的消毒液内浸泡消毒。所有操作过程中要求戴手套。

若实验表格或其他打印或手写材料被污染，应将这些信息复制后，再将原件置于盛放污染性废弃物的容器内，按废弃物处理的方式进行处理。

7.5未装可封闭离心桶的离心机内盛有潜在感染性物质的离心管发生破裂。如果机器正在运行时发生破裂或怀疑发生破裂，应关闭机器电源，让机器密闭适当时间（如30min），使气溶胶沉积。如果机器停止后发现破裂，不开盖或立即将盖子盖上，并密闭（如30min）。同时应通知生物安全负责人。玻璃碎片应使用镊子，或用镊子夹着棉花进行清理。所有破碎的离心管、玻璃碎片、离心桶、十字轴和转子都应放入无腐蚀性的、已知对相关微生物具有杀灭活性的消毒剂内进行消毒。未破损的带盖离心管应放在另一个有消毒剂的容器中，消毒后回收。离心机内腔应用适当浓度的同种消毒剂多次擦拭，再用水冲洗后干燥。

清理时，应戴结实的手套（如厚橡胶手套），必要时在外面再戴适当的一次性手套。所使用的全部材料都应按感染性废弃物处理。

7.6在可封闭的离心桶（安全杯）内离心管发生破裂。所有的密封离心桶都应在生物安全柜内装卸。若怀疑在安全杯内发生破损，应松开安全杯盖子并将离心桶高压灭菌，也可采用化学消毒的方法进行处理。

7.7生物安全柜内生物危害溢出。等待至少5min，让安全柜充满气溶胶，清理时应穿戴实验服，安全眼镜和手套，且让安全柜继续工作。使用浸泡消毒剂的消毒纸巾吸附溢出物，进行消毒处理应保证一定的接触时间（至少20min）。并用同样的消毒纸巾擦拭安全柜内壁、工作台表面和柜内所有设备。按照正确的生物废弃物处理步骤处理被污染的物质，将可回收的被污染物品放入生物危害物回收袋或高压灭菌盘并且用报纸包起来，然后进行消毒或清理。用消毒剂对无法进行高压灭菌的物品进行至少20 min的消毒处理后再拿出安全柜。最后脱下个人防护服并放进污染物收集袋中进行高压灭菌处理。若所要清理的物品达到2级生物安全水平或者更高，应联系生物安全办公室负责人。