通路组织范文

通路组织范文（精选7篇）

通路组织 第1篇

1 材料和方法

1.1 实验动物

Ⅱ级SD雄性大鼠，体重为200～230 g，购自广州中医药大学实验动物中心。

1.2 试剂与仪器

链脲佐菌素(美国Sigma)，大鼠白蛋白测定试剂盒(美国Bethyl)，兔抗大鼠Smad2多克隆抗体(英国Abcam)，兔抗大鼠Psmad2多克隆抗体(美国chemicon)，抗兔生物素化二抗(深圳晶美)，即用型EliVisionPTM plus试剂盒(中国福州迈新)，垂直电泳仪(美国Bio Rad)，转膜设备(美国Bio Rad)。

1.3 动物分组

大鼠禁食16 h后将STZ(临用前以0.1 mol/L,pH4.2柠檬酸缓冲液溶解新鲜配置)按剂量60mg/kg体重一次性腹腔注射，于开始注射STZ后72h取大鼠尾静脉血测血糖，凡血糖≥16.7 mmol/L确定为糖尿病大鼠模型制作成功。造模成功后，再分3组：DM4W组(n=10),DM8W组(n=10),DM16W组(n=10)。对照组(n=10)腹腔注射等体积的枸橼酸缓冲液。每2周测1次血糖，确保糖尿病大鼠始终处于高糖状态。因DM16W组有2只大鼠因感染死亡，故DM16W组统计数为n=8。

1.4 标本的采集与检测

大鼠分别于实验0、4、8周和16周末称体重，单通道无创大鼠血压计尾部套囊加压法测血压，代谢笼收集24 h尿量，-20℃保存。按试剂盒说明书用ELISA法测定尿白蛋白水平。大鼠戊巴比妥钠麻醉后，剖腹，腹主动脉取血，全自动生化测定仪测定大鼠血肌酐水平。取肾，称肾重，一侧肾置液氮保存,供分子生物学检测，另一侧肾用中性甲醛固定，供病理组织学和免疫组化检测。

1.5 肾脏组织病理学检测

用中性甲醛固定，经脱水，透明，石蜡包埋，切片2μm，行HE、PAS、MASSON染色，光镜观察。

1.6 免疫组织化学

采用EliVision法。石蜡切片脱蜡至水;柠檬酸缓冲液沸水煮20 min修复抗原;3%过氧化氢灭活内源性酶;滴加一抗,4℃孵育过夜;滴加聚合物增强剂后滴加酶标抗鼠/兔聚合物;DAB显色;苏木素复染，中性树胶封片。

1.7 We s te rn blot

RIPA裂解液提取总蛋白，BCA法测蛋白浓度，12%SDS-PAGE胶电泳分离，电转至硝酸纤维素膜，5%脱脂牛奶封闭，一抗孵育，相应二抗孵育后显影曝光。

1.8 统计学方法

所有数据用表示，组间比较One way ANOVA方差分析，数据通过SPSS13.0统计软件处理，以P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠体重、肾体比、血压、血肌酐和尿蛋白水平比较

由附表可见,随着成模时间的延长，糖尿病大鼠体重有增长趋势，但到晚期体重反而减轻。肾体比均明显高于正常对照组(P<0.05),且随着病情的发展，有上升趋势;血压在正常组与各组糖尿病大鼠中差异均无统计学意义(P>0.05);血肌酐水平在正常组与DM4W大鼠差异无统计学意义(P>0.05)，与DM8W、DM16W组差异有统计学意义(P<0.05);24h尿白蛋白在各组糖尿病大鼠均明显多于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，且随糖尿病病程进展逐渐增多,差异有统计学意义(P<0.05)。

注：1)与正常对照组比较，P<0.05;2)与DM4W组比较，P<0.05

2.2 各组大鼠肾脏病理结果

HE、PAS、MASSON染色示正常组大鼠肾脏组织学结构正常,DM4W大鼠肾脏肾小管出现明显肿胀、变性，部分肾小管出现变性、坏死，炎性细胞浸润;DM8W出现肾小球及肾小管明显纤维结缔组织增生，系膜区扩张，炎性细胞浸润;DM16W肾脏出现局灶性纤维化。

2.3 We s te rn blot检测各组大鼠肾脏S ma d2、P s-ma d2蛋白表达水平

随着成模时间的延长，Smad2蛋白4周表达跟正常差异无统计学意义(P>0.05)，从8周起表达均明显多于正常对照组(P<0.05),Psmad2蛋白从4周开始即比正常组表达增多(P<0.05)，且随着糖尿病进展逐渐增加。Smad2活化比例也随着时间的延长呈上升趋势。见图1、2。

2.4 免疫组化检测各组大鼠肾脏S ma d2、P s ma d2蛋白表达水平

肾组织Smad2表达：正常大鼠肾小球内几乎无表达，DM4W鼠肾小球内也几乎未见表达，DM8W后可见系膜区阳性表达明显增多，呈递增趋势。见图3。Psmad2表达：正常大鼠肾小球核内未见表达，肾小管可见少量阳性细胞核表达，随糖尿病成模时间的延长，阳性细胞表达逐渐增多。见图4。

1)与正常组比较,P<0.0,2)与DM4W比较,P<0.05

3 讨论

众多周知，TGF-β/Smads信号通路活化在肾脏纤维化病程中发挥重要作用。研究表明AGEs可促进NRK52E细胞P-Smad2/3的核转位和表达[1]。Smads的活化机制包括TGF-β1依赖途径和TGF-β1非依赖途径，糖基化终末产物通过促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径激活Smads，介导糖尿病肾脏和心血管慢性并发症的发生[2]。血管紧张素Ⅱ亦可通过MAPK途径激活Smads通路,诱导结缔组织生长因子和细胞外基质过度表达，在糖尿病肾病中发挥着重要作用[3,4]。在瘢痕瘤中运用Smad2si RNA能明显抑制胶原的合成，减少细胞外基质的沉积，从而延缓纤维化的进程[5]。应用Smad2反寡义核甘酸能使高糖培养的人肾小球系膜细胞纤维蛋白和层粘连蛋白分泌减少[6]。高糖状态下，各种生理生化异常均可刺激TGF-β的合成，通过促进系膜基质的大量聚集，抑制其降解，导致其积聚。有研究指出：Smad2、3在肾脏纤维化过程中起着协同作用，TGF-β诱导人近端肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)和E-cadherin依赖于Smad3,而金属基质蛋白酶-2(MMP-2)表达依赖于Smad2[7]。

在本研究中，笔者用STZ诱导大鼠糖尿病肾病，大鼠体重、肾重/体重、尿蛋白水平等各项指标均较正常组大鼠明显增加[8]。光镜下肾脏的系膜基质增多，肾小球体积增大，基底膜增厚，符合糖尿病肾病的病理表现。对血压的检测结果示：糖尿病大鼠的血压与正常组无明显差异。这与文献报道的一致[9]。对DN大鼠肾脏Smad2蛋白表达水平的动态观察的研究结果显示：在正常大鼠体内均存在有少量Smad2、Psmad2蛋白的表达，4周时糖尿病大鼠体内Smad2并无明显增多，但Psmad2表达较正常组己明显增加，8周后糖尿病大鼠体内Smad2表达开始逐渐增加。推测：可能在糖尿病成模早期先有Smad2活化转位，之后Smad2蛋白表达逐渐增加，继而进一步增加Smad2活化转位。由此引起的信号扩大致Smad2活化转位在16周达到了高峰。这种变化趋势与各种生化指标如尿蛋白，肾体比和肾脏病理显示的纤维化进展程度一致。提示Smad2活化在糖尿病肾病纤维化进程中起着非常重要的作用。因此，笔者认为：在STZ诱导的糖尿病肾病肾纤维化进程中,Smad2活化-表达增多-再活化引起的信号扩大是导致糖尿病肾病肾脏纤维化进展重要的信号转导途径之一。

参考文献

[1]孙辽,余学清,祝胜郎,等.Ages对肾小管上皮细胞转分化、I型胶原合成及smad信号通路的影响[J].中国病理生理杂志,2006,22(12):2429-2433.[1]SUN L,YU XQ,ZHU SL,et al.Activation of smad signaling and collagenⅠsynthesis in NRK52E cells induced by advanced glycation end products[J].Chinese Journal of Pathophysiology,2006,22(12):2429-2433.Chinese

[2]LI JH,HUANG XR,ZHU HJ,et al.Advanced glycation end products activate smad signaling via tgf-beta-dependent and in-dependent mechanisms:Implications for diabetic renal and vas-cular disease[J].FASEB J,2004,18(1):176-178.

[3]RODRIGUEZ-VITA J,SANCHEZ-LOPEZ E,ESTEBAN V,et al.AngiotensinⅡactivates the smad pathway in vascular smooth muscle cells by a transforming growth factor-beta-inde-pendent mechanism[J].Circulation,2005,111(19):2509-2517.

[4]OKAZAKI Y,YAMASAKI Y,UCHIDA HA,et al.Enhanced TGF-beta/smad signaling in the early stage of diabetic nephropathy is independent of the at1a receptor[J].Clin Exp Nephrol,2007(1),11:77-87.

[5]GAO Z,WANG Z,SHI Y,LIN Z,et al.Modulation of collagen synthesis in keloid fibroblasts by silencing smad2with sirna[J].Plast Reconstr Surg,2006,118(6):1328-1337.

[6]吴丹,王秋月,陈黎明,等.Smad2反寡义核甘酸对高糖培养人肾小球系膜细胞分泌纤连蛋白、层粘连蛋白的影响[J].中华内分泌代谢杂志,2009,25(5):552-554.[6]WU D,WANG QY,CHEN LM,et al.Effects of antisense Smad2oligodeoxynucleotides on fibronectin and lamimin secre-tion of human renal mesangial cells incubated with high glucose[J].Chin J Endocrinol Metab,2009,25(5):552-554.Chinese

[7]PHANISH MK,WAHAB NA,COLVILLE-NASH P,et al.The differential role of smad2and smad3in the regulation of pro-fi-brotic tgfbeta1responses in human proximal-tubule epithelial cells[J].Biochem J,2006,393(Pt2):601-607.

[8]刘云,陈隽.不同糖代谢异常大鼠动物模型的建立[J].中国现代医学杂志,2007,15,1804-1807.[8]LIU Y,CHEN X.To develop rat models of different impaired glucose metabolism subcategories[J].China Journal of Modern Medicine,2007,15,1804-1807.Chinese

通路组织 第2篇

TGF-β常见3个亚型:TGF-β1、TGF-β2、TGF-β2、TGF-β3。TGF-β受体分三型:TβRⅠ、TβRⅡ、TβRⅢ。TGF-β主要通过跨膜的TβRⅠ和TβRⅡ发挥生物学作用。目前, 对TGF-β在细胞内Smad信号转导通路的研究较为深入[2]。Smad分三组:受体调节Smads (R-Smad) 、公用Smads (Co-Smads) 、抑制性Smads (I-Smads) 。TGF-β与其受体结合, TβRⅡ遂磷酸化TβRⅠ, 活化的TβRⅠ磷酸化R-Smads。R-Smads被磷酸化后, 与Co-Smads形成异源复合体, 在细胞核聚集, 并和Smad依赖性增强子序列结合或与其他转录因子、辅助活化因子及辅助抑制因子相互作用, 参与靶基因的调节。

现已发现, 丝裂原激活蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinase, MAPK) 通路参与TGF-β信号转导有3条[3]:c-Raf/EMK1/2/ERK1、SEK1/MRK4/7/JNK和MEKK1/MKK3/6/p38 MAPKs是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶, ERKs被丝裂原刺激活化, 调节细胞的生长和分化;JNKs和p38受体环境应激和炎症性细胞因子的刺激活化, 在细胞凋亡和细胞因子表达中起重要作用。活化的MAPKs至细胞核, 可磷酸化和活化转录因子, ERK的核靶是转录因子ELK-1, 而JNKs和p38的底物是c-jun、ATF-2和ELK-1。小G蛋白Ras和Rho蛋白Rac、cdc42是MAPKs活化的重要调节因子, 通过活化的GTP结合状态与非活化的GDP结合状态之间的交接而起作用;生长因子调控的Ras鸟苷酸交换因子活性使Ras与Raf结合, 通过MEK1活化ERK, Rac和cdc42控制JNKs和p38通路。

研究表明, TGF-β活化的MAPK通路有很强地致纤维化效应。Michael等[4]以显性失活结构和激酶研究证实, TGF-β诱导水貂肺上皮细胞Mvllu内快速而短暂的RhoGTP酶家族和Smad依赖性JNK活化以及其后持续的RhoGTP酶家族和Smad依赖性JNK活化, 活化的JNK在Smad3-SSXX基序以外磷酸化Smad3, 辅助其被TβRI活化及其核聚集;活化的JNK刺激激活蛋白1 (activate protein, AP-1) 的功能, 使Smad3-Smad4复合体与AP-1在靶基因PAI-1相互协同, 增强TGF-β诱导的PAI-1基因转录。在成纤维细胞中, TGF-β调节其增殖和ECM大分子的产生。Andreas等[5]用免疫复合物激酶分析揭示, TGF-β1刺激培养的胚胎大鼠成纤维细胞c-Raf1/MEK1/p44MAPK和p42MAPK的快速活化, 且活化不依赖于血小板生生长因子 (plateletderived growth factor, PDGF) 和碱性成纤维生长因子 (basic fibroblast growth factor, bFGF) 。Lstvan等[6]亦观察到, TGF-β1可增强NIH3T3成纤维细胞内ERK1活性, 并增加GTP与Rac的结合, 显性失活ERK1和小G蛋白Rac抑制TGF-β1对PAI-1和I型胶原增强子的作用, 表明Rac、ERK1至少参与了TGF-β1对PAI-1和Ⅰ型胶原增强子的上调作用及其促进ECM的合成与沉积。应用免疫沉淀激酶分析表明, TGF-β1诱导培养的人肺成纤维细胞IMR-90的bFGF蛋白表达和释放, 而bFGF的释放诱导了ERK的活性, 使PAI-1与DNA结合增加, 参与TGF-β介导ECM的改变或细胞的分化[7]。纤维连接蛋白是ECM的主要成分之一。Barbara等[8]研究显示, TGF-β2活化MEKK1/MKK1/JNK通路, 诱导人纤维肉瘤HT1080细胞纤维连接蛋白mRNA和蛋白的表达。

TGF-β是肾纤维化主要介导因子。Goumenos等[9]在培养人的肾小球系膜细胞中发现, TGF-β1诱导ERK活化, 促进α1 (I) 型胶原基因表达。Chen等[10]亦证明TGF-β1可诱导培养的肾小球系膜细胞ERK活化, 且可诱导p38MAPK的磷酸化, 活化的p38MAPK参与TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞促α1 (I) 型胶原基因表达。Sohnaper等[11]证实TGF-β1可诱导肌成纤维细胞和再生肾小管上皮细胞Ras/Raf1/MEK/p44MAPK和p42MAPK的快速活化, 在TGF-β1存在下活化持续, 且与bFGF或PDGF无关。据此认为Ras/Raf1/MEK/p44MAPK/p42MAPK有可能参与了TGF-β致小管间质组织纤维化过程。

软骨细胞分化时分泌一些软骨性的ECM, 主要是聚集蛋白聚糖。Watanabe等[12]观察到, 在小鼠软骨形成系ATDC5细胞, TGF-β除激活未分化细胞的Smad通路以外, 并引起ERK、p38通路快速、短暂的活化。这两条通路的活化都是TGF-β诱导的聚集蛋白聚糖基因 (Agc) 表达所必须的, 且TGF-β诱导的Smad1/2依赖性反应元件转录活化完全依赖ERK、p38MAPK通路的协同活化。在分化的ATDC1细胞内, ERK1/2、p38MAPK持续高水平磷酸化, 同时高水平表达Agc, 并无须Smad2、ERK1/2和p38抑制剂阻止Agc表达水平的增高, TGF-β却抑制ERK1/2、p38MAPK的高水平磷酸化。可见, 随着细胞的分化, Agc表达需ERk1/2、p38MAPK的高水平磷酸化, 而不再受TGF-β信号转导的诱导。

肝星形细胞是肝纤维化的主要细胞。已有资料显示, TGF-β可通过Raf1和MEK1活化大鼠肝星形细胞的Ras/ERK级联反应, 推测其可能与肝星形细胞引起的ECM沉积有关[13]。而Napoli等[14]研究显性失活Ras/ERK通路对胶原基因表达作用的结果是:显性失活ERK抑制胶原基因的表达, 但显性失活Raf1却刺激胶原基因表达。因此, 这是否与TGF-β调节的ECM沉积有关有待进一步证实。

组织器官纤维化是多因子多通路参与的最终结果, ECM合成和降解的调节对正常组织的稳定至关重要。研究TGF-β的MAPK通路及其对胶原基因表达和原胶蛋白合成、分泌及降解的作用, 对进一步认识组织纤维化发生的分子机制和指导临床治疗均有着重要的意义。

通路组织 第3篇

1 资料与方法

1.1 资料来源与分组

选择2009年11月至2010年12月在福建省妇幼保健院产科因胎位异常、胎儿窘迫、羊水过少、社会因素、可疑巨大儿行剖宫产术的足月未临产、胎膜未破的产妇60例,均排除妊娠并发症和内外科合并症,知情同意后纳入研究。经离体子宫平滑肌等长张力测定后分为宫缩乏力性产后出血病例组(排除因软产道损伤、胎盘因素、凝血功能障碍引起的产后出血,且离体子宫平滑肌自发性收缩活动力低于72.66g次/h的产妇)30例和对照组(同期无产后出血且离体子宫平滑肌自发性收缩活动力高于72.66g次/h的产妇)30例。两组产妇的年龄、孕周、产次、产前体重指数(BMI)及新生儿体重的比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

1.2 诊断及测量标准

产后出血的诊断标准参照乐杰主编的第7版《妇产科学》[2]。失血量测量方法采用称重法、羊水压积测定法。称重法:失血量(ml)=[胎儿娩出后接血敷料重(湿重)(g)-接血前敷料重(干重)(g)]/1.05(血液比重为g/ml)。羊水压积测定法:记录分娩过程中羊水和血的混合总量(负压瓶中事先放入肝素抗凝),测定血液与羊水混合液中血细胞比容(HCT),通过公式计算血和羊水混合液中的出血量。公式:血羊水中血量=总羊水和血混合液量羊水中HCT/产前外周血HCT。

1.3 研究方法

1.3.1 标本采集

所有研究对象在签署知情同意书后于剖宫产时(胎儿娩出后,预防性使用缩宫素前)切取子宫下段切口上缘平滑肌组织,剪取其中15 mm5 mm5 mm(避开钳夹部位)在0℃克-亨(Kreb-Henseleit,K-H)液[3]中洗尽血迹并保存于0℃K-H液中立即带回实验室,4小时内进行肌张力测定;另取1.0～2.0g,用冷0.9%氯化钠液漂洗后放置于2.0 ml冻存管中,立即放入液氮速冻后,转入-70℃低温冰箱中保存,用于蛋白的检测、总RNA提取和基因的检测。

1.3.2 离体子宫平滑肌张力测定

将电极刺激后有活性的肌条连于10 g肌肉张力换能器(成都仪器厂),采用等长张力测定方法,通过RM6240生物信号收集系统(购自成都仪器厂)记录其规律收缩后的波形20 分钟,再用510-7mol/L缩宫素液(上海市第一生化药业有限公司)诱导其收缩并记录,计算收缩频率、收缩幅度和收缩活动力。其中,肌条的收缩频率以每小时收缩的次数表示,收缩幅度以收缩波波峰的张力减去波谷的张力即峰峰值表示,肌条的收缩活动力=收缩频率收缩幅度,收缩潜能用缩宫素对子宫平滑肌收缩功能的诱导率表示,收缩潜能=(用缩宫素后收缩活动力-用缩宫素前收缩活动力)/用缩宫素前收缩活动力100%。

1.3.3 子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2 、p-P38及CX43蛋白的检测

采用免疫印记法(Western blotting):将100 mg冰冻组织用RIPA(购自北京普利莱基因技术有限公司)抽提总蛋白,匀浆,4℃,12000 g离心5分钟,取上清液分装于离心管中,采用BCA试剂盒(购自北京康为世纪生物科技有限公司)进行蛋白定量,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)(北京康为)电泳、转膜,免疫反应[一抗均购自英国Abcam公司、二抗HRP标记的山羊抗兔IgG(H+L)购自北京中杉金桥生物技术有限公司],化学发光,显影,定影,摄片。用凝胶定量分析软件(Gel-Pro Analyzer 4)读取IOD值,以目的蛋白的IOD值/内参的IOD值作为目的蛋白表达的相对量,p-ERK1/2、p-JNK1/2的表达相对量分别以p-ERK1和p-ERK2、p-JNK1和p-JNK2的表达相对量之和表示。

1.3.4 子宫平滑肌组织中CX43

mRNA的测定 应用TRIzol(购自美国Invitrogen公司)抽提子宫平滑肌组织中总RNA,置分光光度计测定其在260nm、280nm处的吸光度(A)值,计算总RNA浓度和纯度,并经1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。取2μg总RNA逆转录为cDNA,使用实时荧光定量PCR仪(美国MJ Research公司产品)进行定量检测。应用Primer5.0软件设计CX43和β-actin基因的引物和探针,委托大连宝生物工程有限公司合成。CX43基因引物序列:正向为5′-CACTAGCCATTGTGGACCAG-3′,反向为5′-CTAGATCTCCAGGTCATCAGG-3′,探针:5′-(FAM)ACCTTCAAGCAGAGCCAGCAGTCGT(Eclipse)-3′;扩增产物片段长度为86bp。β-actin引物序列:正向为5′-GACTACCTCATGAAGATCCTCACC-3′,反向为 5′-T CTCCTTAATGTCACGCACGATT-3′,探针:5′-(FAM)CGGCTACAG CTTCACCACCACGGC(Eclipse)-3′,扩增产物长度85bp。所用试剂均由TaKaRa公司提供,RT-PCR的反应条件和操作按说明书进行,结果以2-△△CT方法[4]进行相对定量分析。

1.4 统计学处理

所有测定计量资料数据以均数±标准差(undefined±s)表示,采用SPSS 16.0软件包进行统计学处理,两组计量资料之间比较采用成组t检验,同组样本药物处理前后计量资料的比较用配对t检验,两组率的比较采用秩和检验,收缩乏力诊断点的制定采用受试者工作特性曲线(receiver operating characteristic,ROC),相关性分析采用Pearson相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组产妇离体子宫平滑肌收缩功能及收缩潜能的比较

病例组产妇离体子宫平滑肌自发性收缩的收缩频率和收缩活动力均低于对照组(P<0.05),而收缩幅度均值虽低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。使用缩宫素干预两组离体子宫平滑肌后,病例组产妇离体子宫平滑肌的收缩频率、收缩幅度、收缩活动力和收缩潜能均低于对照组(P<0.01,P<0.05)。见表2,见图1。

根据两组产妇自发性收缩活动力制定宫缩乏力的诊断点,其ROC曲线下面积(AUC)为0.802,以收缩活动力为72.66g次/h作为判断宫缩乏力的截点,其灵敏度为86.7%,特异度为70.0%,此时Youden指数(Youden指数=灵敏度+特异度-1)达到最大值,是本研究中的最佳诊断点。

2.2 两组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、CX43蛋白及CX43mRNA表达量的比较

病例组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、CX43蛋白及CX43mRNA表达量均低于对照组(P<0.05,P<0.01)。见表3,见图2。

(1～4为病例组;5～8为对照组,以上样本均为两组中随机抽取)

2.3 相关性分析

两组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、CX43蛋白和CX43 mRNA表达量与离体子宫平滑肌自发性收缩活动力均呈正相关关系。见表4。两组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、CX43蛋白和CX43mRNA表达量,两两之间均呈正相关关系。见表5。

①P<0.05,②P<0.01

①P<0.05,②P<0.01

3 讨 论

3.1 宫缩乏力性产后出血产妇子宫平滑肌自发性收缩功能及收缩潜能改变

分娩期子宫平滑肌在机械牵张、神经介质及各种内分泌激素的作用下,收缩频率和收缩幅度显著增加。本研究结果显示,病例组离体子宫平滑肌自发性收缩的活动力显著低于对照组(P<0.05),主要表现为收缩频率的不同。用缩宫素诱导后,病例组离体子宫平滑肌收缩的频率、幅度、潜能均显著低于对照组(P<0.05),进一步用ROC曲线计算宫缩乏力的诊断点为离体子宫平滑肌自发性收缩活动力低于72.66g次/h,为本研究的分组提供了客观依据。

以往研究推测,宫缩乏力性产后出血产妇子宫平滑肌中缩宫素受体(oxytocin receptors,OTRs)数量减少,从而引起子宫收缩活动力及收缩潜能明显下降,导致产后出血[5]。Shugin等[6]研究表明,小剂量缩宫素可使子宫平滑肌收缩活动力增高、收缩频率增加,但10-8mol/L或以上浓度的缩宫素刺激1小时后可能导致OTRs脱敏化而出现收缩抑制情况[7]。研究还发现,这种通过受体间接调节子宫平滑肌收缩的机制与孕激素、PGS等有关[8]。

3.2 MAPK信号通路活化水平与宫缩乏力性产后出血

MAPK在磷酸化状态时具有活性,而在非磷酸化状态时没有活性。根据以往研究,MAPKs活化后可影响细胞内Ca2+浓度及pH值、调节基因表达、调节肌细胞增殖分化及影响细胞间交流等。本研究发现,宫缩乏力产妇子宫平滑肌中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、表达量均低于对照组(P<0.05;P<0.01),MAPKs的磷酸化水平降低,这与国外研究结果一致。如Ohmichi等[9]对产后小鼠进行研究发现MAPK信号转导通路磷酸化活化可诱导产后子宫收缩。由此说明MAPK活化与子宫缩收缩有关。本研究还显示两组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38表达量与其离体子宫平滑肌自发性收缩活动力均存在正相关关系,提示产妇子宫平滑肌中MAPKs磷酸化水平降低是影响子宫平滑肌收缩的因素之一。

ERK1/2信号通路是MAPK系统中最重要且经典的通路,Li等[10]研究表明,细胞核内的ERK1/2活化后介导肌细胞增殖,细胞质部分ERK1/2活化后可介导收缩调节和前列腺素合成。该通路还受收缩相关因子调节,形成收缩调节与被调节的作用环路。JNK1/2信号通路可被多种应激刺激、细胞表面受体等激活,Seongho等[11] 、Li等[12]研究认为,JNK的磷酸化在血管、气道及消化道平滑肌等的收缩中起重要调节作用,但在子宫平滑肌中的研究鲜见报道。P38的激活因素与JNK1/2通路大致相同,Larsen等[13]研究发现,p38信号通路活化,可通过磷酸化调节下游热休克蛋白27的活性而控制肌动蛋白聚合、介导肌动蛋白内部结构重组,参与平滑肌的收缩,还能磷酸化肌球蛋白结合蛋白、钙调(蛋白)结合蛋白等而参与平滑肌收缩。

3.3 CX43的表达水平与宫缩乏力性产后出血

CX是一个多基因膜蛋白家族,家族成员依其分子量不同而命名。6个CX亚单位围成连接子,2个连接子相对合构成GJ通道,该通道的开放为电冲动的传递提供低电阻通路。缝隙连接介导的细胞间连接通讯(gap junction intercellular communtication,GJIC)传递细胞间的电信号和化学信号,对细胞的生长、增殖、组织分化等起着重要作用。本研究结果显示病例组产妇子宫平滑肌组织中CX43 mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.05),且CX43 mRNA及其蛋白表达水平与离体子宫平滑肌条的收缩活动力均呈正相关,这说明CX43的表达可能参与宫缩乏力性产后出血的发生。CX43的数量和活性直接影响GJ通道的功能,且最近研究发现,CX43还能与水通道蛋白和游离型谷氨酸受体相互作用发挥功能[14],由此可知,CX43对子宫平滑肌收缩性的影响是通过多种途径实现的。而两组产妇子宫平滑肌中CX43表达水平的差异,可能与多种因子的调节有关,研究表明雌激素、孕激素、CRH、PKC活化因子等都可调节CX43mRNA和蛋白的表达[15,16,17]。

3.4 MAPKs三条通路活化水平及其与CX43表达水平的相关性

虽然并行的三条MAPKs信号通路有其各自的特异性,但本研究结果显示,病例组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-P38表达量两两之间均存在正相关关系。这可能与复杂的激活机制有关,如应激刺激可同时激活ERK1/2、JNK1/2和p38三条通路。研究表明三条MAPKs信号通路在下游信号的作用方面也存在整合[18],提示三条通路可能相互影响其活化状态,共同参与宫缩乏力性产后出血的发生发展。

本研究显示,两组产妇子宫平滑肌组织中CX43 mRNA及其蛋白表达水平均与p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38表达量呈正相关。Salameh等[19]研究发现,三种MAPKs蛋白活化抑制剂中的任一种都能显著抑制CX43的表达,与本研究结论类似。MAPK调节Cx43表达的机制可能是活化的MAPK触发了磷酸化级联反应导致各种转录因子的激活,激活的转录因子结合CX43启动区AP-1位点而凋节CX43的表达。此外,磷酸化也是MAPK调节CX43表达的重要途径。ERK1/2、P38等多种MAPK亚型与CX43磷酸化调节有关。CX43多位点氨基酸磷酸化状态,可影响CX43的含量、装配、分布与传导特性,从而改变GJ通道的通透性,参与宫缩乏力的病理过程。

总之,宫缩乏力性产后出血产妇子宫平滑肌中ERK1/2、JNK1/2、p38的活化水平及CX43的表达水平明显降低,且MAPKs的活化与CX43的表达水平密切相关,提示MAPK信号通路激活受阻、子宫平滑肌中CX43表达下降与宫缩乏力性产后出血的发生相关,两者可能共同和(或)协同参与宫缩乏力性产后出血的发生发展。

摘要：目的:分析宫缩乏力性产后出血产妇离体子宫平滑肌自发性收缩功能和收缩潜能的变化,并探讨子宫平滑肌组织中丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号转导通路活化水平和连接蛋白(CX43)表达变化与宫缩乏力性产后出血的关系。方法:选择2009年11月至2010年12月在福建省妇幼保健院产科择期剖宫产分娩的宫缩乏力性产后出血产妇30例为病例组,另选同期无产后出血产妇30例为对照组。采用等长张力测定方法检测产妇离体子宫下段平滑肌收缩功能和缩宫素诱导的收缩潜能;采用蛋白免疫印迹技术检测产妇子宫下段平滑肌组织中MAPK信号转导通路中的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-JunN端蛋白激酶(JNK1/2)、p38磷酸化蛋白和CX43蛋白水平;采用RT-PCR技术检测产妇子宫下段平滑肌组织中CX43mRNA表达。结果:①病例组离体子宫平滑肌自发性收缩的收缩频率、收缩活动力均低于对照组(P<0.05);缩宫素诱导后病例组的离体子宫平滑肌收缩频率、收缩幅度、收缩活动力和收缩潜能均低于对照组(P<0.05,P<0.01)。②以子宫平滑肌自发性收缩活动力72.66g·次/h作为诊断点,评估宫缩乏力性产后出血的ROC曲线下面积(AUC)为0.802。③病例组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、CX43蛋白的表达量和CX43mRNA的表达水平均分别低于对照组(P<0.05)。④两组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、CX43蛋白表达量以及CX43mRNA表达水平分别与其离体子宫的自发性收缩活动力呈正相关关系(P<0.05)。⑤两组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、CX43蛋白和CX43mRNA表达量相互两两之间均呈正相关关系(P<0.05)。结论:宫缩乏力性产后出血产妇离体子宫平滑肌收缩功能和收缩潜能明显降低,其子宫平滑肌组织中MAPK信号通路活化水平及CX43表达水平明显降低,且两者密切相关,提示MAPK信号通路活化受阻和CX43表达降低可能是宫缩乏力性产后出血发病的重要因素之一,两者相互调控共同参与该病的发生发展。

通路组织 第4篇

1 材料与方法

1.1 主要试剂

链脲左菌素(STZ)购自DAKO公司;αvβ6整合素抗体购自美国CalbioChen公司;TGFβ1的多克隆抗体购自Santa cruz公司;磷酸化Smad2/3多克隆抗体购自New Englang Biolabs公司;LSABR+System,HRP(DAB)和EnVisionTM+System,HRP(DAB)试剂盒购自DAKO公司。

1.2 实验动物及模型制作

小鼠糖尿病肾病模型制作方法[6]:2月龄雄性C57BL/6小鼠36只,体重25~35 g,购自中山大学北校区实验动物中心。将小鼠随机分成STZ诱导组30只[腹腔注射STZ 50 mg/(kg.d),连续5d]和对照组6只(腹腔注射相同体积的枸橼酸缓冲液),观察16周。各组于实验第0、4、8、12、16周处死检查。检测各时间点血糖、24 h尿白蛋白排泄率、血肌酐、肾小球体积、肾重/体重比值。肾组织以10%中性甲醛固定,石蜡包埋。以血糖大于或等于16.7 mmol/L为糖尿病诊断标准,AMDCC规定[7],在确诊2型糖尿病后,24h尿白蛋白排泄率(UAE)超过同性别同周龄对照组动物的10倍即为早期糖尿病肾病。

1.3 观察指标及方法

1.3.1 临床指标

血糖、24 h尿白蛋白排泄率、血肌酐、肾小球体积、肾重/体重比值。

1.3.2 肾组织病变程度分析

所有标本按常规方法固定,包埋,切片厚2μm,HE和PAS染色,光镜观察肾小球、肾小管-间质病理变化。

1.3.3 ανβ6整合素免疫组织化学染色

采用Envision法检测肾组织中ανβ6整合素的定位和表达。取5μm石蜡切片,常规脱蜡水合后,柠檬酸钠缓冲液(pH6.0)微波炉750W煮沸3 min,90 W11.5min后切片自然晾凉,用3%双氧水室温10min封闭内源性过氧化物酶,滴加10%山羊血清室温30min。将组织切片于150μg/m L(抗体稀释液稀释)的一抗孵育,4℃过夜;DAKO抗山羊二抗(1:200)孵育室温30 min;滴加辣根过氧化物酶标记的抗小鼠Envision多聚物,显色系统镜下掌握显色时间效果,室温1~10 min。最后加DAB-H2O2显色,苏木素复染,中性树胶封片,实验同时采用PBS代替一抗作为阴性对照。ανβ6整合素以肾实质及间质细胞浆内棕褐色颗粒为阳性。

1.3.4 TGFβ1和磷酸化Smad2/3免疫组织化学

采用LASB法检测肾组织中TGFβ1和磷酸化Smad2/3的表达。取4μm石蜡切片,常规处理后,滴加预阻断液室温30min;分别滴加兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体(1:200)和兔抗大鼠磷酸化Smad2/3多克隆抗体,4℃孵育过夜;滴加生物素化抗兔抗体(原液),37℃孵育45min,滴加辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素(原液),37℃孵育45min,最后加DAB-H2O2显色,显微镜下控制显色反应,苏木素复染,中性树胶封片,实验同时采用PBS代替一抗作为阴性对照。TGFβ1以肾实质及间质细胞浆内棕褐色颗粒为阳性,磷酸化Smad2/3以肾实质及间质细胞核内棕褐色颗粒为阳性。

1.4 实验结果的定量及统计学分析

ανβ6整合素和TGFβ1半定量分析:应用IBSA2.5图像分析系统显微镜200倍下随机选取20个肾小球和肾小管间质视野,按阳性信号所占百分比进行半定量评分后取均值;Smad2/3半定量分析:400倍下分别随机选取20个视野,计算每mm2肾组织阳性细胞个数后取均值,结果用表示。均数比较采用单因素方差分析。用SPSS for Windows11.5统计软件进行统计学处理。

2 结果

2.1 小鼠糖尿病肾病模型成功建立

我们成功地制作了小鼠糖尿病肾病模型[6]:腹腔注射STZ后,模型组小鼠均出现明显的多食、多饮、多尿和体重下降等糖尿病症状;血糖(BS)明显升高;24 h尿白蛋白排泄率(UAE)明显增加(超过同性别同周龄对照组小鼠的12-20倍);血肌酐(SCr)水平一过性增高,肾重/体重(KW/BW)比值增加;肾小球体积(volume of glomeruli)增大;肾小球细胞外基质(ECM)明显增宽,表明小鼠糖尿病肾病模型已成功建立。

2.2 糖尿病小鼠模型中肾组织ανβ6整合素的动态变化

免疫组织化学显示,正常肾组织有ανβ6整合素的基础表达(见附表,图1左)。糖尿病形成后ανβ6整合素的表达明显增加,遍布皮、髓质肾小管,肾小球亦有表达,于糖尿病形成后4周表达显著增高,并持续增加到第12周(见附表,图1右),之后然后表达逐渐减少,但仍明显高于对照组。

2.3 糖尿病小鼠模型中肾组织TGFβ的动态变化

免疫组织化学显示,正常肾组织TGFβ主要位于皮髓交界的肾小管,肾小球有基础表达(见附表,图2左)。糖尿病形成后4周,TGFβ的表达明显增加,遍布皮、髓质肾小球和肾小管,且表达量随肾纤维化的加重明显升高。第12周达高峰(见附表,图2右),然后表达逐渐减少,但仍明显高于对照组。

2.4 糖尿病小鼠肾组织磷酸化S ma d2/3(p-S ma d2/3)的表达和定位

免疫组织化学染色显示,对照组肾小球和肾小管细胞核内可见少量p-Smad2/3的表达(见附表,图3左)。随着糖尿病的进展,p-Smad2/3在肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞胞核及局灶浸润细胞核内的表达明显增高。于糖尿病形成后4周显著增高,并持续增加到第12周(见附表,图3右),第16周表达有所减少,但仍高于对照组。

注:1)与对照组比较,P<0.01;2)与其他时间点比较,P<0.01

2.5 糖尿病小鼠肾组织ανβ6整合素、TGFβ及磷酸化Smad2/3的表达之间的关系。

糖尿病鼠肾组织ανβ6整合素、TGFβ及磷酸化Smad2/3在各时点的表达均明显增高,表达时相一致,肾组织ανβ6整合素与TGFβ和磷酸化Smad2/3的表达均呈明显正相关(相关系数分别为:r1=0.86,P<0.01;r2=0.83,P<0.01)。

3 讨论

糖尿病肾病的标志是肾小球系膜区和肾间质细胞外基质(ECM)的积累。研究显示,糖尿病肾病发展过程中TGFβ1表达明显上调[8],在调节细胞外基质(ECM)产生过程中发挥重要作用[9]。哺乳动物体内成熟的TGFβ1与潜在相关肽(latency-associated ptotein,LAP)以非共价形式结合以维持TGFβ1处于潜在活化状态,须活化后才能与其受体结合产生效应[1]。

整合素是一组介导细胞黏附的细胞表面糖蛋白受体,由α和β亚组成异二聚体。αvβ6整合素是TGFβ1-LAP的配体,与TGFβ-LAP结合后即可活化TGFβ1[2]。αvβ6整合素在肺、皮肤和肾脏等器官发育过程中高度表达[10]。将αvβ6整合素基因转入小鼠体内,16.1%~27.0%转基因小鼠皮肤自发发生进行性纤维性慢性溃疡,损害部位TGF-β的表达明显增高,而野生小鼠皮肤无病变[11]。在博来霉素诱导的肺上皮细胞损伤模型中,敲除αvβ6整合素基因可以完全阻止肺纤维的发生[3]。提示,αvβ6整合素在肺及皮肤的纤维化发病中起重要作用。

本组先前的研究证实[12],糖尿病肾病中存在TGFβ/Smads信号通路异常活化并与肾纤维化密切相关。αvβ6整合素在糖尿病肾组织中是否有表达以及作用如何,目前未见报道。为此本组制作了小鼠糖尿病肾病模型,观察肾组织αvβ6整合素的表达情况及其与TGFβ/Smads信号通路活化的关系。结果发现,糖尿病肾组织中αvβ6整合素表达明显增高,并与TGFβ和磷酸化Smad2/3的表达一致并呈明显正相关。

在炎症状态或修复状态下(如慢性肾盂肾炎和移植肾排斥反应),αvβ6整合素的高表达与肾纤维化密切相关[4]。MA等[5]采用αvβ6整合素基因敲除小鼠制作单侧尿路梗阻模型(UUO),结果发现αvβ6整合素基因敲除可明显抑制梗阻肾肾组织TGFβ和PAI-1表达,抑制Smad2磷酸化,下调Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,减轻肾间质纤维化。我们的结果显示,糖尿病肾组织中αvβ6整合素的高表达与TGFβ和磷酸化Smad2/3的表达一致呈明显正相关。提示,糖尿病肾组织αvβ6整合素的高表达可能通过促进TGFβ活化增强TGFβ/Smads信号通路活性,促进肾纤维化的发生。

笔者正在动物体内和体外培养的肾小管及系膜细胞中阻断αvβ6整合素的生物学活性,进一步观察其对糖尿病肾病TGFβ/Smads信号通路活化和肾纤维化的影响,将为糖尿病肾病的防治提供理论依据和新的治疗靶点。

参考文献

[1]TAMAKI K,OKUDA S.Role of TGF-beta in the progression of renal fibrosis[J].Contrib Nephrol,2003,139:44-65.

[2]SHEPPARD D.Integrin-mediated activation of latent transforming growth factor beta[J].Cancer Metastasis Rev,2005,24(3):395-402.

[3]SHEPPARD D.Integrin-mediated activation of transforming growth factor-beta(1)in pulmonary fibrosis[J].Chest,2001,120(1):49S-53S.

[4]JORDAN A,KREIDBERG,JORDAN M.Integrins in kidney de-velopment,function and disease[J].Am J Physiol Renal Physiol,2000,279:233-242.

[5]MA LJ,YANG H,GASPERT A,et al.Transforming growth fac-tor-beta-dependent and independent pathways of induction of tubulointerstitial fibrosis in beta6(-/-)mice[J].Am J Pathol,2003,163(4):1261-1273.

[6]常巨平,祝胜郎,余学清,等.ERK1/2信号蛋白在糖尿病小鼠肾组织中的表达[J].中国病理生理杂志,2007,23(9):1804-1807.[6]CHANG JP,ZHU SL,YU XQ,et al.Expression and probable role of extracellular signal-regulated protein kinases in renal fi-brosis associated with diabetic in mice[J].Chinese Journal of Pathophysiology,2007,23(9):1804-1807.Chinese

[7]HAGIWARA S,MAKITA Y,GU L,et al.Eicosapentaenoic acid ameliorates diabetic nephropathy of type2diabetic KKAy/Ta mice:involvement of MCP21supp ression and decreased ERK1/2and p38phosphorylation[J].Nephrol Dial Transp lant,2006,21(3):605-615.

[8]HAN DC,HOFFMAN BB,HONG SW,et al.Therapy with anti-sense TGF-beta1oligodeoxynucleotides reduces Kidney weight and matrix mRNAs in diabetic mice[J].Am J Physiol RenalPhysiol,2000,278:628-634.

[9]孙辽,余学清,祝胜郎,等.AGEs对肾小管上皮细胞转分化、I型胶原合成及smad信号通路的影响[J].中国病理生理杂志,2006,22(12):2429-2433.[9]SUN L,YU XQ,ZHU SL,et al.Activation of Smad signaling and collagenⅠsynthesis in NRK52E cells induced by advanced glycation end products[J].Chinese Journal of Pahophysiology,2006,22(12):2429-2433.Chinese

[10]XIONG J P,STEHLE T,ZHANG R,et al.Crystal structure of the extracellular segment of integrin alpha Vbeta3in complex with an Arg-Gly-Asp ligand[J].Science,2002,296:151-155.

[11]HAKKINEN L,KOIVISTO L,GARDNERRT H,et al.Increased expression of beta6-integrin in skin leads to spontaneous devel-opment of chronic wounds[J].Am J Pathol,2004,164(1):229-242.

过剩产能新通路 第5篇

一、“产能过剩”的涵义及其特征

(一) “产能过剩”的涵义

“生产过剩”作为市场经济运行的必然产物, 一直成为人们关注的关键环节。“产能过剩”往往隐含在“生产过剩”之后, 成为潜在的问题。但是伴随着近年来部分行业产能过剩的集中释放, 宏观政策也越来越关注产能过剩的问题。

产能是指生产能力, “产能过剩”指总供给量与总需求量相比出现过剩, 即通常所说的供大于求的现象。伴随投资的持续高速增长, 一方面在短期积聚了巨大生产能力;另一方面, 在这些生产能力尚未充分加以利用时, 已经出现了产品价格下跌和企业利润急剧下降等问题。如果按照这种趋势发展, 一个非常可能的经济运行结果就是通货紧缩乃至经济衰退的全面展开。

(二) “产能过剩”的特征

1.“产能过剩”危害具有潜在性。

“产能过剩”则主要以产品的生产能力作为考察对象。“产能过剩”对经济造成的危害不仅具有现实性, 更具有潜在性, 即生产资料生产行业的产能过剩会为其下游行业的进一步生产过剩提供物质基础;消费资料生产行业的产能过剩则具有直接演变为生产过剩的潜在性。“产能过剩”的直接原因是投资规模过大或结构不合理, 未来可能形成的潜在生产规模和结构超过了符合市场有效需求的供给规模和结构。

2. 重化工业化是产能过剩形成的背景。

以汽车和住宅消费为核心的市场需求结构的升级, 使重化工业获得迅速发展, 工业化进程呈现出了重化工业化特征。在2005年底“产能过剩”表现较为突出的11个行业中, 绝大部分属于重化工业。重化工业的发展必然使整个生产链条大大延长, 使整个社会生产规模扩大。另一方面, 重化工业的资本规模大、投资周期长, 从而延长了产能过剩的存续时间。

3. 产业结构不合理是产能过剩的根本原因。

以产品结构为重点的产业内结构问题是我国长期以来产业发展的本质性问题, 尤其表现在各产业内的低技术水平、低附加值产品生产能力的大量过剩, 而高技术水平、高附加值产品生产能力的不足。尤为值得强调的是, 大量厂商规模小, 研发实力弱, 缺乏开展技术创新的内在动力, 导致各产业的产能过剩长期处于低水平状态。

4. 低价竞争是产能过剩的突出表现形式。

近年来, 我国出口保持高速增长, 贸易顺差持续扩大, 逐步树立起贸易大国的全新形象。尽管出口规模、结构和竞争力有了显著提高和改善, 但总体来看, 我国出口的高增长主要是依靠“量”的扩张实现的, 采取的是建立在内部资源消耗和外部资源依赖基础上的“粗放型”方式。随着市场竞争加剧, 在内需不振的情况下, 不少企业采取低价竞争的手段争夺国际市场, 低价出口便成为企业消化过剩产能的出路。这不仅造成出口秩序混乱、效益低下, 而且还容易遭致国外反倾销。目前, 出口低价竞争已成为困扰我国对外贸易发展的顽疾, 严重制约了出口的可持续增长。

二、“产能过剩”的治理机制

(一) 重建微观厂商结构是“产能过剩”治理的基点

在经济运行体系中, “经济人”假设是市场机制的基本前提, 厂商追逐利润最大化, 居民追逐效用最大化, 政府的基本任务则是制定竞争规则、提供公共产品和公共服务等。而我国现阶段, 地方政府在经济发展中的主导作用, 在某种程度上, 严重制约了市场经济意义上的厂商的发展。微观改革中应当尤为重视促进民营经济的发展壮大, 如大力发展民营经济为基点的新战略;放开投资领域准入限制, 对行政垄断行业, 改革行政审批制度, 完善市场准入制度;完善和调整民营经济融资体系, 支持民营经济拓宽融资渠道;建立发展民营经济所需要的社会化服务支持体系;民营经济要重视自身信誉的塑造, 并促使民营经济自身的制度改进。

(二) 产业深化是“产能过剩”治理的主线

产能过剩所反映的产业内结构性问题, 须遵循产业深化创新路径, 产业自身的纵深化发展, 即产业深化。在技术创新和技术进步条件下, 产业内部的结构分析即为产业深化分析。后进国家的产业深化是指国际分工客观存在背景下, 一国产业总体状态上或者某一产业内部的加工和再加工程度逐步纵深化发展, 实现高加工度化与技术集约化的趋势。产业深化的核心是技术进步, 内生增长理论为之提供了理论支持。产业深化概念的提出, 使发展中国家和发达国家在理论上实现产业发展伦理的平等, 也为现阶段从根本上化解“产能过剩”, 提高产业发展质量提供一个理论思路。

“产能过剩”治理过程中, 产业深化创新的推进至少应包括如下方面:第一, 构筑系统的产业深化理论体系, 并开展产业深化发展战略、产业深化政策、产业组织创新战略等方面的研究, 培育宏观决策层关于产业深化发展的战略意义意识和企业家通过产业深化创新取得市场竞争优势的意识。第二, 构筑促进以技术创新为核心的产业深化创新激励机制, 特别是在专利制度保护和R&D投入等方面要制定出有效制度。第三, 进一步加大国有企业改革和培育民营经济的力度, 弱化地方政府直接参与经济增长的角色。第四, 将产业深化政策独立为产业政策的重要组成部分, 并构造以产业深化政策为核心的宏观调控体系。

三、过剩产能转移新思路建立境外经济贸易合作区

(一) 境外经济贸易合作区建设的提出

境外经济贸易合作区是指在国家统筹指导下, 国内企业在境外建设的或参与建设的基础设施较为完善、产业链较为完整、辐射和带动能力强、影响大的加工区、工业园区、科技产业园区等各类经济贸易合作区域。

加入世贸组织过渡期结束后, 我国对外开放进入新阶段, 由单纯的“引进来”向“引进来”和“走出去”相结合, 商品和要素双向跨境流动阶段转变。“境外合作区是政府引导国内饱和产业向外转移与企业走出去’战略一拍即合的产物”。建立境外经济贸易合作区将成为政府鼓励企业走出去的重要举措。

(二) 境外经济贸易合作区的优势

1. 有效转移过剩产能, 解决出口低价竞争问题。

在2006年中央经济工作会议上, 胡锦涛总书记指出, “通过建立境外经济贸易合作区等方式, 有序转移竞争力强的生产能力。”

对于劳动密集型产品来说, 低价竞争的根本原因在于行业的技术水平较低, 自主创新能力较弱, 主要采取粗放方式扩大出口。一方面, 产品档次不高, 产品质量和性能落后, 造成国内企业国际竞争手段单一;另一方面, 国内企业目前尚不掌握国际市场的批发零售等主要渠道, 只能被动接受国外渠道商的订单, 在行业过度竞争的情况下, 企业竞相压价很难避免。同时, 由于我国缺乏对生产秩序的有效管理和控制, 一旦某种产品有利可图, 立即一哄而上, 纷纷上马, 很快出现投资过热。建立境外经济贸易合作区可以促使企业提高技术水平, 开发自主品牌和创新能力, 无疑将成为企业消化过剩产能的新出路。

2. 有利于降低成本, 规避贸易壁垒。

“海外建经贸合作区, 实现由中国制造’向世界制造’的转变, 可以有效避开国际贸易壁垒。”以康吉工贸在俄建立的乌苏里斯克经贸区为例, 俄罗斯缺乏制鞋产业链, 国内企业选择了将最后一道工序放在合作区。以正规通关计算, 一双半成品鞋出口关税为5%, 而成品鞋的关税则达到了15%, 这意味着关税下降了75%。以一双200卢布售价的鞋为例, 其总成本原为150卢布左右, 到俄罗斯生产之后, 关税的减少将带来每双鞋成本下降1520卢布, 总成本下降10%左右。

中国鞋变身“MADE IN RUSSIA”, 净利润增长四成。此前售价200卢布出头的一双鞋目前售价280-300卢布, 净利润增长了40%左右。这样算来, 目前走出去相比没走出去的鞋企, 其总成本下降了20%。

3. 有利于形成产业集群, 提高竞争力。

这样的模式既有利于推动中国企业集群式走出去, 也有利于东道国的产业集群。建立境外经济贸易合作区是商务部2006年启动的一项重点工作, 这些合作区可以促使广大中小企业集群式地“走出去”, 以减少出境成本, 也有利于我国政府对企业利益的保护。单个企业走出去很困难, 成本高, 人才缺, 而境外园区则可以帮助企业办理审批手续、劳工许可, 同时在财务、税收制度方面都能使企业容易符合当地的要求。境外园区的设立让企业能够“抱团”, 产生投资集群效应, 从而提升企业对海外投资的整体印象。

四、建立境外经济贸易合作区的几点建议

(一) 国家对境外布局提供宏观指导

在设立境外合作区时, 既要突出企业是园区建设的主体, 又要保持政府必要的指导, 防止一哄而上, 导致不必要的损失。同时, 在境外开发区布局方面要给予规划, 避免境外开发区的功能定位出现重复。设立境外的园区属于高层次的经贸合作, 首先要搞好政府与政府之间的协作, 其次要搞企业、园区之间的合作。而选择与我国关系好、政治局势稳定的亚非国家和地区, 如与朝鲜、俄罗斯、哈萨克斯坦、尼日利亚等国家进行合作, 可能会比较有利。当然, 具体选择的行业可以是多种多样的, 有能源、资源、农业、轻工、冶炼、电子等领域。

(二) 发挥比较优势, 提升竞争能力

设立海外园区, 既要考虑企业的积极性, 也要考虑它的比较优势。只有具备独特优势的企业在海外设立园区才能取得成功。比如, 海尔在海外市场打拼多年, 对海外的法规、文化等要素较为熟悉, 国际化的人才也比较多, 所以, 其投资海外园区可能会容易一些。商务部把对境外合作区的产业定位为“重点是国内生产能力较大、竞争优势较强的行业, 如纺织、轻工、机械、家电、建材等, 兼顾制造业其他行业, 如冶金、有色、石化、医药、农副产品加工等”。当然, 在拟进入的境外地区, 在经济不很发达、土地闲置、文化相似的亚非国家, 设立境外开发区获得成功的可能会比较大一些。

(三) 建立产业链条, 深化产业创新

中国企业进入海外市场面临的环境和形势已不同于当年的日本企业, 也不同于当年的欧美企业。多数中国企业是在国内市场充分开放和充分竞争的形势下走出去的, 面临着国内外市场的双重压力。而当年日韩企业走出去时, 因为它的国外市场还没有完全开放, 所以, 背靠国内市场, 谋求海外市场布局的形势也比较有利。中国企业在海外投资的最大风险是单兵作战, 各自为战, 缺乏产业集群和产业体系的支持, 很容易失败。因此, 在境外设立合作经贸开发区的最大好处是可以让中资形成海外产业链优势, 通过抱团出击海外市场, 以增加竞争优势。

(四) 争取良好的环境支持

中国企业搞海外开发区投资可能遇到的困难和问题, 也许是其在国内从来没有遇到过的。因此, 在开始时, 企业不能把摊子铺得过大, 要专注做细做好市场的每一个方面, 毕竟搞境外开发区建设, 不同一般的商品贸易, 也不同与一般的境外建厂, 这是中国企业没有先例的试验和创新, 在政策衔接、园区定位、国内招商等方面, 需要切实做细做好工作。获得中国政府和东道国政府的双重支持十分重要, 因为投资境外开发区属于长线项目, 而东道国的投资环境、产业政府、现行政策等和国内大不相同, 通过了解、融入和学习, 最后适应东道国环境, 并形成针对国内企业的竞争优势, 这是经营园区成功的前提。

摘要：伴随大量过剩产能在部分行业的集中释放, 在宏观政策和产业调整的过程中都受到越来越多的关注, 过剩产能带来的供过于求, 必将对市场经济运行产生周期性的影响。如何有效转移过剩产能具有建设性的理论与实践意义, 通过对过剩产能治理机制的分析, 建立境外经济贸易合作区是转移过剩产能的新思路。

关键词：过剩产能,低价竞争,治理机制,经济贸易合作区

参考文献

[1]杨丹辉.低价竞争:中国出口的顽症[N].中国经济时报, 2006-05-15.

[2]李江涛.“产能过剩”及其治理机制[J].国家行政学院学报, 2006 (5) .

品味——诗歌教学的重要通路 第6篇

笔者根据自己多年的教学经验，对古代诗歌采用品味的方式进行教学，应该是一个不错的选择。

一诗歌的文体特点决定了诗歌教学必须进行品味

何谓品味?品味者，品尝玩味也。从词源学上讲，品味本是指对食物的咀嚼、品尝其味道。用在阅读方面，是说读书就像吃美食一样，需要咀嚼玩味，这样才能深入准确地把握文章的内涵和美学特点。在中国文学批评史上就有一派读书的理论主张“涵泳”，“涵泳”意为沉于水中而潜行，“旧书不厌百回读，涵泳功夫兴味长”，通过沉浸于文学作品中来领会其内涵，“涵泳”其实就是品味。品味是这样的一个认知过程，先感受诗歌所描绘的一个个形象，然后揣摩形象背后的意义，最后把诸多的形象联合起来看它们共同指涉什么内容(主旨)。

诗歌被称为最凝练的语言艺术。它以较少的文字、短小的篇幅凝缩了丰富的思想情感内容。而且它又是通过形象的语言来凝缩的，而形象的语言在表意时又是模糊的，人们一眼不能看穿，所以形象的语言使诗歌所表现的思想情感就显得更为含蓄、深沉。一首五言绝句，虽短短四句，只有20个字，却能寄寓诗人丰富复杂的思想感情。且看唐代著名山水田园诗人王维的《辛夷坞》：

木末芙蓉花，山中发红萼。涧户寂无人，纷纷开且落。

这首小诗表达了什么样的思想情感呢?即使是有一定文化知识的人，可能也不是那么容易理解的。专门的诗歌研究者，他们对这首小诗内涵的理解也不尽相同。一般论者认为这首诗歌在描绘了辛夷花的美好形象的同时，又写出了一种落寞的景况和环境，表达作者政治上的苦闷和内心的矛盾。它是以花在无人的山涧自开自落的可悲命运，寄托自己才能被压抑埋没的感伤情绪。而笔者的理解是这首小诗表达了王维的色即是空的佛学思想。理由是王维是一个好禅礼佛之士，辞官归隐终南山，此诗正是归隐终南山之作，此时的王维已是淡泊名利，洞穿世事之人，他怎能还眷念红尘?此诗应看作禅理之作，美丽的辛夷花在山中热烈地开放，然而结果怎么样呢?结果是凋落。“纷纷开且落”，来得快，去得也快。一切如过眼云烟，名利、权势、美色都作如是观。

由以上例子看出，诗歌凝练而形象的文体特性决定了我们对诗歌的解读不能采用纯粹的理性认知方式，来把握诗歌的内容，而应该采用品味体悟的方式去接近诗歌的形象世界和情感世界。

二如何品味

1．品味语言

语言是所有文学的载体，是传情达意的工具。语言是思想情感的外壳，对文学作品内涵的把握就必须穿越这个外壳。对于诗歌来说，其语言跟其他文学体裁相比又很不一样，有其独特的特点，具体来说，诗歌语言具有形象性、跳跃性、隐喻性的特点。形象性和隐喻性使诗歌表达情感变得含蓄，跳跃性使诗歌句子之间的语意失去了明晰的因果链，因而对诗歌的解读就要咀嚼出形象背后的意义和捕捉因跳跃而留下的意义空白。那么怎样品味语言呢?

第一，理解词语，弄清词语的意义，包括主要词语和修饰语的意义。理解意义的时候，不仅仅要理解其字面含义和表层含义，还要挖掘其语境意义和深层含义。如杜甫的诗《江畔独步寻花》：

黄四娘家花满蹊，千朵万朵压枝低。留连戏蝶时时舞，自在娇莺恰恰啼。

这首诗前两句从正面写花，写出了花的多和茂盛。是怎么写出花的多呢?第一句中“花满蹊”，鲜花开满了小路，一个“满”字就传神地写出了花之多。又是怎么写出花的茂盛的呢?第二句中用了一个“压”字写出了花朵的茂盛。而后两句则从侧面写花，写出花的艳和美。通过“戏蝶”的“流连”“时时舞”和“娇莺”的“自在”“恰恰啼”来表现花吸引着蝶和鸟，从而更突出花艳、花美。

第二，把握词语的色彩。虽然说，诗人在情感的表达上是追求含蓄的，但不排除在有些诗歌中诗人的情感会情不自禁地流露出来。因而抓住那些富含情感色彩的词语，就能迅速地领会诗歌的主旨。如杜甫的《倦夜》：

竹凉侵卧内，野月满庭隅。重露成涓滴，稀星乍有无。暗飞萤自照，水宿鸟相呼。万事干戈里，空悲清夜徂!

诗歌前六句描绘诗人在深夜所见所闻的景象，我们很难感知诗歌表达的情感，但我们看到最后一联时便会恍然大悟，原来诗人彻夜未眠的原因，是为战火中的国家而忧虑、悲伤。一个“悲”字就把诗人的内心情感全部凸现出来了。品味诗歌，对那些标明诗人情感特征的字眼紧紧抓住，方能准确地把握诗歌表达的主旨。

2．品味形象

诗歌靠形象说话，形象是诗歌情感抒发的载体，形象是诗歌情感表达的密码。诗人就是通过形象的选择来进行编码，从而寄托自己的情感。诗歌中的形象(景物)我们称之为意象，它们在诗人表达情感时并不直接呈现情感，而是起暗示、烘托、隐喻情感的作用。而有些意象是有特殊内涵的，如“红豆”意味着相思和爱情，“月”意味着思乡、思亲，桑麻樵夫意味着田园和隐居等。如果对这些意象的特殊内涵不理解，就会影响我们对整首诗的主旨的理解。这就要求我们对形象进行品味，咀嚼出这些形象在诗歌中的作用和内涵，从而才能更加深入地理解诗歌的主旨和内涵。如白居易的《花非花》一诗全是形象的隐喻：

花非花，雾非雾。夜半来，天明去。来如春梦几多时，去似朝云无觅处。

花、雾、春梦、朝云这几个形象共同完成对诗歌主旨的凸现。那么这几个形象凸现了什么主旨呢?需要读者去品味这几个形象的暗示意义。似花却不是花, 似雾却不是雾, 像春梦一样短暂, 像朝云一样飘忽。两个否定的比喻和两个肯定的比喻一起描摹了诗人眼中的事物。这一事物究竟是什么呢?我们还得继续品味。似花却不是花, 看来这一事物跟花相似。那么相似点是什么呢?我们都知道, 花的特点是美丽, 于是我们得出这一事物像花般美丽。同理, 似雾却不是雾, 我们得出这一事物像雾般朦胧。加上这一事物“来如春梦”“去似朝云”的特点, 结合白居易的生平, 我们大致揣摩出这首诗写的是诗人与一位青楼女子的一次交往。借助形象, 诗人把自己的思想情感表达得如此含蓄。可见, 对诗歌主旨的把握不能不深入地品味形象。

3．品味情感

情感是一首诗歌的灵魂，是诗人着力要表现的中心。对一首诗的情感的把握是我们鉴赏诗歌最终的目标。如上文所述，诗歌语言的形象性、跳跃性、暗示性的特点决定了诗歌表达的情感含蓄而深沉，不可能一目了然，因而对诗歌情感的把握就应披文入情、披象入情，即在品味语言和品味形象的基础上去捕捉诗意和诗情。

第一，要做到为物体情。诗歌总是借助形象的描绘来寄托情志的，所以景物就是包裹情感的外衣。一个欣赏者就要好好体悟物象，由物之特点、之姿态、之品性来把握诗人寄寓的感情。且看杜甫的《春夜喜雨》：

好雨知时节，当春乃发生。随风潜入夜，润物细无声。野径云俱黑，江船火独明。晓看红湿处，花重锦官城。

诗中的“雨”是一个物象，诗人赋予了它一个美好的品性好。那么这春夜之“雨”又好在何处呢?首先表现在它“知时节”，懂得什么时候该下则下，于是它“当春乃发生”;其次表现在它的温柔体贴，它不在白天下，而是选择在夜晚悄悄下，于是“随风潜入夜”，它下得很细小，不是那种狂暴式的，于是“润物细无声”。多乖巧的春雨，多懂人情的春雨，多善良温婉的春雨!正是春雨这样的可人，诗人由衷地表现出了对它的热爱，所以题目冠以一个“喜”字。

第二，为人体怀。“诗言志”“诗缘情”这些古代的诗歌论题都道出了诗歌的基本特征，那就是抒情功能。常说诗歌是最个人化的一种文体，主要是指诗歌以抒发个人的情感为主。诗人在诗中抒发的情感总是在一定的时空背景下产生的。我们在欣赏一首诗歌的时候就应该设身处地地去体会诗人的情感状态或者诗歌所描绘的人物的情感状态。人同此心，心同此理，只有设身处地才能对诗歌所抒发的情感感受深刻。且看马致远的《天净沙秋思》：

枯藤老树昏鸦，小桥流水人家，古道西风瘦马。

夕阳西下，断肠人在天涯。

诗中的“断肠人”思乡之痛苦，思乡之悲凉我们如能设身处地去想一想，感受就会更加真切。一个秋天的黄昏，夕阳如血。一条寂寞的古道，两旁苍老的树上爬满枯藤，一只只耷拉着头的乌鸦栖落在树上。西风猎猎地吹拂，发出飒飒的声响。一个游子骑着一匹骨瘦如柴的老马在古道上蹒跚着，这时游子看见不远处有村落，小桥坐落，流水环绕，多么宁静而美丽，而故乡却在千里之遥，这怎不令人痛苦，怎不令人黯然销魂!

商业银行的内部营销通路 第7篇

1. 树立“以员工为中心,为员工服务,使员工满意”的内部营销观念。

内部营销起源于这样一个观念,即把员工看作是企业最初的内部市场。作为服务企业的银行,实际上同样也存在一个由其员工构成的内部市场。在银行的内部市场上,员工是银行的营销对象“客户”。银行的所有营销活动都要以员工为中心,即以发现员工的需求为起点,以满足员工的需求并使其感到满意为终点。与外部营销一样,银行在内部市场上能否使员工满意,不仅仅是依靠产品,还需要依靠更多的优质服务。为此,银行应彻底放弃长期以来充当员工“衣食父母”的角色,不再简单地把员工看作是来银行谋求温饱的“打工者”,更不能把员工当作只会服从命令和执行任务的“工具”;企业要主动扮演好“服务员”的角色,并在全行上下树立“上级要为下级服务、机关要为基层服务、领导要为员工服务、管理要为业务服务、全员要为客户服务和银行要为社会服务”的服务新观念。

2. 认真分析员工的需求。

各级主管人员要通过自己的服务让这些“内部客户”满意,就需要像对待外部客户一样,首先对其需求进行分析。心理学家马斯洛把人的需要划分为生理需要、安全需要、感情需要、尊重需要、自我实现需要五个层级,我们可以据此分析员工的需求状况。一般而言,员工有最基本的生理需求,包括工资、福利、劳动保护等;工作安全感的需求,如岗位的稳定、工作环境的安全;受尊重的需求,如工作成绩得到认可、对轻微工作失误和创新失败的宽容、赏罚公平、个人意见受到重视、接受职业培训、疾病和生活困难受到关怀等;个人成就感的需求,如被授予与能力相当的权力、提升、内部荣誉、社会荣誉等。不同类型、不同级别的员工对各种需求的侧重点有所不同。银行通过内部市场调研活动,可以了解和发现员工对当前工作的满意程度,找出影响员工满意度的关键因素,为银行制定有效的内部营销策略提供可靠的依据。员工对银行的需求是多层次、多侧面的,认识、把握和分析员工的需求,需要银行运用多种营销调研技术,如一对一的访谈、问卷调查、举行圆桌会议、实地观察、实验室观察等,从而深入了解员工的目标、能力、个性、价值观、潜在的恐惧和反抗、情感需求等。

3. 与员工有效沟通。

银行与员工的双向沟通是内部营销成功的关键。通过沟通,一方面能使员工了解银行的文化、价值观、经营思想和优良传统,以及工作目标、工作措施、工作条件和优势劣势,认识并接受独特的银行文化;另一方面,通过沟通,银行还可以了解员工对有关政策、制度、管理措施等方面的意见,了解员工认识上的差距,实施差别管理。与员工的沟通渠道有很多,既有口头的,如个别交谈和讨论;也有文字方面的,如内部文件和报刊;还有科技手段的,如手机短信和内部网络等。此外,召开每周业务例会也是实现员工之间、部门之间良好沟通的有效方法。对此,银行各级主管应适时进行组织协调,降低沟通层次,为员工提供良好的人际沟通环境。良好的人际关系氛围也是满足员工平等、被尊重等高级心理需求的重要途径,人际关系氛围的良好与否事关工作气氛、员工士气,进而影响员工的忠诚和事业发展。员工都有被尊重、自我发展等需求,如何营造人人平等、互相尊重的人际关系是提高员工忠诚度的环境保证。作为银行管理层,要正确对待员工需求,尊重员工,加强沟通,努力培养员工的团队意识。这样,员工对团队的归属感就会增强,员工之间的合作关系就会牢固,对企业的忠诚度就会提高。

4. 建立有效的激励机制,满足员工基本需要。

实施内部营销需要管理层制定科学的激励机制。一是物质激励。实行按岗定酬、按业绩定酬的分配方法,加大收入分配中与个人能力和工作业绩相匹配的薪酬比例。对于操作岗位来说,可按照工作量的大小和工作质量的好坏制定收入标准;对于信贷人员或客户经理来说,可按照个人业绩和效益制定收入标准;对于内部管理岗位来说,可按照岗位的技能含量、职责大小等制定收入标准等。通过收入分配机制,提升员工自我实现的愿望,从而提高工作的效率。二是精神激励。要营造一个具有工作丰富化、互相信任、关系融洽、志同道合的团队,给予员工更多决策的权利和展示个性的舞台,令其独立自主地完成工作任务;赏罚分明,客观评价工作质量,激发员工的积极性;提供培训晋升的机会,增强进取精神。

5. 高度重视员工的培训,满足员工发展的需要。

培训的目的,一是为员工发展的需要提供技术支撑,二是让员工了解所提供的各种服务和它们之间是如何相互协调的,使员工拥有必要、足够的为客户服务的技能。除了商业银行价值观念、行为准则及行为方式等共同的培训内容外,员工培训要有针对性,因为不同类型的人员在银行营销过程中的职责和作用不同,因此需要进行不同的培训。一线临柜人员和客户经理的培训尤其应该受到重视,因为他们直接接触顾客,银行的形象和服务质量主要是通过他们体现出来的。在对临柜人员和客户经理进行培训时,既要让他们充分理解和领会银行营销的总体目标,增强他们为顾客服务的责任感,又要注意培养他们同顾客打交道、与顾客建立良好关系的技能。使其具备完成工作所需的知识、技能和良好的服务态度,提高对客户需求的响应能力;对后台人员来说,培训的重点是加快其知识更新速度,增强工作的责任感和成就感;对支持人员来说,重点是要提高他们的市场和服务意识,建立内部顾客观念,把他们的活动统一到银行整体营销目标上来。

6. 适当授权,提高一线员工的责任感。